本发明涉及包含至少一种化学杀真菌剂的配制剂，以及所述配制剂用于预防或减少至少一种由真菌病原体引起的植物疾病的传播的用途，和用于预防或减少至少一种由真菌病原体引起的植物疾病的传播的方法。
为了可以尽可能地使农业中的收获量最大化，需要尽可能好地保护农产品免于病虫害。这在所有农作物中，特别是在水果和蔬菜种植中具有重大的意义，并且为了保护所述栽培植物免于病原体侵害，常见的是用化学杀真菌剂喷洒或处理所述栽培植物，以便阻止植物病原体感染或减少其传播。此类化学杀真菌剂通常具有非常宽的应用谱并且不是特异性地针对单一病原体起作用，因此它们被非常广泛流行地使用。与如从抗生素已知的那样类似地，随着时间推移，病原体对于此类发挥杀真菌作用的化学物质发展出抗性或降低的敏感性，并且为了针对病原体侵害的治疗或预防而使用的化学杀真菌剂的作用越来越小，直至致病物质针对该喷雾剂具有如此的抗性，从而必须寻找新的物质。
除了随着时间推移它们发展出抗性或降低的敏感性这一问题外，化学杀真菌剂还具有这样的问题，即在施加至待处理的植物后，它们至少部分地到达土壤中，由此可能发生污染，并且除了所述污染外，还有其他微生物(其处理或预防在这种情况下完全不是有意的)同样可能对于这些化学杀真菌剂具有抗性。以这种方式，出现了不希望的效应，即不仅目标生物(病原体)，而且非目标生物(其通过使用各自的化学杀真菌剂进行的处理原本不是有意的)均可能具有抗性。这可能导致，这些非目标生物在其方面完全未被认识到地形成抗性或降低的敏感性，和然后在需要的情况下不能用常规的化学杀真菌剂进行处理或者处理不随之带来所希望的结果。
经这样处理的植物，水果或蔬菜后来到达有用动物和人的食物循环中，并且可能由于未知的杀真菌剂负荷而造成大的损害，通过例如形成第二种抗性。
此外，对于使用化学杀真菌剂的公众看法越来越负面，这是因为人们根据其逐渐增长的关于化学杀真菌剂的作用方式和过度使用的后果的知识而将会拒绝使用它们并且尽可能地压制使用它们，这使得需要寻找替代品。
除了使用化学杀真菌剂外，一段时间以来已经知晓使用生物学杀真菌剂，其具有下述优点，即病原体不会对于这些生物学杀真菌剂形成抗性。是否以及到何种程度可以把生物学试剂的效应与化学杀真菌剂的效应相提并论取决于具体的所使用的生物学药剂或生物学混合物以及具体的病原体(针对其应当取得效应)，以至于对于每种个别情况，需要许多的测试和研究。
从de69919762t2中知晓了用于在有用植物上对抗植物病原体疾病的杀真菌组合物，其中使用了两种发挥杀真菌作用的物质的组合，以便以这种方式实现协同杀真菌效应并由此能够降低所使用的杀真菌物质的总量。
此外，从ep0930824b1中可得知一种混合物，其主要由植物大虎杖(reynoutriasachalinensis)的调制品以及氮肥组成，该混合物可用于防止由植物致病性真菌引起的侵害和用于对抗植物致病性真菌。而且在这种混合物的情况下，应当降低所施加的活性物质的总量。
最后，从wo99/62341中得知一种保护性和治愈性的组合物以及相应的组合物，其应当以生物学方式治疗植物疾病，其中所述组合物特别地被考虑用于在收获后使用。在此，这样的组合物至少包含一种发挥拮抗作用的微生物和一种特别是生物学的抗真菌剂，例如酶。
最后，r.castoria等人(postharvestbiologyandtechnology22,第7至17页,2001)描述了出芽短梗霉(ls-30)作为致病物质的拮抗剂对于在收获后由所述致病物质所侵害的果实的效应，其中确定，在各种各样的植物中，出芽短梗霉显示出显著的针对灰葡萄孢(botrytiscinerea)、扩展青霉(penicilliumexpansum)、匍枝根霉(rhizopusstolonifer)和黑曲霉(aspergillusniger)的拮抗效用。因此，尤其用出芽短梗霉(ls-30)处理了苹果伤口，并且为了比较，仅用水处理伤口。这些结果表明，出芽短梗霉具有良好的针对真菌性苹果腐烂病原体的拮抗效用。
wo2008/114304描述了与辅助剂丙酸钙和具有大豆油的丙酸钙一起或者与杀真菌剂腐霉利一起使用出芽短梗霉菌株以在葡萄中对抗灰葡萄孢。然而，既没有测试由单独的出芽短梗霉菌株组成的组合，也没有测试由出芽短梗霉菌株与杀真菌剂咯菌腈或者嘧菌环胺、咯菌腈的混合物组成的组合。
最后，在biofa公司的主页[http://www.biofa-profi.de/de/b/blossomprotecttm.html？file＝files/content/prdukte/blossomprotecttm/blossomprotectprodukthandbuch2012.pd]上已经提议了由嘧菌环胺和出芽短梗霉dsm14940和dsm14941组成的组合。然而，从同样在该文献中所包括的可混合性列表中可得知许多化学杀真菌剂，其由于它们与包含出芽短梗霉dsm14940和dsm14941的产品blossomprotecttm和boniprotecttm的不可混合性而无法用于在该文献中所描述的配制剂中。
尽管有这些知识，但是继续存在提供其他有效的杀真菌剂或杀真菌混合物以供使用的需求，用所述杀真菌剂或杀真菌混合物可以明显地降低化学杀真菌剂的使用量，并且此外用所述杀真菌剂或杀真菌混合物可以实现相比于使用单一物质(即不仅至少一种化学杀真菌剂，而且至少一种生物学活性物质)而言明显的经改善的效应。
为了解决该任务，根据本发明的配制剂主要以此为特征，即除了所述至少一种化学杀真菌剂外，还包含至少含有出芽短梗霉(aureobasidiumpullulans)菌株dsm14940和dsm14941的混合物，其中所述至少一种化学杀真菌剂以及所述出芽短梗霉菌株的菌株混合物以协同发挥作用的量存在于所述配制剂中；并且所述至少一种化学杀真菌剂选自咯菌腈或者包括咯菌腈和至少一种第二化学杀真菌剂的组合。通过除了所述至少一种化学杀真菌剂外，所述配制剂还以协同有效的量包含至少含有菌株出芽短梗霉dsm14940和dsm14941的混合物，成功地取得了比当单独地或分开地使用单一物质时更好的杀真菌效应。最后，以这样的程序，成功地撤除或阻止了对于由咯菌腈或者包括咯菌腈和至少一种第二化学杀真菌剂的组合组成的化学杀真菌剂的抗性(这在其单独使用的情况下已被观察到)，并因此令人惊讶地再次明显地改善了杀真菌剂的作用方式。所述组合物在预防真菌病原体的情况下是特别有效的，所述真菌病原体至少针对在所述配制剂中的化学杀真菌剂中的至少一种具有抗性或降低的敏感性。“特别有效”意味着，相比于单一物质而言，所述配制剂的协同系数大于1.1。
术语“配制剂”是指准备好的溶液或悬浮液，其包含所有单一物质，即至少一种化学杀真菌剂和所述两种出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941，并且其被直接施加至植物。典型地，配制剂是水性溶液或悬浮液，也被称为桶混物，其通常在施加至植物之前进行混合。在这种情况下，在桶中给以浓缩的液体或固体形式的单一物质或组分掺入水，并且溶解或悬浮。在这种情况下，将单一物质或组分分开地，还是作为由至少一种化学杀真菌剂和所述两种出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941组成的经浓缩的预混物，引入到桶中，掺入水，并且溶解或悬浮，是无关紧要的。在这种情况下，将水和单一物质或组分或者预混物引入到桶中所采用的顺序是无关紧要的。在这种情况下，将单一物质或组分或者经浓缩的预混物例如以1:10、1:100、1:1000或1:10000的倍数在桶中进行稀释，以便达到在组合物中的有效浓度。令人惊讶地，用本配制剂现在成功制备了咯菌腈或者咯菌腈和嘧菌环胺与所述两种出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941的混合物，尽管已知的包含这些菌株或该化学杀真菌剂的产品在文献中被描述为不可混和(参见作为[http://www.biofa-profi.de/de/b/blossomprotecttm.html？file＝files/content/prdukte/blossomprotecttm/blossomprotectprodukthandbuch2012.pd]的附件的可混合性列表)。
术语“化学杀真菌剂”是指化学的杀真菌的活性物质，特别是嘧菌环胺(cas-no.121552-61-2)、咯菌腈(cas-no.131341-86-1)、环酰菌胺(cas-no.126833-17-8)、胺苯吡菌酮(fenpyrazamine)(cas-no.473798-59-3)、嘧霉胺(cas-no.53112-28-0)，优选地嘧菌环胺和咯菌腈，其中强制性地至少包含咯菌腈作为在所述配制剂中的至少一种化学杀真菌剂。
术语“真菌病原体”在此是指在其宿主中引起疾病的微生物。真菌病原体在此优选地为下述微生物：明孢盘菌属物种(neofabraeaspp.)，特别是腐皮无柄盘菌(peziculamalicorticis)(dsmz62715)，和葡萄孢属物种(botrytisspp.)，特别是灰葡萄孢(botrytiscinerea)，其在水果作物、制酒作物和蔬菜作物，特别是苹果、葡萄、草莓和葫芦科植物例如密生西葫芦和食用南瓜中引起疾病。
特别良好的协同效应通过下述方式来实现：在所述配制剂中以协同发挥作用的量包含所述至少一种化学杀真菌剂以及至少含有菌株出芽短梗霉dsm14940和dsm14941的混合物。令人惊讶地已表明，使用或应用化学杀真菌剂(至少包括咯菌腈)和含有至少两种相互不同的出芽短梗霉菌株(即dsm14940和dsm14941)的混合物显示出明显更好的(特别是协同的)效用，这与应用所述两种出芽短梗霉菌株中的仅一种和所述化学杀真菌剂相反。所述两种出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941相互的细胞数量比在此选自2:1和1:2之间，特别是1:1，从而使得还可容易地制备相应的混合物。
所述配制剂的特别可靠的(特别是协同的)效应通过下述方式来取得：如果出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941各自以1×105至1×108个细胞/ml配制剂，优选地1×106至2×107个细胞/ml配制剂，优选地1.67×106至3.33×106个细胞/ml配制剂，特别优选地2.5×106个细胞/ml配制剂的浓度存在。通过各自以1×105至1×108个细胞/ml配制剂，优选地1×106至2×107个细胞/ml配制剂，优选地1.67×106至3.33×106个细胞/ml配制剂，特别优选地2.5×106个细胞/ml配制剂的浓度包含出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941，在应用该配制剂的情况下，成功安全且可靠地抑制由各种不同的真菌病原体(其尤其选自由下列各项组成的组：明孢盘菌属物种，特别是腐皮无柄盘菌(dsmz62715)，和葡萄孢属物种，特别是灰葡萄孢，链核盘菌属物种(moniliniaspp.)，青霉属物种(penicilliumspp.)，刺盘孢属物种(coletotrichumspp.))引起的腐烂，特别是阻止由果实外伤引起的腐烂斑的扩大。
根据本发明的一个进一步实施方式，所述配制剂如此来形成，即所述化学杀真菌剂选自咯菌腈(cas-no.131341-86-1)，并且至少一种第二化学杀真菌剂选自由嘧菌环胺(cas-no.121552-61-2)、环酰菌胺(cas-no.126833-17-8)和胺苯吡菌酮(cas-no.473798-59-3)、嘧霉胺(cas-no.53112-28-0)组成的组。
特别优选的是由咯菌腈和嘧菌环胺组成的组合。特别地，嘧菌环胺或咯菌腈目前已经显示出明显受限的针对真菌病原体的效用，这是因为真菌病原体已经发展出了对于这两种活性物质的抗性。令人惊讶地可以表明，当在根据本发明的配制剂中包含化学杀真菌剂咯菌腈和嘧菌环胺的组合时，可以抑制所述抗性，并且所述物质(即使当它们以低浓度被包含在所述配制剂中时)可以发挥其完全的针对真菌病原体的效应。
根据本发明的一个进一步实施方式，在此所述配制剂如此来形成，即作为协同发挥作用的量，以0.00375g/l配制剂至5g/l配制剂，优选地0.02g/l配制剂至1.0g/l配制剂，特别地0.1875g/l配制剂至0.375g/l配制剂的浓度包含嘧菌环胺，并且以0.0025g/l配制剂至5g/l配制剂，优选地0.01g/l配制剂至1.0g/l配制剂，特别地0.125g/l配制剂至0.25g/l配制剂的浓度包含咯菌腈。所使用的化学杀真菌剂的量首先取决于所述真菌病原体对于所述至少一种化学杀真菌剂已经具有抗性还是具有减弱的敏感度或敏感性。当在所述配制剂中以给定的量包含所述化学杀真菌剂嘧菌环胺或咯菌腈时，尽管低的所包含的量，但是它们仍可以完全发挥其针对真菌病原体的效应，并且令人惊讶地，对于与出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941相组合的这些已知的化学杀真菌剂，真菌病原体显示出没有或降低的抗性或者敏感性。此外，包含由出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941组成的混合物的根据本发明的配制剂显示出协同效应，以至于用比各个单一物质或组分的使用量(其对于实现同样良好的效应来说是所必需的)之和明显低的使用量，发现就足够了。
在本情况下，协同效应是指至少一种化学杀真菌剂与所述两种出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941的混合物的组合相比于下列情况而言的杀真菌效应的超加和性增加：a)仅应用所述至少一种化学杀真菌剂，或b)仅应用所述两种出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941的混合物，或c)与所述两种出芽短梗霉菌株dsm14940或dsm14941中的仅一种一起应用所述至少一种化学杀真菌剂。同样令人惊讶地，将出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941单独地与化学杀真菌剂相组合地进行使用，或者将常规的出芽短梗霉菌株(ap241和ap298)相互的或与所述两种出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941之一的混合物与化学杀真菌剂相组合地进行使用，没有显示出协同效应。对于协同效应的数学计算，如在colby等人(weeds15,第20至22页,1967)中那样来进行，其中将大于1的协同系数视为协同效应存在的确证。
最好的效应可以通过下述方式来取得：根据本发明的配制剂主要以此为特征，即嘧菌环胺和咯菌腈以2:1至1:2，优选地2:1至1:1，特别地1.5:1的重量比存在于所述配制剂中。通过在所述配制剂中除了两种生物学杀真菌剂(＝出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941)外还使用两种化学杀真菌剂，不仅实现了针对真菌病原体的广谱效应，而且令人惊讶地显示，可以大幅降低单一物质的使用量，从而证明了全部成分的协同效应。
此外，本发明还旨在根据本发明的配制剂的用途，其用于预防和/或阻止由真菌病原体引起的植物疾病的传播。
通过这样的用途，成功在受影响的果实上阻止或完全停止植物疾病的出现和/或传播，由此可以确保收获物的更长的储存时间，并且特别地可以抑制真菌病原体的传播。
特别优选地，在由从由下列各项组成的组中选择的真菌病原体引起的植物疾病的情况下应用所述配制剂：明孢盘菌属物种，特别是腐皮明孢盘菌(neofabraeamalicorticis)或腐皮无柄盘菌，葡萄孢属物种，特别是灰葡萄孢，链核盘菌属物种，青霉属物种，刺盘孢属物种的。在这些真菌病原体的情况下，特别是在腐皮明孢盘菌和灰葡萄孢的情况下，可以取得最好的结果，和特别地可以在受影响的植物中几乎完全抑制植物疾病的传播，而且还提供良好的针对植物疾病发生的预防以供使用。
当下述情况时获得最高的协同效应：如相应于本发明的一个进一步实施方式那样，所述配制剂如此来形成，即各自以1×106至2×107个细胞/ml配制剂，优选地1.67×106至3.33×106个细胞/ml配制剂，特别优选地2.5×106个细胞/ml配制剂的细胞数量比包含出芽短梗霉dsm14940和dsm14941，并且优选地以对于咯菌腈来说0.0025g/l配制剂至1.0g/l配制剂，特别地0.125g/l配制剂至0.25g/l配制剂的浓度，和对于嘧菌环胺来说0.00375g/l配制剂至1.0g/l配制剂，特别地0.1875g/l配制剂至0.375g/l配制剂的浓度包含所述化学杀真菌剂咯菌腈和嘧菌环胺。用这样的配制剂，可以取得直至1.5的协同系数。
根据本发明的一个特别优选的用途的特征在于，所述真菌病原体，特别是灰葡萄孢以及腐皮明孢盘菌(腐皮无柄盘菌)，对于至少一种化学杀真菌剂即咯菌腈具有抗性和/或降低的敏感度或敏感性。当所述真菌病原体对于所述至少一种化学杀真菌剂具有抗性或降低的敏感度时，可以使用根据本发明的配制剂，这是因为所述真菌病原体对于所使用的配制剂是敏感的并且卓有成效地使所述病原体变得无害。令人惊讶地，在此特别地还可以使用对于其明确地形成了抗性的化学杀真菌剂。这通过下述事实而得到解释：病原体必须消耗能量以维持抗性，它们由于出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941的使用以及其作为食物竞争者的拮抗效应而无法募集得到能量，并因此所述至少一种化学杀真菌剂可以再次不受限制地发挥作用。
在此，优选地，以协同发挥作用的量使用所述至少一种化学杀真菌剂以及至少一种含有出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941的混合物。通过这样的使用，可以相比于单一物质而言明显地降低所使用的杀真菌物质(也就是说，不仅生物学的，而且化学的)的量，而不降低杀真菌效应。以这种方式，一方面成功明显地减少由于并非不令人担心的化学杀真菌剂(例如咯菌腈)而造成的环境负荷，并且此外还取得对果实的安全且可靠的保护作用，特别是免受真菌病原体例如腐皮明孢盘菌、灰葡萄孢、链核盘菌属物种、青霉属物种、刺盘孢属物种影响的保护作用。
在此，所述至少一种化学杀真菌剂选自咯菌腈和至少一种从由嘧菌环胺、环酰菌胺、胺苯吡菌酮和嘧霉胺组成的组中选择的第二化学杀真菌剂，或者选自以2:1至1:2，优选地2:1至1:1，特别地1.5:1的重量比由嘧菌环胺和咯菌腈组成的混合物。通过使用作为以2:1至1:2，特别地1.5:1的重量比由嘧菌环胺和咯菌腈组成的混合物的所述化学杀真菌剂，可以实现针对许多真菌病原体的特别广泛的保护作用。
在此，可以更进一步降低所使用的化学杀真菌剂的量，如果以2:1至1:2，优选地1:1的细胞数量比使用出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941。所述细胞数量比特别地与所使用的细胞数目相关。
最后，本发明涉及用于预防或减少至少一种由真菌病原体引起的植物疾病的传播的方法，其特征主要在于，将下列组分一起施加至栽培植物至少一次：
a)至少一种化学杀真菌剂，其选自咯菌腈或者包括咯菌腈和至少一种第二化学杀真菌剂的组合，和
b)至少含有出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941的混合物，
其中将a)和b)以协同有效的量施加至所述栽培植物，特别是通过喷洒、喷雾或淋洒。
用这样的方法，成功通过施加至少一种化学杀真菌剂(其选自咯菌腈或者包括咯菌腈和至少一种第二化学杀真菌剂的组合)以及所述两种出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941而使真菌病原体、其生活场所或待对其开放的水果作物、制酒作物和蔬菜作物，特别是苹果、葡萄、草莓和葫芦科植物例如密生西葫芦和食用南瓜变得无害。优选地，如此来施行所述方法，即通过喷洒、喷雾或淋洒来施加配制剂。用这样的方法，尽管使用少量的化学杀真菌剂和生物学杀真菌剂，但是仍然成功在待处理的植物，水果种类或蔬菜种类，特别是苹果上施加了活性配制剂，其安全且可靠地杀死真菌病原体，例如明孢盘菌属物种、葡萄孢属物种、链核盘菌属物种，青霉属物种，刺盘孢属物种，特别是腐皮明孢盘菌(腐皮无柄盘菌)和灰葡萄孢，或者阻止其传播。对于协同效应的出现来说重要的是，组分a)和b)一起并且同时存在于栽培植物上。在理论上可能的是，相互分开地施加组分a)和b)，或者也相互分开地施加组分b)的所述两种出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941，只要它们在栽培植物上在同一时间存在或产生影响。可能的是，将a)和b)或者单一的出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941在分开的桶混物中调节至所希望的量或浓度，并且按照所希望的施加量/公顷(ha)同时地或者在时间上紧接相继地施加至栽培植物。然而，为了简单起见，和首先因为在该情况下可以确保所述配制剂的组分的共同存在以及也由于成本原因，组分a)和b)的一起施加，即组分a)和b)存在于同一个桶混物或配制剂中，是优选的。
有利地，在此如此施行所述方法，将a)和b)一起混合、溶解或悬浮在配制剂中，并且将所述配制剂施加至所述栽培植物。用这样的工艺管理，成功直接制备出即用型溶液、悬浮液或混合物，其可以被直接施加至待处理的栽培植物。
在此，特别良好的结果可以通过下述方式来取得：如果如此施行所述方法，即每次应用，各自施加1×1011至1×1014个细胞/ha，优选地1×1012至2×1013个细胞/ha配制剂，优选地1.67×1012至3.33×1012个细胞/ha配制剂，特别优选地2.5×1012个细胞/ha的单一的出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941。通过施加这样的细胞数目的出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941，可以实现由真菌病原体引起的植物疾病的传播的极为有效的预防或明显的减少。同样地，当下述情况时可以实现由真菌病原体引起的植物疾病的传播的极为有效的预防或明显的减少：如相应于本发明的一个进一步实施方式那样，如此来施行所述方法，即使用咯菌腈作为化学杀真菌剂，其中特别地施加2.5g/ha至5000g/ha，优选地10g/ha至1000g/ha，特别地125g/ha至250g/ha，或者使用由咯菌腈和嘧菌环胺组成的混合物，其中特别地施加3.75g嘧菌环胺/ha至5000g嘧菌环胺/ha，优选地20g/ha至1000g/ha，特别地187.5g/ha至375g/ha。
当下述情况时是特别极为有效的：如此施行所述方法，即在所述栽培植物的开花期期间，进行所述至少一种化学杀真菌剂和所述至少两种出芽短梗霉菌株dsm14940和dsm14941，特别是上面所定义的配制剂的所述至少一次施加。通过在所述栽培植物的开花期期间施加所述配制剂，成功实现由真菌病原体引起的植物疾病的传播的特别有效的预防或减少。对于栽培植物的开花期的定义，将会采用国际通用的发育阶段的bbch-编码，其中葡萄藤的开花期在此相应于bbch-编码53、55、57以及60-69(lorenz等人,
下面将借助于实施例更详细地阐明本发明。
实施例1：用于对抗真菌性植物病原体的出芽短梗霉菌株和化学杀真菌剂
在苹果测试中测定出芽短梗霉菌株ap241(dsm32467)、ap268(dsm32468)、dsm14940和dsm14941(单独地或相组合地)与化学杀真菌剂嘧菌环胺和咯菌腈(单独地或相组合地)一起对于真菌性植物病原体葡萄孢属和明孢盘菌属的效应。每次处理使用12只具有统一成熟度和大小的相同品种的未处理的苹果。在测试之前，将苹果在70％乙醇中表面消毒三分钟，并且在无菌工作台下进行干燥。对于每只苹果，在花萼与果梗之间的赤道平面上用无菌的吸移管尖头以相等的距离设置四个具有5mm的伤口直径的伤口。在制造了四个人工伤口后立即给每只苹果各自施加10μl的不同的受试溶液(配制剂)。接着，贮存苹果。在伤口周围形成了腐烂部位，其直径是关于病原体感染传播扩散的量度。为了进行评价，从腐烂部位直径中减去各0.5cm的穿刺孔直径。
在每个苹果的4个伤口中的每一个之中所给予的4种受试溶液为：
1.病原体(阴性对照)，
2.病原体和出芽短梗霉(单独地或相组合地)，
3.病原体和化学杀真菌剂(单独地或相组合地)，
4.病原体和出芽短梗霉(单独地或相组合地)和化学杀真菌剂(单独地或相组合地)。
从在贮存结束时所测量的腐烂部位直径开始，对于受试溶液2至4计算抑制病原体的效率。该效率相应于相比于各自的阴性对照而言的腐烂部位直径减少百分比。例如，如果受试溶液1的腐烂部位直径为5cm，而受试溶液2、3和4的腐烂部位直径各为1cm，那么受试溶液2至4的效率各自为80％。阴性对照的效率根据定义为零。
从在受试溶液2和3中的单一组分的效率(wg)开始，依照colby公式(s.r.colby,“calculatingsynergisticandantagonisticresponsesofherbicidecombinations”,weeds15,第20至22页,1967)，按照下式来计算由短梗霉属(aureobasidium)真菌和化学杀真菌剂组成的组合(受试溶液4)的效应的期望值(e)
e＝wgx+(wgy/100)x(100-wgx)
e...期望值
wgx...单一组分x的效率
wgy...单一组分y的效率。
如果所测量出的出芽短梗霉菌株和化学杀真菌剂的组合(受试溶液4)的效率大于所计算出的期望值(e)，那么就说具有协同效应(所述单一组分相互超加和性地增强)。协同系数是关于协同效应的量度，并且被计算为物质或组分的组合(受试溶液4)的效率与计算出的期望值(e)的商。如果协同系数大于等于1.1，那么所述组合的效应相对于单一组分的效应而言是协同的。如果在本文件中谈及“协同作用”或“协同发挥作用”或“协同效应”等，总是涉及相比于该组合的单一组分而言具有大于等于1.1的协同系数的组合。对于每个试验安排(其由受试溶液1至4构成)，检查12次重复(12只苹果)。
所测试的真菌性植物病原体：
葡萄孢属物种：
灰葡萄孢bc97(dsm32469)
该菌株具有对于化学杀真菌剂strobilurin、啶酰菌胺(boscalid)和嘧菌环胺的抗性以及降低的对于咯菌腈的敏感性；
灰葡萄孢12/4(dsm32486)
该菌株对于化学杀真菌剂不具有已知的降低的敏感性或抗性。
明孢盘菌属物种：腐皮无柄盘菌160622(dsm62715)。
病原体溶液：
为了制备病原体溶液，从在20℃下被病原体覆盖的me-营养琼脂平板(me-琼脂：30g麦芽提取物、15g琼脂、5g蛋白胨，在1000ml蒸馏水中)中取大约1-2cm×2cm的面积的分生孢子，并且用douncer悬浮在10ml水中。在这之后，用显微镜在thoma计数板中计数分生孢子浓度，并且用水调整至所希望的浓度。
葡萄孢属
在受试溶液中的分生孢子的终浓度：2×105个分生孢子/ml，
在2×浓缩的病原体溶液中的分生孢子的浓度：4×105个分生孢子/ml。
明孢盘菌属
在受试溶液中的分生孢子的终浓度：1×106个分生孢子/ml，
在2×浓缩的病原体溶液中的分生孢子的浓度：2×106个分生孢子/ml。
出芽短梗霉菌株：
dsm14940，
dsm14941，
ap241(dsm32467)，分离出的出芽短梗霉菌株，
ap268(dsm32468)，分离出的出芽短梗霉菌株。
出芽短梗霉浓度：
将出芽短梗霉菌株dsm14940、dsm14941、ap241和ap268在营养琼脂平板(ym-琼脂：3g酵母提取物、3g麦芽提取物、5g蛋白胨、10g葡萄糖和20g琼脂，在1000ml蒸馏水中)上在27℃下进行培养，并且用0.6％的nacl溶液收获细胞。用显微镜在thoma计数板中计数酵母细胞的浓度，并且用水调整至所希望的浓度。对细胞生存力以及菌落形成单位进行的检查得出，>99.9％的细胞是有生存力的并且可以形成菌落。因此，在本文中“细胞”特别是“细胞/ml”的陈述也同义地代表“菌落形成单位(cfu)”和特别是“cfu/ml”。
2×浓缩的短梗霉属真菌溶液：1×107个细胞/ml。
4×浓缩的短梗霉属真菌溶液：2×107个细胞/ml。
在受试溶液(配制剂)中的终浓度：
dsm14940、dsm14941、ap241和ap268：5×106个细胞/ml，
ap1：由dsm14940和dsm14941组成的1:1混合物：2.5×106个细胞/mldsm14940和2.5×106个细胞/mldsm14941，
ap2：由dsm14940和ap241组成的1:1混合物：2.5×106个细胞/mldsm14940和2.5×106个细胞/mlap241，
ap3：由dsm14940和ap268组成的1:1混合物：2.5×106个细胞/mldsm14940和2.5×106个细胞/mlap268，
ap4：由dsm14941和ap241组成的1:1混合物：2.5×106个细胞/mldsm14941和2.5×106个细胞/mlap241，
ap5：由dsm14941和ap268组成的1:1混合物：2.5×106个细胞/mldsm14941和2.5×106个细胞/mlap268，
ap6：由dsm14940和dsm14941组成的2:1混合物(3.33×106个细胞/mldsm14940和1.67×106个细胞/mldsm14941)，
ap7：由dsm14940和dsm14941组成的1:2混合物(1.67×106个细胞/mldsm14940和3.33×106个细胞/mldsm14941)。
化学杀真菌剂：
以在下表中给出的浓度使用下面的化学杀真菌剂：
每个伤口的受试溶液：
结果
灰葡萄孢bc97
测试系统：jonagoldhonsel品种的苹果
贮存温度：20℃：贮存持续时间：6天
病原体：灰葡萄孢bc97
出芽短梗霉菌株：dsm14940、dsm14941、ap241、ap268
化学杀真菌剂：咯菌腈、嘧菌环胺
从上面列出的表格中可以清楚地看出，单一出芽短梗霉菌株与化学杀真菌剂咯菌腈或嘧菌环胺一起进行应用以及与由咯菌腈和嘧菌环胺组成的混合物一起进行应用不具有协同效应。
从上面列出的表格中可以清楚地看出，所述两种短梗霉属菌株dsm14940和dsm14941的混合物与化学杀真菌剂嘧菌环胺或咯菌腈一起进行应用以及与由嘧菌环胺和咯菌腈组成的混合物一起进行应用具有明显的协同效应。由dsm14940和dsm14941与所述化学杀真菌剂组成的配制剂(受试组4)的效率总是明显地高于所计算出的期望值(e)。协同系数大于等于1.1。
在ap1组中以及在ap6组中(各自与咯菌腈一起)，几乎没有腐烂形成发生(分别0.08cm和0.05cm的腐烂部位直径)，这证实了本发明的配制剂的非常良好的预防效应。在组ap1、ap6和ap7的其余试验中显示出腐烂形成的明显减少，这表明通过本发明的配制剂减少了真菌疾病的传播。
与也采用不同浓度的化学杀真菌剂的上述试验类似地，证实了具有所述两种化学杀真菌剂嘧菌环胺和咯菌腈的ap1、ap6和ap7的混合物针对病原体灰葡萄孢bc97的协同效应。
对于嘧菌环胺，对于所有浓度，即0.02g/l、0.06g/l、0.125g/l、0.375g/l、0.5g/l和1.0g/l配制剂，可以证实协同效应(协同系数大于等于1.1)，其中对于浓度0.125g/l和0.375g/l各自测得了最高的协同系数。
对于咯菌腈，对于所有浓度，即0.01g/l、0.05g/l、0.125g/l、0.25g/l、0.5g/l和1.0g/l，可以证实协同效应(协同系数大于等于1.1)，其中对于浓度0.125g/l和0.25g/l各自测得了最高的协同系数。
灰葡萄孢12/4
测试系统：jonagoldhonsel品种的苹果
贮存温度：20℃：贮存持续时间：7天
病原体：灰葡萄孢12/4(对于咯菌腈和/或嘧菌环胺没有敏感性或具有抗性)
短梗霉属真菌：dsm14940、dsm14941和ap1
化学杀真菌剂：咯菌腈、嘧菌环胺；仅使用上面给出的化学杀真菌剂的量的1/50。
从上面列出的表格中可以清楚地看出，只有将由所述两种短梗霉属菌株dsm14940和dsm14941组成的混合物与化学杀真菌剂嘧菌环胺和咯菌腈一起进行应用(ap1组)具有协同效应。对此，受试组4(短梗霉属菌株的混合物+化学杀真菌剂)的效率明显地高于所计算出的期望值(e)。协同系数大于等于1.1。几乎没有腐烂形成发生(0.03cm的腐烂部位直径)，这证实了本发明的配制剂的非常良好的预防效应。
与也采用不同浓度的化学杀真菌剂的上述试验类似地，证实了具有所述两种化学杀真菌剂嘧菌环胺和咯菌腈的ap1、ap6和ap7的混合物针对病原体灰葡萄孢12/4的协同效应。
对于嘧菌环胺，对于所有浓度，即0.001g/l、0.00375g/l、0.005g/l、0.01g/l、0.05g/l、0.1g/l和0.1875g/l配制剂，可以证实协同效应(协同系数大于等于1.1)。
对于咯菌腈，对于所有浓度，即0.001g/l、0.0025g/l、0.005g/l、0.01g/l、0.05g/l、0.1g/l和0.125g/l配制剂，可以证实协同效应(协同系数大于等于1.1)。
因为所使用的化学杀真菌剂的量取决于病原体本身，但特别地取决于病原体对于单一化学杀真菌剂的抗性或降低的敏感性，因而认为，对于有些病原体，更高或更低的化学杀真菌剂的使用量也足以与由dsm14940和dsm14941组成的出芽短梗霉混合物一起协同地发挥作用。
明孢盘菌属物种：
测试系统：elstarfuchshof品种的苹果
贮存温度：20℃：贮存持续时间：16天
病原体：腐皮无柄盘菌160622(dsm62715)
短梗霉属真菌：dsm14940、dsm14941和ap1(与上面所给出的不同，在此所使用的出芽短梗霉菌株的总浓度处于1×107个细胞/ml)
化学杀真菌剂：咯菌腈、嘧菌环胺
从上面列出的表格中可以清楚地看出，所述两种短梗霉属菌株dsm14940和dsm14941与化学杀真菌剂嘧菌环胺和咯菌腈一起进行应用具有明显的协同效应。病原体+短梗霉属真菌+化学杀真菌剂(受试组4)的效率各自明显地高于所计算出的期望值(e)。协同系数大于等于1.1。
此外，还测试了在具有化学杀真菌剂嘧菌环胺(0.01875％(w/v)＝0.1875g嘧菌环胺/l配制剂)和咯菌腈(0.01250％(w/v)＝0.125g咯菌腈/l配制剂)(单独地和相组合地(0.01875％(w/v)嘧菌环胺；0.01250％(w/v)咯菌腈))的受试溶液中以1×107个细胞/ml的浓度的单一菌株。在这种情况下，协同系数小于等于1.0，并且因此，所述化学杀真菌剂与仅一种出芽短梗霉菌株一起进行应用不是协同性的。
与也采用不同浓度的化学杀真菌剂的上述试验类似地，证实了具有所述两种化学杀真菌剂嘧菌环胺和咯菌腈的ap1、ap6和ap7的混合物针对病原体腐皮无柄盘菌160622的协同效应。
对于嘧菌环胺，对于所有浓度，即0.02g/l、0.06g/l、0.125g/l、0.375g/l、0.5g/l和1.0g/l配制剂，可以证实协同效应(协同系数大于等于1.1)，其中对于浓度0.125g/l和0.375g/l各自测得了最高的协同系数。
对于咯菌腈，对于所有浓度，即0.01g/l、0.05g/l、0.125g/l、0.25g/l、0.5g/l和1.0g/l，可以证实协同效应(协同系数大于等于1.1)，其中对于浓度0.125g/l和0.25g/l各自测得了最高的协同系数。
实施例2：田间试验
在露天试验(田间试验)中，在对抗葡萄孢属物种(主要是灰葡萄孢)的情况下，在葡萄(鲜食葡萄)中和在草莓中，可以显示出，出芽短梗霉dsm14941和dsm14940与化学活性物质嘧菌环胺和咯菌腈的桶喷洒混合物(配制剂)可以协同地提高对于病原体的效率。
测试系统a：鲜食葡萄(葡萄(vitisvinifera))
地点：意大利
持续时间：2014年9月11日至11月11日
桶喷洒混合物施加的次数/方式：5个相同的处理，各1,000l/ha。通过喷洒来施加所述桶混物。喷洒应用各自根据葡萄藤的物候学发育阶段的bbch-编码(lorenz等人.
bbch53：“葡萄花序”(花序)明显可见。
测试系统b：草莓(fragariaananassa)
地点：奥地利
持续时间：2016年5月9日至6月10日
桶混物施加的次数/方式：6个相同的处理，各1,000l/ha。通过喷洒来施加所述桶混物。
喷洒应用各自根据草莓的物候学发育阶段的bbch-编码(meier等人,
bbch55：在莲座基底上可见最初的花原基。
在这种情况下，在各自的试验组中将下述喷洒混合物直接施加在大田作物上：
组1：未处理的对照。
组2：用嘧菌环胺和咯菌腈进行处理；在桶混物中的浓度：0.1875g/l的嘧菌环胺和0.125g/l的咯菌腈。因此，每公顷(ha)向植物栽培物施加187.5g嘧菌环胺和125g咯菌腈。
组3：用ap1进行处理；在桶混物中的出芽短梗霉浓度：2.5×106个细胞/ml的dsm14940和2.5×106个细胞/ml的dsm14941。因此，每公顷(ha)施加2.5×1012个细胞的dsm14940和2.5×1012个细胞的dsm14941。
组4：用嘧菌环胺和咯菌腈以及用ap1进行处理；在桶混物(＝配制剂)中的浓度：0.1875g/l的嘧菌环胺和0.125g/l的咯菌腈以及2.5×106个细胞/ml的dsm14940和2.5×106个细胞/ml的dsm14941。因此，每公顷(ha)向植物栽培物施加187.5g嘧菌环胺和125g咯菌腈以及2.5×1012个细胞的dsm14940和2.5×1012个细胞的dsm14941。
效率的计算：例如对于组4：效率＝[1-(2.30/27.30)]*100
从上面的表格中明显看出，通过共同应用ap1混合物与化学杀真菌剂协同性地减少了病原体的传播。协同系数各自大于等于1.1。
与上面的表格类似地，在田间试验(鲜食葡萄和草莓)中还测试了其他组，下列组：
组5：用嘧菌环胺进行处理；在桶混物中的嘧菌环胺的浓度：0.1875g/l；施加：1,000l/ha。
组6：用咯菌腈进行处理；在桶混物中的咯菌腈的浓度：0.125g/l；施加：1,000l/ha。
组7:用嘧菌环胺以及用ap1进行处理；在桶混物中的浓度：0.1875g/l的嘧菌环胺以及2.5×106个细胞/ml的dsm14940和2.5×106个细胞/ml的dsm14941；施加：1,000l/ha。
组8：用咯菌腈以及用ap1进行处理；在桶混物中的浓度：0.125g/l的咯菌腈以及2.5×106个细胞/ml的dsm14940和2.5×106个细胞/ml的dsm14941；施加：1,000l/ha。
在组1、3和5至8的类似的评价中，对于各自相比于单独应用(化学杀真菌剂或ap1混合物)而言将ap1混合物与所述两种化学杀真菌剂中的仅一种一起进行应用，也确定了协同效应，即取得大于等于1.1的协同系数。
与也采用不同浓度的化学杀真菌剂的上述田间试验类似地，证实了具有所述两种化学杀真菌剂嘧菌环胺和咯菌腈的ap1的混合物针对病原体的协同效应。
对于嘧菌环胺，对于所有施加量，即20g/ha、100g/ha、187.5g/ha、375g/ha、500g/ha和1000g/ha，可以证实协同效应(协同系数大于等于1.1)，其中对于187.5g/ha和375g/ha的施加，各自测得了最高的协同系数。
对于咯菌腈，对于所有施加量，即10g/ha、50g/ha、125g/ha、250g/ha、500g/ha和1000g/ha，可以证实协同效应(协同系数大于等于1.1)，其中对于125g/ha和250g/ha的施加，各自测得了最高的协同系数。