一种昆虫病原线虫规模化培养的方法及培养装置与流程

本发明涉及生物培养
技术领域：
，更具体地，涉及一种昆虫病原线虫规模化培养的方法。
背景技术：
：昆虫病原线虫是一种新型的生物杀虫剂，这类线虫具有天敌昆虫兼病原微生物的双重特点，不但能像天敌昆虫通过化学感受器主动寻找和选择寄主，而且他们又都携带共生菌，在侵染寄主体腔的同时，随机释放共生菌，使寄主败血而亡。昆虫病原线虫作为生物杀虫剂，可以广泛应用于农、林、牧、卫生等方面的害虫防治，取得了明显的经济效益和社会效益。产业化昆虫病原线虫的培养方法已经从活体培养发展到离体培养，离体培养又从无菌培养到单菌培养。目前的现有技术中，昆虫病原线虫的规模化通过在铁盒中的固体培养基上单菌培养。其培养的规模有限，培养的铁盒装置占用空间大，培养前灭菌效率低，盒内接种不均匀及接种细菌感染率高。导致生产的产品昆虫病原线虫的效果欠佳，且批次培养规模较小，培养时间长，无法满足市场上对昆虫病原线虫的需求。本发明提供一种简便的昆虫病原线虫规模化培养的方法及培养装置，更大规模培养昆虫病原线虫，提高生产效率。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是针对现有技术中规模化培养的不足，提供一种昆虫病原线虫规模化培养的方法。本发明的目的通过以下技术方案予以实现：一种昆虫病原线虫规模化培养的方法，其特征在于，制备步骤包括：s1.制备培养基营养液，将培养基营养液灭菌，在灭菌的培养基营养液接种活化线虫共生菌，培育2～3天，接种昆虫病原线虫；s2.将海绵放入培养袋，压缩，灭菌；s3.将接种营养液装入培养袋中，静置培养；s4.将步骤s3培育的线虫和培养物浸泡在清水中，分离出海绵，静置，取下层液体。进一步地，步骤s1所述培养液包括：玉米粉4～8wt.％，豆粉3～7wt.％，猪油1～3wt.％，面粉4～8wt.％，虫粉8～12wt.％，余量为纯净水。优选地，玉米粉5wt.％，豆粉5wt.％，猪油1wt.％，面粉5wt.％，虫粉10wt.％，余量为纯净水。为线虫及共生菌的培养提供营养物质。进一步地，所述灭菌温度为100～120℃，灭菌时间为30～60min，将培养液、培养袋及海绵中的细菌除去，防止后续线虫的细菌感染，提高生产线虫的产率。进一步地，所述接种的昆虫病原线虫为侵染期线虫，侵染期线虫的适应性强，培养的存活率高。共生菌可刺激侵染期线虫脱鞘，加快线虫发育速度，有利于缩短线虫培养时间，有利于线虫的快速繁殖。进一步地优选地，所述营养液中接种昆虫病原线虫的密度为8～15尾/ml。进一步地，步骤s3中向通入培养袋一定量的灭菌空气或纯氧，提供线虫培养所需的空气。进一步地，步骤s3所述静置培养温度为24～26℃，培养时间为10～15天，可以达到平均一个海绵碎块的达到30万尾的线虫含量。进一步地，步骤s4所述静置时间为60～120min，保证线虫充分沉降，然后用干燥海绵碎块吸收下层线虫液体，低温保存。根据上述方法所述提供一种线虫培养装置，所述培养装置为可密封的培养袋，所述培养袋一侧有自封条，培养袋上有真空压缩气嘴及可闭合的进液口。所述真空压缩气嘴用于培养袋的真空压缩，培养袋的体积减小，利于大批量的灭菌操作，提高规模培养的效率。培养液通过进液口进入培养袋，减小了空气细菌感染率。压缩后的培养袋及海绵通过负压吸入接种营养液，接种的线虫分布均匀。进一步地，所述培养袋中的海绵为直径3～5cm的海绵碎块，海绵碎块可利于海绵间的气体流通，防止大块海绵中部线虫生存条件不适，海绵块太小则海绵间气体流通不畅。与现有技术相比，有益效果是：本发明通过压缩海绵及培养袋，可以提高装置的灭菌效率，进一步提高生产效率。所述的培养袋和海绵压缩处理后，接种的营养液通过负压灌入培养袋，所述的菌种分布更加均匀，培育时间缩短，所得产品的质量提高。本发明采用的培养袋通过进液口灌输，减小了现有技术接种时完全打开铁盒接种的细菌感染率。同时本发明采用的培养袋的成本低、占用空间小，在同等空间的培养，本发明的培养袋培养比铁盒培养的效率高出10～20倍，更易大规模化生产昆虫病原线虫。附图说明图1为培养袋的示意图。其中，1自封条，2进液口，3真空压缩气嘴。具体实施方式下面结合实施例进一步解释和阐明，但具体实施例并不对本发明有任何形式的限定。若未特别指明，实施例中所用的方法和设备为本领常规方法和设备，所用原料均为常规市售原料。实施例1一种昆虫病原线虫规模化培养的方法，其特征在于，制备步骤包括：s1.制备培养基营养液，将培养基营养液灭菌，在灭菌的培养基营养液接种活化线虫共生菌，培育2～3天，接种昆虫病原线虫；s2.将海绵放入培养袋，抽真空压缩，灭菌；s3.将接种营养液注入培养袋中，保证海绵碎块的膨胀及湿润，通入一定量的除菌空气，静置培养；s4.将步骤s3培育的线虫和培养物浸泡在清水中，分离出海绵，静置，取下层液体。步骤s1所述培养液包括：玉米粉5wt.％，豆粉5wt.％，猪油1wt.％，面粉5wt.％，虫粉10wt.％。所述灭菌温度为100～120℃，灭菌时间为30～60min。步骤s3所述静置培养温度为24～26℃，培养时间为10～15天。步骤s4所述静置时间为60～120min。所述接种的昆虫病原线虫为侵染期线虫，所述营养液中接种昆虫病原线虫的密度为8～15尾/ml。步骤s3中向通入培养袋一定量的灭菌空气或纯氧。步骤s3所述培养袋一侧有自封条，培养袋上有真空压缩气嘴及可闭合的进液口。所述真空压缩气嘴用于培养袋的真空压缩，培养袋的体积减小，利于大批量的灭菌操作，提高规模培养的效率。培养液通过进液口进入培养袋，减小了空气中的细菌感染率。所述培养袋中的海绵为直径3～5cm的海绵碎块。实施例2s1.将玉米粉5wt.％，豆粉5wt.％，猪油1wt.％，面粉5wt.％，虫粉10wt.％，余量为水，制备出培养基营养液，将培养基营养液灭菌，将培育的线虫共生菌接种至灭菌的培养基营养液，在25℃下培养2天，再接种昆虫病原线虫；s2.打开培养袋的自封条，将海绵塞入培养袋，闭合自封条，通过培养袋上真空压缩气嘴抽真空，闭合真空压缩气嘴，将培养袋放入灭菌箱中灭菌；s3.将s1所述的接种培养液通过培养袋的进液口灌入接种培养液于培养袋，通入一定量空气，闭合进液口；s4.将培养袋置于24～26℃条件下培养15天；s5.打开培养袋的自封条，将线虫及培养物倒入清水中，搅拌，捞出海绵，静置分离60min，收集下层沉降物，获得线虫；s6.将线虫注入干净的海绵中，在4～8℃下储存。通过测试，本发明培育一个海绵碎块的线虫约为30万尾，线虫的发育正常，生长阶段相同，具有侵染昆虫能力。本发明利用压缩海绵及培养袋，可以提高装置的灭菌效率，进一步提高生产效率。在灭菌过程中，以常规的灭菌箱为例，在铁盒及培养袋同等规格下，现有技术使用的铁盒批次处理5～6个，本发明批次处理80～120个，若得到灭10亩的农地或林地的昆虫，需要6铁盒培育，即1灭菌批次，而本发明的1灭菌批次可培养出供200亩的农地或林地的除虫害的病原线虫，大大提高了线虫生产效率及灭菌效率。本发明所述接种的营养液通过负压灌入培养袋，培养的菌种及线虫分布更加均匀，缩短培育时间，同时线虫的发育阶段处于同一阶段，提高线虫产品质量，通过培养袋进液口灌输接种的营养液，降低了与空气接触时的细菌感染率。实施例3将本发明所述方法生产的线虫与市场的杀虫剂农药的灭虫效果进行对比，将其喷洒至水稻(数量：100)。其枯鞘丛率结果如表1，枯鞘株率结果如表2：表1表2第1天第10天第20天第30天对照区0.62％3.317％2.586％2.893％施药区0.58％0.1156％0.0537％0线虫区0.601.925％0.112％0.0641％通过上述表1、表2得知，本发明所述方法制备的线虫生物杀虫剂有效的杀灭害虫，保护了环境，绿色发展道路，符合社会利益。显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。当前第1页12