一种多功能生物杀菌剂及其生产方法与流程

本发明属于生物杀菌剂技术领域，具体涉及一种多功能生物杀菌剂及其生产方法。

背景技术：

杀菌按不同的方法大致分为物理杀菌、化学杀菌、生物杀菌三类，常见的物理杀菌主要有热力、紫外线、超声波、微波、电离辐射等，大多需要特殊的发生装置，化学杀菌是利用化学药物杀灭病原微生物，化学杀菌剂虽然杀菌谱广，但杀菌后普遍都有杀菌剂残留的危害，随着生物技术的快速发展，以中草药等植物提取物、生物酶、抗菌肽、噬菌体等为代表的生物产品开始进入杀菌学的研究领域，但其不但具有杀菌能力，与传统杀菌剂相比，还有刺激性、污染性、不良反应都较小的优点，这些生物产品逐渐被研发成新的生物杀菌剂。

本发明根据现有技术中存在的技术问题，提供了一种多功能生物杀菌剂，能够有效地抑制和杀灭农作物的真菌性病害和细菌性病害。

技术实现要素：

本发明的目的是为了解决背景技术中所提出的问题，而提供一种多功能生物杀菌剂，能够有效地抑制和杀灭农作物的真菌性病害和细菌性病害。

本发明的目的是这样实现的：

一种多功能生物杀菌剂，包括如下重量份的原料：5-10份防风提取物、5-10份辛夷提取物、5-10份透骨草提取物、1-8份溶葡萄球菌酶、0.1-3份抗菌肽和0.01-0.5份醋酸氯已定。

进一步的，所述防风提取物、辛夷提取物、透骨草提取物的质量比为1:1:1

进一步的，包括如下重量份的原料：5份防风提取物、5份辛夷提取物、5份透骨草提取物、3份溶葡萄球菌酶、2份抗菌肽和0.3份醋酸氯已定。

进一步的，包括如下重量份的原料：8份防风提取物、8份辛夷提取物、8份透骨草提取物、5份溶葡萄球菌酶、1.5份抗菌肽和0.1份醋酸氯已定。

进一步的，所述防风提取物的制取包括如下步骤：

1)将防风进行除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥；

2)称取上述干燥粉末，加入丙酮，超声处理20-30分钟，过滤，滤渣同条件再次处理，合并两次滤液；

3)将上述合并滤液蒸干后即得防风提取物；

进一步的，所述辛夷提取物的制取包括如下步骤：

1)称取一定量的辛夷洗净后放入真空干燥箱中于30-35℃下真空干燥4-5h，将样品放入烧瓶内，倒入蒸馏水；

2)将蒸馏萃取装置的一端连接烧瓶，并用恒温电热套进行加热，蒸馏萃取装置的另一端连接盛有二氯甲烷的烧瓶，盛有二氯甲烷的烧瓶放入60-65℃的恒温水浴锅中加热，同时蒸馏萃取2.5-3h；

3)萃取完成后，向盛有二氯甲烷的烧瓶内加入无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在40-45℃下减压蒸馏浓缩，得辛夷提取物；

进一步的，所述透骨草提取物的提取包括如下步骤：

1)将透骨草洗净后烘干，粉碎至30-60目，得到透骨草粉末；

2)向上述透骨草粉末中加入乙醇，在45-75℃下回流提取1-3h，过滤收集滤液，滤渣同条件再次提取，合并两次滤液，得到透骨草提取液；

3)将上述透骨草提取液干燥2-10h，获得透骨草提取物。

进一步的，所述生物杀菌剂还包括中和剂，所述中和剂包括：2-6％聚山梨酯-80、0.6-1.2％卵磷脂、0.1-0.8％甘氨酸、0.3-0.6％硫代硫酸钠和0.1-0.6％组氨酸。

进一步的，用于所述生物杀菌剂的中和剂包括：5％聚山梨酯-80、1％卵磷脂、0.5％甘氨酸、0.5％硫代硫酸钠和0.5％组氨酸。

进一步的，所述中和剂的鉴定包括如下步骤：

1)制备菌悬液：在无菌条件下，将营养肉汤用毛细吸管加入液体培养管内，洗吹至融化均匀成悬液状态，吸取少量上述悬液加入营养肉汤试管中，将试管置于35-37℃培养箱内进行恒温生化培养24h；

2)将含菌悬液样本的试管用漩涡混合器混合约20-30s，立即吸取菌悬液样本加至含稀释液的试管内，依次作倍比稀释；

3)将含量为3％的牛血清白蛋白作为有机干扰物依次等量加入上述稀释后的菌悬液试管中，混匀，置于20℃恒温水浴箱中；

4)制取含有杀菌剂和菌悬液的第一组，含有杀菌剂、菌悬液和中和剂的第二组，含有中和剂和悬菌液的第三组，含有稀释液和菌悬液的第四组；

5)将上述步骤连续重复3次，通过组间菌落数误差率的计算判断中和剂的合格性。

进一步的，组间菌落数误差率计算公式如下：

其中，w表示组间菌落数误差率，s1表示三次重复试验的三组间菌落的平均数，s2表示各组菌落的平均数，s表示三组菌落平均数之和。

进一步的，第一组和第四组的杀菌的灭菌值满足：

kl＝㏒n0-㏒nt，

其中，n0表示第四组的平均活菌数，nt表示第一组的活菌浓度。

进一步的，所述抗菌肽分子量n为2500-6800。

本发明还公开了所述多功能生物杀菌剂的生产方法，包括以下步骤：

1)原料的准备：将防风提取物、辛夷提取物、透骨草提取物、溶葡萄球菌酶、抗菌肽和醋酸氯已定按照规定的质量份数进行称取；

2)原料的混合及反应：将准备的原料经滤筒过滤后进入反应釜中进行混合及反应；

3)过滤：原料在混合及充分反应后，经滤盒过滤得到多功能生物杀菌剂。

本发明还公开了一种多功能生物杀菌剂的生产装置，包括反应釜、滤筒、滤盒，所述反应釜的内部上端设滤筒，所述反应釜的内部底端设搅拌机构，所述反应釜的外部底端连接滤盒。

进一步的，所述滤筒的底面和立面均设有孔径d为5-8μm的通孔，所述滤盒内设第一滤层和第二滤层，所述第一滤层的孔径d1为1-2μm，所述第二滤层的孔径d2为0.5-1.5μm。

进一步的，所述搅拌机构包括搅拌轴、螺旋刀片和搅拌桨，所述搅拌机构设于滤筒的下端，所述搅拌轴的一端连接反应釜的内部底端，所述搅拌轴的下端等间距设螺旋刀片，所述搅拌轴的上端等间距设搅拌桨。

进一步的，所述螺旋刀片与搅拌轴的夹角β1为5-45°，所述搅拌桨与搅拌轴的夹角β2为5-30°。

进一步的，为了提高所述多功能生物杀菌剂的杀菌效果，所述抗菌肽分子量n、滤筒通孔的孔径d、滤盒第一滤层的孔径d1和第二滤层的孔径d2满足以下关系：

d·(d1/d2)＝α·n^1/3；

其中，α为平衡系数，取值范围为1.1-2.3。

进一步的，为了提高搅拌效果，以进一步提高多功能生物杀菌剂的杀菌效果，所述螺旋刀片与搅拌轴的夹角β1与搅拌桨与搅拌轴的夹角β2之间满足β1·β2大于等于130小于等于1240。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

1、本发明提供的一种多功能生物杀菌剂，既能对有害生物起到抑制或杀灭作用，又不会对环境产生持续性的破坏，具有安全、低毒、高效的优点，中草药中含有的生物碱类、黄酮类及有机酸等具有良好的抑菌作用，且具有快速杀灭细菌繁殖体和真菌的效果，性能稳定，无毒，无致突变作用；溶葡萄球菌酶可以裂解细胞壁肽聚糖中的键，溶解细胞壁，杀死细菌，。

2、本发明提供的一种多功能生物杀菌剂，中和剂对杀菌剂有中和作用，可控制杀菌剂的反应时间，预防感染；能够有效地抑制和杀灭农作物的真菌性病害和细菌性病害。

3、本发明提供的一种多功能生物杀菌剂，对农作物的多种致病菌具有较好的杀菌效果，且具有长期稳定性，便于保存，采用中药提取物的生物蛋白类复合形成，无毒副作用，对皮肤无刺激性，无致敏作用，具有较高的安全性。

4、本发明提供的一种多功能生物杀菌剂，通过滤筒可将粉末药剂隔开，防止过多药材粉末颗粒聚集反应釜的底部，在长时间加热情况下造成糊底，滤盒内过滤层的设置，在提取过程中，提取液更加纯净，避免中药粉末进入提取液中导致装置堵塞，方便清洗，反应釜底部的搅拌机构可加快提取液的混匀，同时避免反应釜底部颗粒长时间堆积造成糊底。

5、本发明提供的一种多功能生物杀菌剂，通过设置所述抗菌肽分子量n、滤筒通孔的孔径d、滤盒第一滤层的孔径d1和第二滤层的孔径d2满足的关系，以提高所述多功能生物杀菌剂的杀菌效果。

6、本发明提供的一种多功能生物杀菌剂，通过设置述螺旋刀片与搅拌轴的夹角β1与搅拌桨与搅拌轴的夹角β2之间满足的关系，提高搅拌效果，以进一步提高多功能生物杀菌剂的杀菌效果。

附图说明

图1是本发明一种多功能生物杀菌剂组成示意图。

图2是本发明杀菌剂对菌株的杀灭效果示意图。

图3是本发明一种多功能生物杀菌剂的生产装置结构示意图。

图4是本发明一种多功能生物杀菌剂的生产装置滤筒示意图。

图5是本发明一种多功能生物杀菌剂的生产装置搅拌机构示意图。

图6是本发明一种多功能生物杀菌剂的生产装置滤盒示意图。

图中：1、反应釜；2、滤筒；3、搅拌机构；31、搅拌轴；32、搅拌桨；33、螺旋刀片；4、滤盒；41、第一滤层；42、第二滤层。

具体实施方式

下面结合附图对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

结合图1，一种多功能生物杀菌剂，包括如下重量份的原料：5份防风提取物、5份辛夷提取物、5份透骨草提取物、3份溶葡萄球菌酶、2份抗菌肽和0.3份醋酸氯已定。

实施例2

一种多功能生物杀菌剂，包括如下重量份的原料：8份防风提取物、8份辛夷提取物、8份透骨草提取物、5份溶葡萄球菌酶、1.5份抗菌肽和0.1份醋酸氯已定。

实施例3

一种多功能生物杀菌剂，包括如下原料：防风提取物、辛夷提取物、透骨草提取物、溶葡萄球菌酶、抗菌肽和醋酸氯已定。

所述防风提取物的制取包括如下步骤：

1)将防风进行除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥；

2)称取上述干燥粉末，加入丙酮，超声处理20-30分钟，过滤，滤渣同条件再次处理，合并两次滤液；

3)将上述合并滤液蒸干后即得防风提取物；

所述辛夷提取物的制取包括如下步骤：

1)称取一定量的辛夷洗净后放入真空干燥箱中于30-35℃下真空干燥4-5h，将样品放入烧瓶内，倒入蒸馏水；

2)将蒸馏萃取装置的一端连接烧瓶，并用恒温电热套进行加热，蒸馏萃取装置的另一端连接盛有二氯甲烷的烧瓶，盛有二氯甲烷的烧瓶放入60-65℃的恒温水浴锅中加热，同时蒸馏萃取2.5-3h；

3)萃取完成后，向盛有二氯甲烷的烧瓶内加入无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在40-45℃下减压蒸馏浓缩，得辛夷提取物；

所述透骨草提取物的提取包括如下步骤：

1)将透骨草洗净后烘干，粉碎至30-60目，得到透骨草粉末；

2)向上述透骨草粉末中加入乙醇，在45-75℃下回流提取1-3h，过滤收集滤液，滤渣同条件再次提取，合并两次滤液，得到透骨草提取液；

3)将上述透骨草提取液干燥2-10h，获得透骨草提取物。

实施例4

采用本发明的杀菌剂进行定量杀菌，包括如下步骤：

1)制备菌悬液：在无菌条件下，将营养肉汤用毛细吸管加入液体培养管内，洗吹至融化均匀成悬液状态，吸取少量上述悬液加入营养肉汤试管中，将试管置于35-37℃培养箱内进行恒温生化培养24h；

2)将含菌悬液样本的试管用漩涡混合器混合约20-30s，立即吸取菌悬液样本加至含稀释液的试管内，依次作倍比稀释；

3)将含量为3％的牛血清白蛋白作为有机干扰物依次等量加入上述稀释后的菌悬液试管中，混匀，置于20℃恒温水浴箱中；

4)制取含有杀菌剂和菌悬液的第一组和含有稀释液和菌悬液的第四组。

结合如图2所示，采用悬液定量杀菌方法，结果显示该杀菌剂的原液对金黄色葡萄球菌、链球菌和白色念珠菌作用5分钟后，其杀灭对数值(kl)均≥5.0。

实施例5

用于所述生物杀菌剂的中和剂包括：5％聚山梨酯-80、1％卵磷脂、0.5％甘氨酸、0.5％硫代硫酸钠和0.5％组氨酸的营养肉汤。

所述中和剂的鉴定包括如下步骤：

1)制备菌悬液：在无菌条件下，将营养肉汤用毛细吸管加入液体培养管内，洗吹至融化均匀成悬液状态，吸取少量上述悬液加入营养肉汤试管中，将试管置于35-37℃培养箱内进行恒温生化培养24h；

2)将含菌悬液样本的试管用漩涡混合器混合约20-30s，立即吸取菌悬液样本加至含稀释液的试管内，依次作倍比稀释；

3)将含量为3％的牛血清白蛋白作为有机干扰物依次等量加入上述稀释后的菌悬液试管中，混匀，置于20℃恒温水浴箱中；

4)制取含有杀菌剂和菌悬液的第一组，含有杀菌剂、菌悬液和中和剂的第二组，含有中和剂和悬菌液的第三组，含有稀释液和菌悬液的第四组；

5)将上述步骤连续重复3次，通过组间菌落数误差率的计算判断中和剂的合格性。

组间菌落数误差率计算公式如下：其中，w表示组间菌落数误差率，s1表示三次重复试验的三组间菌落的平均数，s2表示各组菌落的平均数，s表示三组菌落平均数之和。

则第三组和第四组的生长菌量在1×10⁷cfu/ml-5×10⁷cfu/ml之间，且两组的组件菌落数误差率小于12％，第二组的平均生长菌量大于5cfu/ml，第一组的菌数远远小于第二组的菌数。

实施例6

结合图3-6，一种多功能生物杀菌剂的生产装置，包括反应釜1，其特征在于：所述反应釜1的内部上端设滤筒2，所述滤筒2的底面和立面均设有孔径为5-8μm的通孔。

所述反应釜1的内部底端设搅拌机构3，所述搅拌机构3包括搅拌轴31、螺旋刀片33和搅拌桨32，所述搅拌机构3设于滤筒2的下端，所述搅拌轴31的一端连接反应釜1的内部底端，所述搅拌轴31的下端等间距设螺旋刀片33，所述搅拌轴31的上端等间距设搅拌桨32，所述螺旋刀片33与搅拌轴31的夹角为30°，所述搅拌桨32与搅拌轴31的夹角为30°。

所述反应釜1的外部底端连接滤盒4，所述滤盒4内设第一滤层41和第二滤层42，所述第一滤层41的孔径为1μm，所述第二滤层42的孔径为0.5μm。

为了提高所述多功能生物杀菌剂的杀菌效果，所述抗菌肽分子量n、滤筒通孔的孔径d、滤盒第一滤层的孔径d1和第二滤层的孔径d2满足以下关系：

d·(d1/d2)＝α·n^1/3；

其中，α为平衡系数，取值范围为1.1-2.3。

为了提高搅拌效果，以进一步提高多功能生物杀菌剂的杀菌效果，所述螺旋刀片与搅拌轴的夹角β1与搅拌桨与搅拌轴的夹角β2之间满足β1·β2大于等于130小于等于1240。能够有效地抑制和杀灭农作物的真菌性病害和细菌性病害

以上仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的保护范围内所做的任何修改，等同替换等，均应包含在本发明的保护范围之内。