一种露地菊花瓣组织培养的培养基及方法与流程

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体是一种露地菊花瓣组织培养的培养基及方法。

背景技术：

露地栽培菊是东北林业大学的张敩方教授在引种地被菊和北京小菊的基础上，经过天然杂交、卫星搭载后选育的一个新的地栽小菊品种群。露地菊因花多而密，花期较长，植株低矮，容易繁殖而广泛应用于北方城市秋季绿化。自问世以来，就以其独特的植株低矮，开花繁密，耐粗放管理，兼具环境、社会、经济效益等优势而备受关注。

长期以来菊花通常采用分株、扦插等无性繁殖方法进行扩繁。但传统的繁殖方法周期长，占地面积大，劳动成本高，且繁殖系数低。随着市场需求的急剧增加，传统的繁殖方法已不能满足人们的需要。植物组织培养技术具有繁殖速度快、增殖效率高等特点，可以在较短的时间和空间上生产出大量的试管苗。而在外植体的选择上花瓣不仅病毒量少，而且其组织培养具有取材容易、易消毒、繁殖系数高的优点。因此，研发以露地菊花瓣为材料的组培快繁试验技术，对露地菊的工厂化生产具有重要意义。

技术实现要素：

有鉴于此，本发明提供了一种露地菊花瓣组织培养的培养基及方法。该培养基配方可显著提高露地菊的诱导率、分化率和生根率。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种露地菊组织培养的培养基，该培养基包括诱导培养基、分化培养基和生根培养基；

本发明菊花离体育种方法按下列步骤实现

取露地菊‘粉翎’的花瓣为外植体，经流水清洗1h。在无菌的条件下，将花瓣剪成长8mm的小块，接种在诱导培养基上。

诱导培养基为0.5～2.0mg/l6-ba，1.0mg/lnaa，30g/l蔗糖和8g/l琼脂的ms培养基,ph值为5.8。

将经过诱导形成的愈伤组织接种到分化培养基中。分化培养基为0～1.5mg/l6-ba，0.2mg/lnaa，30g/l蔗糖和8g/l琼脂的ms培养基，ph值为5.8。

将经过分化培养后的幼苗接种到生根培养基中进行生根培养。生根培养基为0.05～0.20mg/lnaa，30g/l蔗糖和8g/l琼脂的1/2ms培养基,ph值为5.8。

6-ba是6-苄基腺嘌呤,为人工合成细胞分裂素，具有抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质分解，保绿防老；氨基酸、生长素、无机盐等向处理部位调运等多种效能，广泛用农林和园艺作物从发芽到收获各阶段。

萘乙酸，简称naa，是一种植物生长调节剂中的生长素类似物，常用于扦插法繁殖时使用的发根粉或发根剂中。它也可用于植物组织培养。其作用是促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加座果，防止落果，改变雌、雄花比率等。可经叶片、树枝的嫩表皮，种子进入到植株内，随营养流输导到全株。

本发明将上述2种激素以特定比例添加到培养基中，制得诱导培养基、分化培养基和生根培养基，对露地菊花瓣外植体进行组织培养时，可显著提高露地菊‘粉翎’的诱导分化率、生根率，效果好于现有报道的培养基种类。

通过对以上技术方案进行实验找出最佳一种方法，用于权利要求。

附图说明

图1露地菊花瓣接种3d后的生长状况；

图2接种10d后形成的愈伤组织；

图3接种25d后形成的不定芽；

图4接种35d后不定芽分化的苗；

图5露地菊分化苗生根培养；

图6生根苗上盆培养。

具体实施方式

以下对本发明结合具体的实例作进一步的详细说明，并介绍本发明的相关研究结果。

1.以东北林业大学园林学院苗圃实验基地的露地菊‘粉翎’花瓣为例对本发明作进一步的详细说明。

以露地菊花瓣作为外植体，将选取的花瓣经流水清洗1h后，用滤纸将多余的水分吸干。用2％的次氯酸钠灭菌5min后，用无菌水冲洗6次，将花瓣剪成长约8mm的小块，接种在不同配比的诱导培养基上，每种处理接种30个外植体，20d后统计愈伤组织诱导情况。

1)以ms培养基为基本培养基，加入生长素naa0.2mg·l^-1，因6-ba浓度的不同设计了4组试验。

表1不同6-ba浓度对露地菊‘粉翎’愈伤诱导率的影响

2)以ms培养基为基本培养基，将上步得到的愈伤组织转接在诱导丛生芽的分化培养基上(每个处理接种30瓶)，因激素浓度和种类的不同设计了4组实验。培养2周左右,观察到愈伤组织表面陆续长出不定芽(见图3)。

表2不同6-ba浓度对露地菊‘粉翎’的愈伤组织出芽率的影响

3)以1/2ms培养基为基本培养基，因生长素浓度的不同设计了3种不同的生根培养基。将4cm高的苗切下来，转移到生根培养基(每个处理接种30瓶)，7d左右观察发现大部分试管苗根部开始分化出小根突，再过7d后看到约3～4cm长的根(见图5)。

表3不同naa浓度对露地菊‘粉翎’的试管苗生根率的影响

培养条件：培养基均以ms为基本培养，培养基含蔗糖30mg·l^-1，琼脂8mg·l^-1，培养基在高压灭菌前将ph值调至5.8；培养温度为25℃，光照强度为2000lx，光照时间为12h/d。

在试管苗高4cm，且长出根时将瓶口打开，炼苗3d后取出，洗净根部的培养基，移栽到土壤：蛭石：珍珠岩＝4：1：1的培养基质中。放置背光处，温度保持在20℃。

2.实验结果

1)由表1可知，4号培养基，即ms+2.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，愈伤组织诱导率最高，且愈伤组织结构松散，生长状况良好。

2)从表2可以看出，2号培养基，即ms+0.5mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，分化率最高，是诱导丛生芽的最佳培养基。

3)从表3可以看出，3号培养基，即1/2ms+0.05mg/lnaa，生根状况最好，生根率达100％，且根系发达、粗壮。

技术特征：

技术总结
本发明涉及组织培养技术领域，特别涉及一种露地菊花瓣组织培养的培养基及方法。该露地菊组织培养的培养基包括诱导培养基、分化培养基和生根培养基。诱导培养基为：2.0mg/L 6‑BA+1mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L琼脂的MS培养基；分化培养基为0.5mg/L 6‑BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L琼脂的MS培养基；生根培养基为0.05mg/L NAA+30g/L蔗糖+8g/L琼脂的1/2MS培养基。采用本发明提供的培养基配方及方法可显著提高露地菊愈伤组织诱导率、分化率及试管苗生根率。

技术研发人员：吴建慧;兰凤;牛喆;祁金洋
受保护的技术使用者：东北林业大学
技术研发日：2017.07.27
技术公布日：2017.09.29