1.本发明属于杂交油菜品种选育及种子生产技术领域，具体涉及从自然界获得萝卜胞质雄性不育恢复材料，育成甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系及甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系的转育方法。
背景技术：
2.萝卜胞质不育系具有育性稳定、彻底、不受环境影响等优点，在甘蓝型油菜中没有恢复基因，因此易获得保持系并育成稳定不育系，但萝卜胞质不育系的杂种优势利用中恢复系的选育是难点。
3.法国的pelletier等人通过原生质体融合技术，将欧洲萝卜中的恢复基因导入到甘蓝型油菜中，实现了三系配套。但是仍存在着恢复能力不够理想，部分雌性不育，较高硫苷与恢复基因连锁等问题。2005 年primard-brisset等利用伽马射线辐射诱变使dna片段重组，获得了低硫苷的甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系r2000，使萝卜胞质雄性不育杂交油菜在欧洲广泛运用。但国外的萝卜胞质雄性不育恢复基因及相关标记技术大都实施了专利保护，限制了其应用范围。
技术实现要素：
4.本发明的目的在于从自然界获得萝卜胞质雄性不育恢复材料并提供一种选育甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系的方法。
5.本发明的优点在于采用有效的方法从自然界中寻找到萝卜胞质雄性不育恢复材料，实现了萝卜胞质不育恢复基因的自主化，并通过多年连续与优良甘蓝型油菜杂交、回交、自交，育成优良甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系。
6.为了实现本发明，发明人结合多年不间断对萝卜胞质雄性不育恢复材料的筛选(寻找)及甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系的选育研究，最终获得如下高效的选育技术方案：
7.本发明是利用萝卜胞质雄性不育特性的瓢儿菜不育系为母本，在自然状态下与村民种植的萝卜自由授粉，收获其天然结实种子并种植鉴定，筛选其中的可育植株，自由授粉，获得萝卜胞质雄性不育恢复材料。与传育的利用甘蓝型油菜与萝卜杂交寻找恢复基因相比，其优点在于利用萝卜胞质雄性不育瓢儿菜不育系为桥梁，接受村民随意种植的萝卜花粉自由授粉，这比“有目的”的利用油菜与萝卜杂交寻找恢复基因的机率大很多。原因有二：其一是瓢儿菜比甘蓝型油菜更易于与萝卜花粉天然杂交结实，能更多的产生杂交后代；其二是利用萝卜胞质的瓢儿菜不育系作母本，因此只需在子代寻找到可育株即可找到萝卜胞质雄性不育恢复基因，相比利用子代再测恢容易得多。
8.进一步，利用上述可育株为母本，与甘蓝型油菜连续杂交、回交、自交，育成甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系。其特征在于，必须以上述可育株、子代可育株为母本，以保
证胞质为萝卜胞质雄性不育，且具有萝卜胞质雄性不育恢复基因，并同时传递到子代中去。
9.进一步，以上述育成的甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系为母本，与具有育种目标性状的甘蓝型油菜亲本为父本杂交、回交、自交，转育具有目标性状的甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系。
10.利用育成的具有育种目标性状的甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系与甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育系配制新品种(组合)。其优点在于容易选育萝卜胞质雄性不育系，且育性彻底、稳定，制种高效安全。按此方法容易选育新的恢复系：只需以上述具有不育胞质的恢复系作母本，与目标亲本杂交，子代回交或任意子代自交，育成无育性分离且具有目标性状的品系即为新恢复系。
具体实施方式
11.下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，在下面的描述中阐述了很多细节以便于充分理解本发明，但是本发明能够以很多不同于此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明的保护范围以权利要求书为准，不受下面公开的具体实施的限制。下述所使用的实验方法若无特殊说明，均为本技术领域现有常规方法和技术。
12.实施例1：筛选(寻找)萝卜胞质雄性不育恢复材料：
13.本发明包括萝卜胞质雄性不育恢复材料的获得，其恢复材料获得的方法具体步骤包括：
14.(1)发明人利用贵州大学林树春老师赠送的萝卜胞质白菜不育系与贵州思南县当地村民自留瓢儿菜(当地人称之为大瓢儿菜，作为蔬菜兼饲料用)杂交并连续回交，育成萝卜胞质瓢儿菜不育系。
15.(2)将上述萝卜胞质瓢儿菜不育系在多个地点发放给村民种植，在自然状态下与村民种植的萝卜自由授粉。
16.(3)收获上述自由授粉的天然结实种子并种植鉴定，于2012年春在种植鉴定圃发现可育植株。
17.(4)上述可育株挂牌标记，并让其自由授粉天然结实，收获其天然结实种子继续种植，获得萝卜胞质雄性不育恢复材料(因为细胞质为萝卜胞质雄性不育，其可育株必然具有萝卜胞质雄性不育恢复基因)。
18.实施例2：选育(转育)甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系 rs116
19.本发明包括将萝卜胞质雄性不育恢复基因转育到甘蓝型油菜中去，育成甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系，其育成甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系的方法具体步骤包括：
20.(1)利用实例1获得的萝卜胞质雄性不育恢复材料(可育株) 为母本，与优良甘蓝型油菜品系556(556不具有萝卜胞质不育恢复基因)为父本杂交，获得杂交f1种子。
21.(2)利用上述f1可育株作母本与556回交，获得bc1f1。
22.(3)利用上述bc1f1可育株作母本继续与556回交，获得bc2f1，用此同样的方法重复多次回交，获得bc6f1。
23.(4)利用上述bc6f1可育株套袋自交，获得bc6f2。
24.(5)利用上述bc6f2可育株套袋自交，获得bc6f3，在田间号为 116株行筛选到无不育株分离的株系，
25.(6)利用上述116株行为父本与甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育系成对测交鉴定，其子代全部可育，116株行即为萝卜胞质雄性不育恢复系，命名为rs116。经品质鉴定，芥酸≤1％，硫苷≤30μmol/g. 饼。
26.实施例3：优质高油份抗倒伏甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系rs211选育(转育)
27.本发明包括根据育种目标需求转育新的甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系，其转育新甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系的方法具体步骤包括：
28.(1)利用实例2获得的甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系 rs116为母本，与自育的优质高油份抗倒伏的甘蓝型油菜品系油研 211r(211r不具有萝卜胞质不育恢复基因)为父本杂交，获得杂交 f1种子。
29.(2)利用上述f1作母本与油研211r回交，获得bc1f1。
30.(3)利用上述bc1f1可育株作母本继续与优良甘蓝型油菜回交，获得bc2f1，用此同样的方法再重复2次回交，获得bc4f1。
31.(4)利用上述bc4f1，结合农艺性状选择并选用可育株套袋自交，获得bc4f2。
32.(5)利用上述bc4f2，结合农艺性状选择并选用可育株套袋自交，获得bc4f3，筛选到无不育株分离的株系，
33.(6)利用上述无不育株分离的株系为父本与甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育系成对测交鉴定。
技术特征：
1.一种萝卜胞质雄性不育恢复材料的获得及甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系的转育方法，其特征在于，包括如下步骤：1)选用萝卜胞质雄性不育特性的瓢儿菜不育系为母本，在自然状态下与萝卜自由授粉，收获其天然结实的种子，并将该种子进行种植与鉴定，筛选出其中的可育植株，自由授粉，获得萝卜胞质雄性不育恢复材料；2)选用已获得的萝卜胞质雄性不育恢复材料为母本，与甘蓝型油菜为父本杂交、回交、自交，育成甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系；3)以该甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系为母本，与具有育种目标性状的甘蓝型油菜亲本为父本杂交、回交、自交，转育具有育种目标性状的甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系。2.根据权利要求1所述的萝卜胞质雄性不育恢复材料的获得及甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系的转育方法，其特征在于，所述的萝卜胞质雄性不特性的瓢儿菜不育系为不结球白菜不育系或小白菜不育系。3.根据权利要求1所述的萝卜胞质雄性不育恢复材料的获得及甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系的转育方法，其特征在于，提供花粉的萝卜为包括村民长期自留种的萝卜或购买的萝卜品种。4.根据权利要求1所述的萝卜胞质雄性不育恢复材料的获得及甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系的转育方法，其特征在于，所述的作父本的甘蓝型油菜不具有萝卜胞质雄性不育恢复基因，以保证其恢复基因来源于步骤1)获得的萝卜胞质雄性不育恢复材料。5.根据权利要求1所的述萝卜胞质雄性不育恢复材料的获得及甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系的转育方法，其特征在于，回交时必须选用子代可育株为母本，以保持其细胞质为萝卜胞质雄性不育特性、并将步骤1)所述的萝卜胞质雄性不育恢复基因传递到子代。
技术总结
本发明提供了一种萝卜胞质雄性不育恢复材料的获得及甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系的转育方法，该方法包括选用萝卜胞质雄性不特性的瓢儿菜为母本，大规模种植于村庄，在自然状态下与村民种植的萝卜等十字花科蔬菜自由授粉，收获其天然结实种子并种植鉴定，选择其中的可育植株，自由授粉，收获其天然结实种子继续种植，获得萝卜胞质雄性不育恢复材料。第二步利用该萝卜胞质雄性不育恢复材料(可育株)为母本，与优良甘蓝型油菜为父本杂交并连续多代回交、自交，育成甘蓝型油菜萝卜胞质雄性不育恢复系。以该萝卜胞质雄性不育恢复系数为母本，与具有育种目标性状的甘蓝型油菜亲本为父本杂交、回交、自交，选育具有目标性状的甘蓝型油菜恢复系。的甘蓝型油菜恢复系。
技术研发人员：陈大伦 曾章丽 张瑞茂 李敏 陈芝能
受保护的技术使用者：贵州省油菜研究所
技术研发日：2021.11.17
技术公布日：2022/6/21