一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂及其应用的制作方法

本发明属于农作物病害防治领域，具体涉及一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂及其应用。

背景技术：

草莓自上世纪80年代引入中国，因其外形口感而逐步赢得消费者喜爱，可观的经济效益使得它成为一种重要的经济作物。在江苏地区，草莓以大棚种植为主，然而长期连作导致病虫害积累，其中灰葡萄孢botrytiscinereapers.引起的灰霉病在低温潮湿的冬季容易大面积暴发。灰葡萄孢可引起果实和衰老器官的灰霉病，也可影响营养组织。灰霉病果实的典型症状是茎端部有较大的灰褐色病变；果实在各个成熟期，尤其是花期易受感染，其中雄蕊是主要感染途径。在潮湿的条件下，如果植物不喷洒杀菌剂，会损失80％以上的草莓花和果实。田间生长中以及贮藏、运输和市场上的草莓均会受到灰葡萄孢的影响。果品感染灰霉病是果农、货主和消费者拒收草莓的最常见原因，这造成了重大的经济损失。目前针对田间灰霉病的防治以化学杀菌剂为主，生物防治为辅，但一般效果较差，且成本较高。在常规防治条件下，灰霉病快速传播的特性会导致草莓减产10％-20％，严重时可达50％。

目前常用的杀菌剂由于病菌快速产生的抗药性和新的法律限制，常常效果不佳，或者不得不加大剂量或多种杀菌剂混合使用。基于不同区域的灰霉菌株的抗药性研究发现，在美国，苯菌灵和嘧菌酯已经基本无效。2017年江苏丘陵地区同样发现嘧菌酯和吡唑醚菌酯已完全无效，而在2012年时仅有40.30％的菌株表现出中等抗性；江苏、湖南、四川的多地调查均发现有近50％的菌株对常见的杀菌剂如啶酰菌胺、多菌灵、腐霉利和嘧霉胺产生抗性，但也有区域性抗性较弱的药剂尚可使用，如异菌脲和咯菌腈。对多菌灵以及多种常用农药的残留检测表明，超量和不规范使用造成的农药残留风险阻碍了草莓产业的转型升级。因此，不易产生抗性，安全性高的生物防治方法被提上议程。然而实际农业生产中微生物生防制剂的效果往往难以控制，时好时坏，这是由于土壤养分和物理状态、土壤中原有微生物均会影响外来菌剂的定殖与发挥作用。

技术实现要素：

为克服上述技术问题，本发明提供了一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂及其应用。

为达到上述目的，本发明是通过以下的技术方案来实现的。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，包括微生物生防制剂和外源添加有机物料；所述微生物生防制剂与外源添加有机物料的重量比为0.5～0.8:50～100，所述微生物生防制剂为木霉菌或em菌。

进一步地所述外源添加有机物料为米糠和豆饼，米糠和豆饼的重量比为1:4。

进一步地优选木霉菌、米糠、豆饼的重量比为0.5:20:80或em菌、米糠、豆饼的重量比为0.8:20:80。

进一步地防治草莓灰霉病的微生物生防制剂应用于防治草莓灰霉病。

进一步地一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用，包括以下步骤：

1)用10～20倍微生物生防制剂重量的水溶解微生物生防制剂，将溶液与外源添加有机物料混合均匀；

2)在移栽草莓后50～60天将新配制的微生物生防制剂均匀撒施在垄面，随后喷水，保持湿润后覆盖地膜，随后常规田间管理。

进一步地所述草莓移栽时间从8月底到9月中旬。

有益效果：与现有技术相比，本发明的优点在于：

1)em菌和木霉菌能够有效降低草莓灰霉病发病率；

2)添加米糠豆饼能够有效提高生防菌的防效；

3)外源添加有机物料增加土壤微生物数目，改变微生物群落组，抑制灰葡萄孢的生长。

附图说明

图1添加有机物料和生防制剂对草莓灰霉病发病率的影响；

图2添加有机物料和生防制剂对土壤微生物数目的影响；

注：图1中正负误差线表示标准误大小，图柱之上的不同小写字母表示各处理间差异显著(p＜0.05，邓肯法)，横坐标下的不同小写字母表示各生防制剂间差异显著(p＜0.05)；

图2中，通过稀释平板计数法测定各处理0-20cm土壤中真菌、细菌和放线菌的数量。a-c：试验地1；d-f：试验地2。图2中正负误差线表示标准误大小，图柱之上的不同小写字母表示各处理间差异显著(p＜0.05，邓肯法)，横坐标下的不同小写字母表示各生防制剂间差异显著(p＜0.05)。

具体实施方式

下面结合实例对本发明作进一步的详细说明。本发明所用的原料均为市售产品。枯草芽孢杆菌：商品名为青叶子，武汉科诺生物科技股份有限公司生产，可湿性粉剂，1000亿cfu/g。木霉菌：上海万力华生物科技有限公司生产，可湿性粉剂，2亿cfu/g。em菌：中国独家代理株式会社em研究机构南京代表处爱睦乐环保生物技术(南京)有限公司生产，100％原发酵液。

草莓品种：红颊。

地点位于江苏省镇江市句容市白兔镇的2个不同地块。试验地1：连续10年连作草莓大棚，ph5.40、有机质1.78％、碱解氮271.32mg/kg、速效磷245.82mg/kg、速效钾236.84mg/kg。试验地2：连续2年连作草莓大棚，ph5.77、有机质1.09％、碱解氮75.69mg/kg、速效磷73.88mg/kg、速效钾166.57mg/kg。

实施例1

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，其组分为500g/亩木霉菌、20kg/亩米糠、80kg/豆饼，20kg/亩米糠+80kg/豆饼记作rb。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用：9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，用10倍清水将木霉菌化开，喷至米糠豆饼上，边喷边拌直至拌匀，均匀撒施在垄面，随后喷少量水，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。每小区10m²，栽100株草莓，3重复，每小区随机调查2组发病率，每组调查50个果，果实萼片发红记为发病。

发病率(％)＝(发病果数/调查总果数)×100％，

防效(％)＝(对照发病率-处理发病率)/对照发病率×100％。

实施例2

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，其组分为500g/亩木霉菌、10kg/亩米糠、40kg/豆饼，10kg/亩米糠+40kg/豆饼记作1/2rb。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用：9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，用10倍清水将木霉菌化开，喷至米糠豆饼上，边喷边拌直至拌匀，均匀撒施在垄面，随后喷少量水，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。统计方法同实施例1。

实施例3

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，其组分为800ml/亩em菌、20kg/亩米糠、80kg/豆饼，20kg/亩米糠+80kg/豆饼记作rb。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用：9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，用10倍清水将em菌液稀释，喷至米糠豆饼上，边喷边拌直至拌匀，均匀撒施在垄面，随后喷少量水，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。统计方法同实施例1。

实施例4

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，其组分为800ml/亩em菌、10kg/亩米糠、40kg/豆饼，10kg/亩米糠+40kg/豆饼记作1/2rb。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用：9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，用10倍清水将em菌液稀释，喷至米糠豆饼上，边喷边拌直至拌匀，均匀撒施在垄面，随后喷少量水，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。统计方法同实施例1。

对比例1

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，其组分为500g/亩木霉菌。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用：9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，用10倍清水将木霉菌化开，喷至土表，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。统计方法同实施例1。

对比例2

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，其组分为800ml/亩em菌。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用：9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，用10倍清水将em菌液稀释，喷至土表，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。统计方法同实施例1。

对比例3

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，其组分为250g/亩枯草芽孢杆菌。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用：9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，用10倍清水将枯草芽孢杆菌化开，喷至土表，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。统计方法同实施例1。

对比例4

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，其组分为125g/亩枯草芽孢杆菌，250g/亩木霉菌。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用：9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，用10倍清水将枯草芽孢杆菌和木霉菌化开，喷至土表，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。统计方法同实施例1。

对比例5

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，其组分为250g/亩枯草芽孢杆菌、10kg/亩米糠、40kg/豆饼，10kg/亩米糠+40kg/豆饼记作1/2rb。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用：9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，用10倍清水将枯草芽孢杆菌化开，喷至米糠豆饼上，边喷边拌直至拌匀，均匀撒施在垄面，随后喷少量水，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。统计方法同实施例1。

对比例6

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，其组分为250g/亩枯草芽孢杆菌、20kg/亩米糠、80kg/豆饼，20kg/亩米糠+80kg/豆饼记作rb。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用：9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，用10倍清水将枯草芽孢杆菌化开，喷至米糠豆饼上，边喷边拌直至拌匀，均匀撒施在垄面，随后喷少量水，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。统计方法同实施例1。

对比例7

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，其组分为125g/亩枯草芽孢杆菌，250g/亩木霉菌、10kg/亩米糠、40kg/豆饼，10kg/亩米糠+40kg/豆饼记作1/2rb。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用：9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，用10倍清水将枯草芽孢杆菌和木霉菌化开，喷至米糠豆饼上，边喷边拌直至拌匀，均匀撒施在垄面，随后喷少量水，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。统计方法同实施例1。

对比例8

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，其组分为125g/亩枯草芽孢杆菌，250g/亩木霉菌、20kg/亩米糠、80kg/豆饼，20kg/亩米糠+80kg/豆饼记作rb。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用：9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，用10倍清水将枯草芽孢杆菌和木霉菌化开，喷至米糠豆饼上，边喷边拌直至拌匀，均匀撒施在垄面，随后喷少量水，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。统计方法同实施例1。

对比例9

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，其组分为10kg/亩米糠、40kg/豆饼，10kg/亩米糠+40kg/豆饼记作1/2rb。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用：9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，将米糠豆饼拌匀，均匀撒施在垄面，随后喷少量水，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。统计方法同实施例1。

对比例10

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂，其组分为20kg/亩米糠、80kg/豆饼，20kg/亩米糠+80kg/豆饼记作rb。

一种防治草莓灰霉病的微生物生防制剂的应用：9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，将米糠豆饼拌匀，均匀撒施在垄面，随后喷少量水，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。统计方法同实施例1。

对比例11

9月上旬起垄，垄面50-60cm，移栽40-60天的草莓子苗，每条垄种2列，行距20cm，株距25-30cm。第55日，覆地膜前，喷少量清水在垄面，保持湿润后覆盖地膜。处理后第54天调查各处理灰霉病发病初期发病率，处理后第85天调查各处理发病高峰期发病率。统计方法同实施例1。

经两片试验地的统计分析，em菌和木霉菌能够有效降低草莓灰霉病的发病率(图1)，两者的防效显著高于枯草芽孢杆菌和半量枯草芽孢杆菌和木霉菌的处理组合(表1)。在发病不严重，发病率普遍不超过25％的试验地1中(图1a和1b)，发病初期不加菌对照发病率仅为4.00％～5.60％，木霉菌和em菌可将发病率降至1.60％以下(图1a)，发病高峰期不加菌对照发病率20.00％～23.20％，木霉菌和em菌可将发病率降至7.60％以下(图1b)，em菌和木霉菌防效可达60％以上(表1)。在发病严重，对照发病率均高于48％的试验地2中(图1c和1d)，虽然所有菌剂的防效均明显降低，但木霉菌和em菌的防效仍然是相对最高的(表1)，其发病率能够降低到20.40％～40.80％(图1c和1d)。施用枯草芽孢杆菌可以降低灰霉病发病率，但显然防效不佳，其防效平均仅为25.49％(表1)。半量枯草芽孢杆菌和木霉菌的处理组合(1/2枯草+1/2木霉)，没有表现出优势互补，其防效低于单施枯草芽孢杆菌，更远低于单施木霉菌(表1)，在发病严重地块与不加菌对照发病率无显著差异(图1c和1d)。与单施生防菌相比，添加有机物料米糠豆饼表现出发病率下降的趋势(图1)，其中外源添加全量米糠豆饼(rb)能够有效提高菌剂的防效，例如发病高峰时，木霉菌+rb防效(86.00％±4.47％)显著高于单施木霉菌(62.00％±6.52％)，同样的，em菌+rb防效(90.00％±5.00％)显著高于单施em菌(68.00％±5.48％)，即使是防效不佳的枯草芽孢杆菌和1/2枯草+1/2木霉处理中大多也表现出该趋势(表1)。这表明，为生防微生物提供足量的有机物作为生长的碳源和氮源能够增强其防效。

相比单施菌剂，外源添加有机物料使得土壤中的真菌、细菌、放线菌数目在两片试验地中均增加，且与有机物料投放量呈正相关(图2)，1/2rb可增加微生物数目0.43-8.86倍，rb可增加0.93-32.72倍，即使试验地1与试验地2相比，其耕作时间更长，有机质含量和土壤中速效养分更高导致其原始微生物丰度和构成具有明显差异，即土壤中可培养真菌和细菌数目比试验地2高出1个数量级，两者也具有相同的趋势。

表1添加有机物料和生防制剂对草莓灰霉病的防效

注：表中的数值分别代表平均值±标准误，同一列中左右两组不同小写字母分别表示各处理间和各生防制剂间差异显著(p＜0.05，邓肯法)。

本发明按照上述实施例进行了说明，应当理解，上述实施例不以任何形式限定本发明，凡采用等同替换或等效变换方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。