本发明涉及防治植物病毒病的农药组合物及其制备方法和应用，属于农药制备领域。
背景技术：
：植物病毒病是农业生产中的一大危害，素有“植物癌症”之称。常见的植物病毒病有1000多种，多由716种病毒造成，危害仅次于真菌。植物病毒能够侵染的农作物种类非常广泛，例如粮食、油料、果树、蔬菜、中药材、花卉等。目前植物病毒病的防治，主要为以下两种途径：田间生产中对于病毒病的防治，一般采取治虫防病、加强田间管理、植物检疫、隔离感染病株等手段控制病毒传播。一旦侵染，很难进行防治。或通过化学药剂防治：如盐酸吗啉胍、硫酸铜、宁南霉素等，但对病毒病的防治主要体现在早期预防作用，同时由于单一药剂导致抗药性的产生，需加大化学药剂使用量，造成了农药残留问题。板蓝根是我国的传统中药，为常用中药材，具有味苦、性寒、归心等性质。板蓝根具有较强的抗病毒、抗菌消炎、免疫调节、抗内毒素、抗癌等作用。目前，有部分专利使用了板蓝根提取物用于植物病毒病的防治，但是单独使用板蓝根提取物治疗植物病毒病效果较差。技术实现要素：针对上述问题，本发明要解决的第一个技术问题是提供一种效果好的防治植物病毒病的农药组合物。防治植物病毒病的农药组合物，由活性成分和辅料组成，所述活性成分包含板蓝根提取物和甘露聚糖肽；其中，板蓝根提取物由板蓝根经水或有机溶剂提取得到。甘露聚糖肽，别名多抗甲素(α-甘露聚糖肽)，是由链长有所差异的甘露聚糖肽分子构成的混合物，结构中含有39︰1的甘露糖与葡萄糖，蛋白质的含量在4.5％与6.2％之间，游离的氨基酸和小分子糖均不存在于甘露聚糖肽分子中。蛋白质中存在的主要氨基酸成分为天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸等。甘露聚糖肽是我国首创的一种新型生物反应修饰物和生物免疫增强剂，它可调节机体免疫功能奈乱，显著增强自身免疫力，临床上主要用于治疗免疫功能低下或免疫障碍性疾病等。优选的，板蓝根提取物采用有机溶剂回流浸提板蓝根制得。更优选的，有机溶剂为乙醇。优选的，板蓝根提取物与甘露聚糖肽的重量比为1～20:1；其中，板蓝根提取物的制备方法为：取板蓝根,加入水或有机溶剂回流浸提，收集提取液，将提取液浓缩至与板蓝根原料的重量相等；为了进一步提高农药组合物的抗病毒性能，更优选板蓝根提取物与甘露聚糖肽的重量比为10～20:1。当板蓝根提取物与甘露聚糖肽的重量比为10:1时，该组合物的抗病毒病性能最好。本发明板蓝根提取物浸提的方法为：取板蓝根,加入60％乙醇，浸泡30～40分钟，加热回流2～3小时，滤出药渣，收集提取液；再向药渣中加入60％乙醇加热回流2～3小时，收集提取液，合并提取液。优选的，所述防治植物病毒病的农药组合物为水剂。优选的，所述辅料为尿素、抗冻剂、防腐剂和表面活性剂中的至少一种。其中，尿素的作用为补充氮肥，松弛细胞角质层，利于药液被植物细胞吸收。优选的，抗冻剂为丙二醇、乙二醇和丙三醇中的至少一种；防腐剂为苯甲酸钠和山梨酸钾中的至少一种；表面活性剂为吐温80、非离子型脂肪胺聚合物、苯乙基酚聚氧乙烯醚、烷基萘磺酸盐甲醛缩合物、琥珀酸二辛酯磺酸钠、磺酸聚氧乙烯醚、聚羧酸盐、木质素磺酸钠和十二烷基硫酸纳中的至少一种。优选的，活性成分的含量为1～15wt％。本发明还提供防治植物病毒病的农药组合物的制备方法。农药组合物的制备方法为由以下组分混匀制得：板蓝根提取物、甘露聚糖肽、辅料和水；优选的，农药组合物由以下组分混匀制得：板蓝根提取物、甘露聚糖肽、尿素、抗冻剂、表面活性剂、防腐剂和水；更优选的，农药组合物由下述重量百分比的成分混匀制得：板蓝根提取物10％，甘露聚糖肽1％，尿素10％，丙三醇5％，非离子型脂肪胺聚合物5％，磺酸聚氧乙烯醚5％，苯甲酸钠0.2％，水补足。本发明还提供所述防治植物病毒病的农药组合物的应用；优选的，本发明的组合物应用于番茄、烟草、黄瓜病毒病的防治。本发明组合物的优选使用浓度220ppm～366ppm。本发明的有益效果：板蓝根提取物含有多种组分，包括生物碱类、多糖类、脂肪酸及其衍生物、氨基酸类及多肽、黄酮类等多种物质，可以钝化病毒和影响病毒复制；甘露聚糖肽含有多种糖类和氨基酸，具有能提高抗病性、抗氧化、免疫能力、延缓病毒复制增殖速度等作用。两者进行复配后使用，在防治植物病毒病上，起效快、防效高、持效期长、无毒无残留，同时可提高作物的产量和品质。相比于板蓝根提取物和甘露聚糖肽单剂表现出明显的增效效果，同时起到与化学药剂相当的防治效果，对于环境安全。具体实施方式针对上述问题，本发明要解决的第一个技术问题是提供一种效果好的防治植物病毒病的农药组合物。防治植物病毒病的农药组合物，由活性成分和辅料组成，所述活性成分包含板蓝根提取物和甘露聚糖肽；其中，板蓝根提取物由板蓝根经水或有机溶剂提取得到。甘露聚糖肽，别名多抗甲素(α-甘露聚糖肽)，是由链长有所差异的甘露聚糖肽分子构成的混合物，结构中含有39︰1的甘露糖与葡萄糖，蛋白质的含量在4.5％与6.2％之间，游离的氨基酸和小分子糖均不存在于甘露聚糖肽分子中。蛋白质中存在的主要氨基酸成分为天门冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸等。甘露聚糖肽是我国首创的一种新型生物反应修饰物和生物免疫增强剂，它可调节机体免疫功能奈乱，显著增强自身免疫力，临床上主要用于治疗免疫功能低下或免疫障碍性疾病等。优选的，板蓝根提取物采用有机溶剂回流浸提板蓝根制得。更优选的，有机溶剂为乙醇。优选的，板蓝根提取物与甘露聚糖肽的重量比为1～20:1；其中，板蓝根提取物的制备方法为：取板蓝根,加入水或有机溶剂回流浸提，收集提取液，将提取液浓缩至与板蓝根原料的重量相等；为了进一步提高农药组合物的抗病毒性能，更优选板蓝根提取物与甘露聚糖肽的重量比为10:1。本发明板蓝根提取物浸提的方法为：取板蓝根,加入60％乙醇，浸泡30～40分钟，加热回流2～3小时，滤出药渣，收集提取液；再向药渣中加入60％乙醇加热回流2～3小时，收集提取液，合并提取液。其中，板蓝根与乙醇的固液比可以为1g:6ml。优选的，所述防治植物病毒病的农药组合物为水剂。优选的，所述辅料为尿素、抗冻剂、防腐剂和表面活性剂中的至少一种。其中，尿素的作用为补充氮肥，松弛细胞角质层，利于药液被植物细胞吸收。优选的，抗冻剂为丙二醇、乙二醇和丙三醇中的至少一种；防腐剂为苯甲酸钠和山梨酸钾中的至少一种；表面活性剂为吐温80、非离子型脂肪胺聚合物、苯乙基酚聚氧乙烯醚、烷基萘磺酸盐甲醛缩合物、琥珀酸二辛酯磺酸钠、磺酸聚氧乙烯醚、聚羧酸盐、木质素磺酸钠和十二烷基硫酸纳中的至少一种。优选的，活性成分的含量为1～15wt％。本发明还提供防治植物病毒病的农药组合物的制备方法。农药组合物的制备方法为由以下组分混匀制得：板蓝根提取物、甘露聚糖肽、辅料和水；优选的，农药组合物由以下组分混匀制得：板蓝根提取物、甘露聚糖肽、尿素、抗冻剂、表面活性剂、防腐剂和水；更优选的，农药组合物由下述重量百分比的成分混匀制得：板蓝根提取物10％，甘露聚糖肽1％，尿素10％，丙三醇5％，非离子型脂肪胺聚合物5％，磺酸聚氧乙烯醚5％，苯甲酸钠0.2％，水补足。本发明还提供所述防治植物病毒病的农药组合物的应用；优选的，本发明的组合物应用于番茄、烟草、黄瓜病毒病的防治。本发明组合物的优选使用浓度220ppm～366ppm。下面结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步的描述，并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。制备板蓝根提取物：取板蓝根饮片50g,加入60％乙醇300毫升，浸泡30分钟，加热回流2小时，滤出药渣，收集提取液；再向药渣中加入60％乙醇300毫升加热回流2小时，收集提取液。合并两次提取液，减压浓缩至提取液重量为50g，得到板蓝根提取物(ⅰ)。实施例1防治植物病毒病的农药组合物的制备分别取不同质量比的板蓝根提取物(ⅰ)、甘露聚糖肽(ⅱ)均匀混合，再加入水和辅料(iii)，即得本技术方案的防治植物病毒病的农药组合物；具体组成方案如表1所示，其中，辅料(iii)采用尿素、丙三醇、非离子型脂肪胺聚合物、磺酸聚氧乙烯醚和苯甲酸钠按重量比为10:5:5:5:0.2配制。表1试验例一室内生物测定试验—烟草病毒病室内生物测定实验1.1供试药剂(1)板蓝根单剂：取板蓝根提取物(ⅰ)11g、加入63.8g水和25.2g辅料(iii)，即得板蓝根单剂，编号为d1号。(2)甘露聚糖肽单剂：取甘露聚糖肽1g，加入28g辅料(iii)和71g水,配成制剂100g，编号为d2号。(3)化学药剂对照组：20％盐酸吗啉胍可湿性粉剂，编号为d3号。(4)试验组：取表1不同质量配比的防治植物病毒病的农药组合物s1～s5。1.2植物材料与培养寄主：tmv枯斑寄主心叶烟普通烟k326，漂盘育苗，在无虫温室中培育。挑选6～8片叶龄、大小相似的健康植株作为试验材料。1.3供试毒源烟草花叶病毒(tmv)普通株系u1，由云南省农业生物技术重点实验室提供。繁殖于普通烟k326上，进行提纯后并用紫外分光光度计测定其浓度为16mg/ml，保存于－20℃冰箱中，使用时用0.01mol/lpb缓冲液稀释500倍备用。1.4抑制病毒侵染活性测定方法挑选健康且长势一致的心叶烟，暗室放置一夜。每组药剂处理3株，每株挑选叶片大小相似、数量相等的叶子进行处理。本实验设置2种处理方式：(1)测试药剂的预防作用：先施药将供试药剂稀释后涂施在叶片上，16h后，接种病毒，再将烟苗放入无虫温室中，5天后待枯斑症状明显时，统计试验结果，以测定供试药剂对感染tmv烟叶的保护作用；其中，每次试验供试药剂的涂施量完全相同；(2)测试药剂的治疗作用：后施药烟苗接种病毒6h以后，在烟叶上涂施稀释后的供试药剂，再将烟苗放入无虫温室中，5天后待枯斑症状明显时，统计试验结果，以测定供试药剂对tmv的治疗作用；其中，每次试验供试药剂的涂施量完全相同；其中，供试药剂处理叶片的方法为：用供试药剂涂施处理每片叶子的一半，另外一半用无菌水进行涂施对照；无菌水的用量与供试药剂的使用量相等。病毒接种的方法为：在需要接种的叶片上均匀喷洒金刚砂，用蘸有病毒液的毛笔轻轻均匀地刷叶片表面,接种10min后用蒸馏水将叶片上残留的金刚砂冲洗干净。将烟苗放入无虫温室中，5天后待枯斑症状明显时，统计试验结果，每种供试药剂处理重复3次，按下面的公式计算抑制率:抑制率(％)＝(对照枯斑数－处理枯斑数)/对照枯斑数×100％1.5试验使用的药剂浓度将供试药剂在使用前进行稀释：(1)将s1～s5加水稀释到活性成分的浓度为366ppm；其中，活性成分的重量按板蓝根提取物和甘露聚糖肽的总重量计。(2)将s3加水稀释到活性成分为33ppm；其中，活性成分的重量按板蓝根提取物和甘露聚糖肽的总重量计。(3)将d1加水稀释到活性成分的浓度为366ppm；其中，活性成分的重量按板蓝根提取物的重量计。(4)将d2加水稀释到活性成分的浓度为33ppm；其中，活性成分的重量按甘露聚糖肽的重量计。(5)将20％盐酸吗啉胍可湿性粉剂加水稀释到浓度为1000ppm。1.6实验结果如表2、表3所示。表2：药剂对tmv侵染的烟草保护(预防)作用实验结果：试剂编号使用浓度(ppm)使用量处理枯斑数(个)对照枯斑数(个)枯斑抑制率显著性分析s136610ml/株23.170.967.42％cs236610ml/株18.869.973.10％bs336610ml/株15.270.878.53％as33310ml/株28.473.261.20％ds436610ml/株26.172.163.80％ds536610ml/株25.471.464.43％dd136610ml/株32.268.152.72％fd23310ml/株33.172.754.47％ed3100010ml/株14.169.279.62％a注：本实验设计为每个处理组3株，调查的枯斑数为3株枯斑数的平均值；其中，对照枯斑数为无菌水处理的半片叶片上的枯斑数，处理枯斑数为供试药剂处理的半片叶片上的枯斑数。由表2可知，组合物药剂(板蓝根水提取物+甘露聚糖肽)对烟草病毒保护作用都较好，各个比例下抑制率都在60％以上，最高达到了78.53％，本发明提供抗植物病毒组合物的药效与单剂相比较，均达到了显著性差异，有协同增效作用。在组合物比例为15:1和10:1时，最优比例为10:1时，与化学药剂达到相当的预防效果。表3：药剂对tmv侵染的烟草治疗作用分组使用浓度(ppm)使用量处理枯斑数对照枯斑数枯斑抑制率显著性分析s136610ml/株33.781.458.60％ds236610ml/株30.182.863.65％cs336610ml/株20.181.375.28％bs33310ml/株37.382.254.62％es436610ml/株34.183.759.26％ds536610ml/株33.279.558.24％dd136610ml/株38.773.847.56％fd23310ml/株42.376.144.42％fd3100010ml/株18.580.977.13％a注：本实验设计为每个处理组3株，调查的枯斑数为3株枯斑数的平均值。由表3可知，组合物药剂(板蓝根水提取物+甘露聚糖肽)对烟草病毒病治疗作用都较好，各个比例下抑制率都由于单剂对照，最高达到了75.28％，本发明提供抗植物病毒组合物的药效与单剂相比较，均达到了显著性差异，有协同增效作用。在组合物比例为15:1和10:1时，最优比例为10:1时，治疗效果最好。由表2和表3对比可知，本发明提供的抗植物病毒组合物对tmv活体均有保护(预防)和治疗作用。但相对来说，保护(预防)效果均高于治疗作用，推荐组合物于所述作物病毒病发病前期或初期施用。本发明提供的抗植物病毒组合物保护和治疗效均优于单剂使用效果，且达到了的协同增效作用，同时起到比化学药剂相当的防治效果，对于环境安全。实施例二：田间药效应用实施例——防治番茄病毒病1、药剂情况(1)板蓝根单剂：取板蓝根提取物(ⅰ)11g、加入63.8g水和25.2g辅料(iii)，即得板蓝根单剂，编号为d1号。(2)甘露聚糖肽单剂：取甘露聚糖肽1g，加入28g辅料(iii)和71g水,配成制剂100g，编号为d2号。(3)化学药剂对照组：20％盐酸吗啉胍可湿性粉剂，编号为d3号。(4)试验组：取表1不同质量配比的植物源农药组合物s1～s5。2、药剂的使用浓度将所制得的药剂在使用前进行稀释：(1)将s1～s5加水稀释到活性成分的浓度为366ppm；其中，活性成分的重量按板蓝根提取物和甘露聚糖肽的总重量计。(2)将s3加水稀释到活性成分为33ppm；其中，活性成分的重量按板蓝根提取物和甘露聚糖肽的总重量计。(3)将d1加水稀释到活性成分的浓度为366ppm；其中，活性成分的重量按板蓝根提取物的重量计。(4)将d2加水稀释到活性成分的浓度为33ppm；其中，活性成分的重量按甘露聚糖肽的重量计。(5)将20％盐酸吗啉胍可湿性粉剂加水稀释到浓度为1000ppm。3、试验方法试验地点：广东省肇庆市高要区金渡镇冲口村番茄品种：番茄(金丰一号)防治对象：番茄病毒病(tmv)(1)、试验方法：试验地常年种植蔬菜。供试番茄为2017年12月17日播种，2018年1月20日移栽。试验各小区肥水管理、长势等条件一致。每个处理4个小区，每个小区面积20平方米。第一次施药时，番茄处于初花期，于2018年4月2日上午番茄病毒病发病初期施第一次药，4月8日施第二次药，4月15日施第三次药。其中，药剂需要稀释至使用浓度后使用，全期共施药3次。(2)、调查、记录和试验结果分析于第一次施药前(4月2日)调查基数，第3次施药后9天(4月24日)调查防效，全期共调查2次。i、调查方法每小区随机选取5点，每点调查6株番茄，以株为单位记录调查各级病株数，计算病情指数和防效，并对实验结果进行差异显著性分析。分级标准(以株为单位)：0级：无症状；1级：明脉、轻花叶；3级：心叶和叶片中部花叶；5级：心叶和叶片中部花叶，少数叶片畸形，皱缩或植株轻度矮化；7级：重花叶、多数叶片畸形、皱缩和植株矮化；9级：重花叶、叶片明显畸形、线叶，植株严重矮化，甚至死亡；ii、计算方法病情指数＝100*∑(各级病株数*相对应级数)/(调查总株数*9)防治效果(％)＝[1-(空白对照区施药前病情指数*施药区施药后病情指数)/空白对照施药后病情指数*施药区施药前病情指数]×100田间实验报告数据如表4所示：表4注：上表中的使用量指的是每次施药的稀释后药液用量，本实验共施三次药，每次的用药量均相等。以上试验数据表明：本发明提供的抗植物病毒组合物对番茄病毒病防效显著，优于板蓝根水提取物单剂和甘露聚糖肽单剂，本发明提供的抗植物病毒组合物与板蓝根水提取物单剂和甘露聚糖肽单剂差异显著，并达到了与化学药剂相当的防效。当前第1页12