一种液态复合生物多控杀虫剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物农药技术领域，特别是用于水稻、玉米、小麦及果蔬的液态复合生 物多控杀虫剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 随着现代生物技术和基因工程的发展以及它们在农药中的应用，生物农药的兴起 已成为历史发展的趋势，而高效、低毒、无残留的微生物防治和生物农药已成为农业生物工 程研宄中最为活跃的领域之一。近十多年来，由于各国的重视，生物农药研宄和生产都有了 很大的发展，目前化学农药每年以2%的速度递减，而生物农药却以5%的速度递增。随着 人们对食品安全意识和环境保护意识的进一步提尚，尚毒、尚残留杀虫剂的品种和范围将 会进一步受到限制，而高效、低毒、对环境友好，且不易产生抗性的生物杀虫剂将会得到愈 来愈广泛的应用。
[0003] 在自然界，存在着许多对害虫有致病作用的微生物，利用这种致病性来防治害虫 是一种有效的生物防治方法。从这些病原微生物中筛选出施用方便、药效稳定、对人畜和环 境安全的菌种，进行工业规模的生产开发，从而制成微生物杀虫剂；从植物中提取、分离新 的天然活性化合物也是开发新农药的重要途径。生物杀虫剂是生物科学与工程技术结合发 展的产物，随着现代生物工程的迅速发展，生物杀虫剂将有很大的开发前景。
[0004] 目前，有关生物杀虫剂类和植物提取物农药的专利文献有：CN200810195704. 3公 开了一种复合生物杀虫剂，具有高效、广谱、无公害的特点；
[0005] CN200610000899. 2公开了一种淀粉废水生产苏云金杆菌微生物杀虫剂的方法，可 获得杀虫效果良好并且环境友好的微生物杀虫剂，既实现了淀粉废水的资源化利用，又降 低了微生物杀虫剂的生产成本；
[0006] CN201110029296. 6公开了利用马铃薯淀粉废水和蘑菇渣资源化生产木霉生防剂 的方法，该方法是以马铃薯淀粉生产过程中产生的高浓度有机废水和蘑菇渣为培养基原 料，采用液态-固态联合发酵的方法生产木霉生防剂，具有产生成本低，环境友好的特点， 产品能防治多种植物真菌病害，可以有效处理高浓度马铃薯淀粉废水和蘑菇渣有机固体废 弃物，减少了环境污染；
[0007] CN200610011155. 0公开了一种以剩饭菜为原料制备苏云金芽孢杆菌生物农药的 方法，优点在于工艺简单、原料易得、生产成本低、变废为宝；
[0008] CN200510094429. 2)公开了一种利用城市生活污泥发酵生产生物农药苏云金杆菌 的方法，用含固率为1. 5-5%的污水污泥作为发酵苏云金杆菌（B. t)的原料；
[0009] CN201010200184. 8公开了一种烟草基质复合生物杀虫剂及其制造方法，该复合生 物杀虫剂中包含至少一种烟草植物源杀虫组分和至少一种微生物源杀虫组分，选取烟草废 料为原料，经杀虫微生物发酵而制成，它是一种植物源和微生物源复合杀虫剂，同时，达到 提高烟草废料资源利用率和产品性能的双重目的。
[0010] 市售商品有，杭州果攸生态环境科技有限公司生产的"水谷欣"生物杀虫剂球孢白 僵菌，防治地下害虫：如蛴螬、金针虫、地老虎、蝼蛄；扬州绿源生物化工有限公司的"绿源" 微生物菌剂，防治蚊蝇；湖北农科谷光科技有限公司生产的生物杀虫剂"生绿"苏云金杆菌， 防治韭蛆、根结线虫。
[0011] 尽管如此，仍需要研制更高效、低毒、对环境友好，不易产生抗性的生物杀虫剂。
【发明内容】
[0012] 本发明的目的是提供一种液态复合生物多控杀虫剂。
[0013] 本发明的另一个目的是提供液态复合生物多控杀虫剂的制备方法。
[0014] 本发明使用的复合微生物菌剂是中国普通微生物菌种保藏管理中心CGMCC 1997 年版的菌种目录中公开的菌种，编号和菌株名是：
[0015] 菌种编号为 CGMCCL 932 的赌状芽抱杆菌（Bacillus cereus Frankland et Frankland)，菌种编号为CGMCC1.931 的短芽抱杆菌（Bacillus brevis Migula)，菌种 编号为 CGMCCL 1673 的球形芽抱杆菌（Bacillus sphaericus Meyer et Neide)，菌种 编号为CGMCCL 785的苏云金芽抱杆菌（Bacillus thuringiensis Berliner)，菌种编 号为CGMCC3. 4035的淡紫拟青霉菌（Paecilomyces lilacinus Samson)，菌种编号为 CGMCC3. 4273 的球孢白僵菌（Beauveria bassiana Vuillemin)，菌种编号为 CGMCC3. 3675 的金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae) 〇
[0016] 按照本发明所述的液态复合生物多控杀虫剂，其特征在于，由如下重量份配比的 原料组分制成：
[0017] 药用植物：菊苣4?7份、甜叶菊4?7份、苦参15?25份，
[0018] 复合菌剂：蜡状芽孢杆菌的菌液1?3份、短芽孢杆菌的菌液1?3份、球形芽孢 杆菌的菌液2?4份、苏云金芽孢杆菌的菌液7?13份、淡紫拟青霉菌的菌液1?3份、球 孢白僵菌的菌液1?3份及金龟子绿僵菌的菌液1?3份，
[0019] 水 45 ?60 份。
[0020] 按照本发明所述的液态复合生物多控杀虫剂，其特征在于，由如下重量份配比的 原料组分制成：
[0021] 药用植物：菊苣4?6份、甜叶菊4?6份、苦参18?22份，
[0022] 复合菌剂：蜡状芽孢杆菌的菌液2?3份、短芽孢杆菌的菌液2?3份、球形芽孢 杆菌的菌液2?4份、苏云金芽孢杆菌的菌液9?11份、淡紫拟青霉菌的菌液2?3份、球 孢白僵菌的菌液2?3份及金龟子绿僵菌的菌液2?3份，
[0023] 水 50 ?60 份。
[0024] 按照本发明所述的液态复合生物多控杀虫剂，其特征在于，药用植物原料组分按 重量份配比为：菊苣5?6份、甜叶菊5?6份、苦参18?20份。
[0025] 按照本发明所述的液态复合生物多控杀虫剂，其特征在于，其中所述药用植物原 料组分苦参用同重量份配比的艾蒿或藜芦代替。
[0026] 按照本发明所述的液态复合生物多控杀虫剂，其特征在于，由如下重量份配比的 原料组分制成：
[0027] 菊苣5份、甜叶菊5份、苦参20份、蜡状芽孢杆菌液2. 5份、球形芽孢杆菌液2. 5 份、短芽孢杆菌液3份、苏云金芽孢杆菌液11份、淡紫拟青霉菌液2. 5份、金龟子绿僵菌液 2. 5份、球孢白僵菌液2. 5份及水53份。
[0028] 按照本发明所述的液态复合生物多控杀虫剂的制备方法，其特征在于，如下步 骤：
[0029] A、药用植物提取物的制备：
[0030] a、称取药用植物苦参20公斤，加入60%乙醇80?90升，回流提取2小时，滤过， 将残渣重复提取2次，第1次加入60%乙醇40?45升，第2次加入60%乙醇30?35升， 合并滤液，减压回收乙醇，滤液浓缩至10升，加1 %盐酸，调PH3?4,滤过，滤液中加10%氢 氧化钠，调PHlO?11，用氯仿萃取4次，每次15升，合并氯仿层，用水10升洗涤，分出氯仿 层，水浴蒸干，残渣加无水乙醇溶解，至10公斤，摇匀，121°C灭菌20分钟，制得；
[0031] b、称取菊苣和甜叶菊各5公斤，加入80?100升无水乙醇，浸泡24小时，超声波 提取20分钟，将浸提液滤出，将残渣加入40?50升无水乙醇，再提取1次，合并滤液，浓缩 至10公斤，经121°C灭菌20分钟，制得；
[0032] B、复合菌剂的制备：
[0033] 制备所述蜡状芽孢杆菌液、球形芽孢杆菌液、短芽孢杆菌液或苏云金芽孢杆菌液 的发酵方法：
[0034] a、斜面菌种活化培养：取牛肉膏蛋白胨液体培养基，接入一种上述微生物的斜面 培养物，30?40°C条件下在摇床上振荡培养20?48小时，转速为60?120转/分，然后 转接到相同的培养基中培养，照此方法连续转接3?5次，将获得的培养液稀释后涂布到平 板固体培养基上，30?40°C条件下培养1?2天，转速为60?120转/分，待长出菌落后， 挑取大菌落在同样的固体平板培养基上划线，挑选单菌落转接到固体斜面培养基，培养得 到驯化菌株，保存备用；
[0035] b、二级摇瓶菌种培养：取牛肉膏蛋白胨液体培养基，接入一级斜面菌种，于30? 40°C下培养20?48小时，转速为60?120转/分，得二级摇瓶种子液；根据生产规模，进 一步采用种子罐进行种子的放大培养；
[0036] c、微生物菌液的发酵生产：取牛肉膏蛋白胨液体培养基，接入上述制备的发酵种 子液，于PH7. 2?8. 5、温度30?40°C，发酵1?2天，即得，经检验，每一种有效菌的数量 不得少于2亿/毫升后，符合国家标准GB-20287-2006,可作为生产菌液备用；
[0037] 制备所述淡紫拟青霉菌液、金龟子绿僵菌液或球孢白僵菌液的发酵方法：
[0038] a、斜面菌种活化培养：取PDA液体培养基，接入一种上述微生物的斜面培养物， 25?30°C条件下在摇床上振荡培养48?72小时，转速为60?120转/分，然后转接到相 同的培养基中培养，照此方法连续转接3?5次，将获得的培养液稀释后涂布到平板固体培 养基上，25?30°C条件下培养3?5天，转速为60?120转/分，待长出粗壮菌丝后，挑取 粗壮菌丝在同样的固体平板培养基上划线，挑选粗壮菌丝转接到固体斜面培养基，培养得 到驯化菌株，保存备用；
[0039] b、二级摇瓶菌