一种百香果脱毒苗的快速繁育方法与流程

本发明涉及百香果栽培技术领域，具体涉及一种百香果脱毒苗的快速繁育方法。

背景技术：

百香果不仅能制造高档果汁饮料，还可以作为高档的食品添加剂。同时，百香果的综合开发利用也非常有价值，发展潜力巨大，可开发很多新的高营养、高保健的绿色产品，既可鲜食，又可以进行多种深加工。浆汁可以加工成果汁、浓缩果汁、果酱、果冻、果醋、果茶、果酒等等。以百香果为原料生产的百香果酒，色泽美观，气味香醇，口感一流，多饮不醉，口感好，营养功效都别具一格，男女老少皆宜，深受顾客欢迎；百香果醋更是色美、味香、味道顺口；具有消炎解毒，降脂降压、消食化淤、护肤养颜、减肥美容等特效。果籽含的营养比葵花子更好，也是一种很好的美容食品，可以提取植物油或加工成果籽酱。百香果枝叶和果皮营养丰富，可以加工成名贵中药和高档饲料出口。

百香果种植行业存在的主要问题就是种苗的培育，传统百香果育苗方法分为两种，一是百香果茎段扦插生根即为种苗，另一种是用百香果种子播种得到实生苗后进行嫁接，上述传统方法种苗繁殖效率低，且常常会出现植株感染病毒，经多年无性繁殖后，植株体内大量积累病毒，造成严重的品种退化。

技术实现要素：

基于以上问题，本发明提供一种百香果脱毒苗的快速繁育方法，利用组织培养技术进行茎尖或茎段培养，育苗速度快；且繁育过程中进行脱毒处理，可以减少病毒的危害，保证百香果苗品质优良。

为解决以上技术问题，本发明提供了一种百香果脱毒苗的快速繁育方法，其特征在于，包括如下步骤：

s1、采集8～10cm生长健壮且带有茎尖百香果茎段组织，用质量分数为0.2％的多菌灵溶液浸泡20～30min后在35℃的无菌环境下用培养液培养21天；

s2、切取步骤s1中的茎尖部分，长度为2～3cm，在无菌条件下将茎尖用70～75％的酒精浸润25～30秒，再用质量分数为0.2％的多菌灵溶液浸泡20～30min，然后用无菌水冲洗3～4次；

s3、无菌环境下将经步骤s2处理后的茎尖在浓度为0.1mg/lnaa的1/2ms培养基上进行组织培养，诱导其生根，得到亲代脱毒苗；待亲代脱毒苗根长2～3cm时取出植株，洗净其根部并移栽到培养液中进行水培；水培时光照强度为2500～3500lux、光照时间为10.0～12.0h、温度为23～27℃的条件下，培养25～30天；

s4、采集亲代脱毒苗的8～10cm茎段，用质量分数为0.2％的多菌灵溶液浸泡20～30分钟，然后将茎段在0.1mg/lnaa的1/2ms培养基中进行培养；待茎段生根后，得到子代脱毒苗；

s5、将所得子代脱毒苗移栽大田，进行田间管理待其适应生长后，得到子代植株；

s6、从子代植株上采集的健壮茎段，在无菌环境下用气雾育苗室上进行培育生根后，即得到成品商品苗。

进一步地，步骤s1和s3中培养液的成分为硝酸钙1250mg/l、硝酸钾250mg/l、磷酸二氢铵350mg/l、硫酸镁540mg/l、硝酸铵240mg/l、乙二胺四乙酸铁钠40mg/l、硫酸亚铁15mg/l、硼酸2.86mg/l、硫酸锰2.13mg/l、硫酸铜0.05mg/l、硫酸锌0.22mg/l、钼酸铵0.02mg/l。

进一步地，步骤s3和s4中0.1mg/lnaa的1/2ms培养基均加入质量分数为5～10％的抗生素、0.5～1.0mg/l的赤霉素和100～200mg/l的水解酪蛋白进行培养。

进一步地，抗生素为青霉素或链霉素

进一步地，步骤s4中茎段生根后，每隔5天于叶面喷洒一次磷酸二氢钾溶液，待根系长度达到10cm后停止喷洒。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明利用组织培养技术，通过茎尖脱毒培养得到亲代脱毒苗，再进行亲代脱毒苗水培、亲代茎段组织脱毒培养得到子代脱毒苗、子代脱毒苗大田移栽得到子代植株，子代植株茎段培育获得百香果脱毒苗，育苗速度快；且繁育过程中进行脱毒处理，可以减少病毒的危害，保证百香果苗品质优良。

附图说明

图1为实施例1中百香果脱毒苗的快速繁育方法流程图；

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。

实施例1：

参见图1，一种百香果脱毒苗的快速繁育方法，其特征在于，包括如下步骤：

s1、采集8～10cm生长健壮且带有茎尖百香果茎段组织，用质量分数为0.2％的多菌灵溶液浸泡20～30min后在35℃的无菌环境下用培养液培养21天；对百香果茎段预处理，使百香果茎段组织在培养液中充分吸收营养物质，生长健壮。

s2、切取步骤s1中的茎尖部分，长度为2～3cm，在无菌条件下将茎尖用70～75％的酒精浸润25～30秒，再用质量分数为0.2％的多菌灵溶液浸泡20～30min，然后用无菌水冲洗3～4次，实现百香果茎尖脱毒。

s3、无菌环境下将经步骤s2处理后的茎尖在浓度为0.1mg/lnaa的1/2ms培养基上进行组织培养，诱导其生根，得到亲代脱毒苗；待亲代脱毒苗根长2～3cm时取出植株，洗净其根部并移栽到培养液中进行水培；水培时光照强度为2500～3500lux、光照时间为10.0～12.0h、温度为23～27℃的条件下，培养25～30天；

s4、采集亲代脱毒苗的8～10cm茎段，用质量分数为0.2％的多菌灵溶液浸泡20～30分钟，然后将茎段在0.1mg/lnaa的1/2ms培养基中进行培养；待茎段生根后，得到子代脱毒苗；

s5、将所得子代脱毒苗移栽大田，进行田间管理待其适应生长后，得到子代植株；

s6、从子代植株上采集的健壮茎段，在无菌环境下用气雾育苗室上进行培育生根后，即得到成品商品苗。

本实施例中，气雾育苗室包括栽培室，栽培室中悬空设置栽培床；需要进行气雾育苗时，将植物茎段或根系插在栽培床上，根系或茎段切口裸露在栽培室内部，利用喷雾装置将营养液雾化为小雾滴状，直接喷射到植物根系或茎段以提供植物生长所需的水分和养分。可有效解决传统土壤栽培中难以解决的水分、空气、养分供应的矛盾，使作物根系处于最适宜的环境条件下，从而发挥作物的增长潜力，使植物生长量、生物量得到大大提高。

本发明利用组织培养技术，通过茎尖脱毒培养得到亲代脱毒苗，再进行亲代脱毒苗水培、亲代茎段组织脱毒培养得到子代脱毒苗、子代脱毒苗大田移栽得到子代植株，子代植株茎段培育获得百香果脱毒苗，育苗速度快；且繁育过程中进行脱毒处理，可以减少病毒的危害，保证百香果苗品质优良。

实施例2：

s1、采集8～10cm生长健壮且带有茎尖百香果茎段组织，用质量分数为0.2％的多菌灵溶液浸泡30min后在35℃的无菌环境下用培养液培养21天。培养液的成分为硝酸钙1250mg/l、硝酸钾250mg/l、磷酸二氢铵350mg/l、硫酸镁540mg/l、硝酸铵240mg/l、乙二胺四乙酸铁钠40mg/l、硫酸亚铁15mg/l、硼酸2.86mg/l、硫酸锰2.13mg/l、硫酸铜0.05mg/l、硫酸锌0.22mg/l、钼酸铵0.02mg/l

s2、切取步骤s1中的茎尖部分，长度为2～3cm，在无菌条件下将茎尖用75％的酒精浸润30秒，再用质量分数为0.2％的多菌灵溶液浸泡30min，然后用无菌水冲洗3～4次；

s3、无菌环境下将经步骤s2处理后的茎尖在浓度为0.1mg/lnaa的1/2ms培养基上进行组织培养，诱导其生根，得到亲代脱毒苗；培养前在培养基中加入质量分数为5～10％的青霉素、0.5～1.0mg/l的赤霉素和100～200mg/l的水解酪蛋白。待亲代脱毒苗根长2～3cm时取出植株，洗净其根部并移栽到培养液中进行水培(水培培养液成分与步骤s1中培养液成分相同)；水培时光照强度为3000lux、光照时间为12.0h、温度为25℃的条件下，培养30天；

s4、采集亲代脱毒苗的8～10cm茎段，用质量分数为0.2％的多菌灵溶液浸泡20～30分钟，然后将茎段在0.1mg/lnaa的1/2ms培养基中进行培养，培养前在培养基中加入质量分数为5～10％的青霉素、0.5～1.0mg/l的赤霉素和100～200mg/l的水解酪蛋白。待茎段生根后，每隔5天于叶面喷洒一次磷酸二氢钾溶液，待根系长度达到10cm后停止喷洒，得到子代脱毒苗；

s5、将所得子代脱毒苗移栽大田，进行田间管理待其适应生长后，得到子代植株；

s6、从子代植株上采集的健壮茎段，在无菌环境下用气雾育苗室上进行培育生根后，即得到成品商品苗。

本实施例中采用的抗生素为青霉素，可以在组织培养过程中对细菌等微生物有抑制作用。除青霉素外，采用链霉素也可以起到抑制细菌等微生物生长的作用。

如上即为本发明的实施例。上述实施例以及实施例中的具体参数仅是为了清楚表述发明验证过程，并非用以限制本发明的专利保护范围，本发明的专利保护范围仍然以其权利要求书为准，凡是运用本发明的说明书及附图内容所作的等同结构变化，同理均应包含在本发明的保护范围内。