枳壳提取物在制备尖孢镰刀菌抑菌剂中的应用的制作方法

本发明属于农药技术领域，更具体涉及枳壳提取物在制备尖孢镰刀菌抑菌剂中的应用。

背景技术：

百合(liliumspp.)是百合科百合多年生草本球根植物，主要分布于亚洲东部、北美洲、欧洲等北半球，全球已有上百个品种，中国是百合最主要的起源地，百合除了花姿优美外还具有药食兼用的功效。近年来随着百合栽培面积的不断扩大，病害的发生日趋严重，其中百合枯萎病是百合的主要病害。此病害是抑制百合生产的重要因素之一。枯萎病的发生和蔓延影响了百合的产量和品质。

百合枯萎病的是由尖孢镰刀菌引起的一种土传病害，目前主要用化学农药对百合枯萎病进行防治，根据安智慧等的研究发现40％菌核净可湿性粉剂、腈菌唑乳油、30％恶霉灵水剂、50％福美双对百合镰刀菌枯萎病均具有较好的抑菌作用。朱茂山等采用分生孢子萌发抑制率法及生长速率测定法运用13种化学农药对百合尖孢镰刀进行毒力作用，发现多菌灵、福美双、恶霉灵、己唑醇对分生孢子萌发的毒力作用强于其他药剂，而多菌灵、烯唑醇、霉灵3种药剂对菌丝生长毒力作用最强。

随着近年来对环境的不断重视和保护，开发一种对环境友好的绿色新型的生物农药，一方面能够保护环境减少对环境的污染和破坏，另一方面减少化学农药的施用能够提高产品的质量，减少产品的农药残留和重金属残留，为环境的可持续发展提供可靠的依据。

根据研究报道，已有很多种中药用于防治病害。目前人们在野生植物资源中发现了很多具有杀虫、杀菌、抗病毒的天然活性物质，由于这类农药具有高效、低毒、低残留、纯天然等特点，开发利用这些野生植物资源，制成植物源杀虫剂，杀菌剂等生物农药具有很有的市场潜力。

枳壳为芸香科柑橘属酸橙citrusaurantiuml.别名为酸橙、香橙、臭橙。常绿小乔木，其栽培变种的干燥未成熟果实，从中间部分横切为两瓣，晒干或低温烘干。味苦、酸、性微寒，具有破气、积滞内停、痞满胀痛、大便秘结、泻痢后重、散结化积、除脓消食等功能。主产于四川、江西、湖北、贵州等地。目前国内枳壳有22种左右，主要的商品为黄皮酸橙枳壳。

技术实现要素：

本发明的目的是针对现有的技术的空白，提供了枳壳提取物在制备尖孢镰刀菌抑菌剂中的应用，该应用是一种无污染、安全的、不易产生抗药性的防治百合枯萎病方法，适合大规模推广。

为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：

枳壳提取物在制备尖孢镰刀菌抑菌剂中的应用，包括以枳壳提取物为唯一有效成分或是有效成分之一制备成治疗或预防百合枯萎病的药物中的应用。

以上所述的应用中，优选，所述的枳壳提取物，其制备方法包括：将枳壳粉末加入至丙酮溶液，超声提取，过滤，滤液真空干燥即可。

与现有技术相比，本发明具有以下效果：

(1)枳壳提取物对百合枯萎病有明显的抑菌效果。

(2)用枳壳提取物进行大田试验，有较好的防治效果，防治效果可达67.5％。

(3)本发明的对尖孢镰刀菌有抑菌效果的枳壳提取物抑菌效果强、环境污染小、无残毒等特点。有效的避免了化学农药的危害。

(4)天然产物抗菌试剂的运用降低病原菌产生抗药性的可能。

(5)能够提高百合的抗性。

附图说明

图1为500mg/ml枳壳提取物对尖孢镰刀菌的抑菌效果图。

图2为阳性对照(800倍的80％的代锌锰森)对尖孢镰刀菌的抑菌效果图。

图3为空白对照(丙酮)对尖孢镰刀菌的抑菌效果图。

具体实施方式

本发明所述技术方案，如未特别说明均为本领域的常规方式，所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。本发明是以丙酮为溶剂的枳壳提取物进行的抑制实验；目前市售的枳壳提取物也可完成本发明。

实施例1：

枳壳提取物，其制备过程包括：

(1)枳壳粉末25g放置于烧瓶中，加入250ml丙酮溶液，放置于超声波清洗仪中超声30min，减压过滤；

(2)步骤(1)重复3次，将3次滤液进行合并，将滤液浓缩并真空干燥，得到枳壳提取物。以丙酮为溶剂，将上述提取物分别制备成浓度为500mg/ml、250mg/ml、100mg/ml、50mg/ml的溶液，用于以下实施例。

实施例2：

枳壳提取物在制备尖孢镰刀菌抑菌剂中的应用，应用过程如下：

(1)将pda培养基加热融化，冷却至50摄氏度左右；枳壳提取物0.5ml与9.5mlpda培养基混匀后制成带药的培养基备用，不同浓度的提取物都需重复三次实验，用0.5ml的丙酮与9.5mlpda培养基混匀后做空白对照，多菌灵稀释800倍0.5ml与9.5mlpda培养基混匀后后做阳性对照。

(2)将尖孢镰刀菌进行活化培养7天，以达到活性最佳，将培养好的尖孢镰刀菌用5mm的灭菌打孔器打成若干菌饼，将菌饼用接种环分别接种于上述培养基。放入恒温箱于28度恒温培养箱培养，培养7天后，测量菌落直径大小(图1～图3)。

(3)运用生长速率测定法分别测定上述不同浓度的枳壳提取物的抑菌活性，计算生长抑制率。

“4”为接种的菌饼直径。

500mg/ml枳壳提取物抑菌率为58.6％，250mg/ml枳壳提取物抑菌率为35.1％，100mg/ml枳壳提取物抑菌率为17.1％，50mg/ml枳壳提取物抑菌率为11.7％，800倍的80％的代锌锰森的抑菌率为29.7％。

枳壳提取物的最佳使用浓度是500mg/ml。

实施例3：

枳壳提取物的田间抑菌效果试验：

(1)将健康的龙牙百合种球用该水剂浸泡30min后种植在百合枯萎病发病严重的地块，以无菌水浸泡的健康的龙牙种球作为空白对照。

(2)百合出苗后进行常规的管理，不施用任何的肥料和农药，在30天内检测百合的发病情况，将苗连种球拔起、洗净、查看和记录百合枯萎病的病斑数量。

通过水剂浸泡健康百合种球后，该中药材对百合萌芽没有影响，与空白对照生长状况相当。但是发病情况相比空白对照来说，用该中药材水剂处理过的百合种球病斑明显减少，对百合枯萎病有明显的抗菌作用。对照百合的病斑数为8个，而经过处理的病斑数为2.6，相对抑菌率为67.5％。

可以减少化学农药的使用，以及对病原菌的抗药性，能够提高植株本身的抵抗力，从而间接提高了百合商品的质量。

技术特征：

技术总结
本发明属于农药技术领域，更具体公开了枳壳提取物在制备尖孢镰刀菌抑菌剂中的应用，研究发现，枳壳提取物对百合枯萎病有明显的抑菌效果，用枳壳提取物进行大田试验，有较好的防治效果，防治效果可达67.5%。本发明的对尖孢镰刀菌有抑菌效果的枳壳提取物抑菌效果强、环境污染小、无残毒等特点，有效的避免了化学农药的危害，可提高百合的抗性，适用于大规模推广。

技术研发人员：徐瑞;曹亮;周佳民;谢进;黄艳宁;宋荣;彭斯文;戴艳娇;朱校奇
受保护的技术使用者：湖南省农业环境生态研究所
技术研发日：2018.11.19
技术公布日：2019.02.12