技术特征：
1.一种中华鲟f2精子超低温冷冻保存方法，其特征在于，包括以下具体步骤：1)亲鱼催产：b超检查性腺，挑选性腺发育至ⅳ期、健壮无疾病的中华鲟f2雄鱼，称重、根据重量注射促黄体素释放激素后放入暂养池培育；2)鲜精采集：14
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20h后采集精液在4℃冷藏避光保存；3)鲜精活力检测：测定精子质量，在显微镜下进行观察，选择鲜精平均活力达80％、快速运动达10秒、寿命达80秒的精子进行冻存；4)冻存液配制：冻存液包括精子稀释液和抗冻剂，中华鲟f2精子稀释液用超纯水配制，配方：蔗糖23.4mmol/l，tris 30mmol/l，kcl 0.25mmol/l，调节ph值到8.0，置于4℃冰箱冷藏备用；采用甲醇作为抗冻剂，并提前置于4℃冰箱预冷；将4℃预冷的稀释液与甲醇按照4:1的体积比配制冻存液；5)精液稀释：取4℃预冷的冻存液到玻璃烧杯中，取等体积预冷的鲜精混匀，混匀后立即分装到1.8ml的冻存管，每管分装1
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1.5ml；6)冷藏平衡：分装完成后，将冻存管装到布袋中，于4
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6℃冰箱中平衡15min；7)降温入液氮：平衡完毕，取出布袋，在液氮表面上方10cm处平衡10min后，投入
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196℃的液氮中长期保存。2.根据权利要求1所示的中华鲟f2精子超低温冷冻保存方法，其特征在于，步骤1)中，所述的促黄体素释放激素为：注射用促黄体素释放激素a2。3.根据权利要求2所示的中华鲟f2精子超低温冷冻保存方法，其特征在于，所述的促黄体素释放激素用量为1μg/kg。4.根据权利要求1所示的中华鲟f2精子超低温冷冻保存方法，其特征在于，步骤2)中，采集精液的具体操作为：用有刻度带盖的500ml广口塑料瓶采用腹部挤压法采集精液，采精时避免吸到尿液、粪便及血液。5.根据权利要求1所示的中华鲟f2精子超低温冷冻保存方法，其特征在于，步骤3)中，具体操作为：在10
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10倍生物显微镜下进行观察，选择鲜精平均活力达80％、快速运动达10秒、寿命达80秒的精子进行冻存。6.根据权利要求1所示的中华鲟f2精子超低温冷冻保存方法，其特征在于，同一尾中华鲟f2采集的精子可重复步骤4)
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7)进行冻存。
技术总结
本发明公开了一种中华鲟F2精子的超低温冷冻保存方法，涉及鲟鱼类精子超低温冷冻保存技术领域，包括亲鱼催产、鲜精采集、鲜精活力检测、测定精子质量、冻存液配制、精液稀释、冷藏平衡、降温入液氮等步骤，本发明根据F2中华鲟精子特性研发出适用于F2中华鲟精子超低温冷冻保存相关试剂的具体配方及用量，包括稀释液配方、抗冻剂配方、冻存液配方、冻存液和鲜精稀释比率、抗冻剂终浓度。结合F2中华鲟精子超低温冷冻保存中的平衡过程与降温方法，即4
技术研发人员：田华 廖小林 朱滨 李键庸 田永胜 杨波
受保护的技术使用者：水利部中国科学院水工程生态研究所
技术研发日：2021.06.01
技术公布日：2021/9/9