组蛋白去乙酰化酶抑制剂于改变蜂王浆中mrjp3蛋白质的新颖用图
【专利说明】组蛋白去乙酰化酶抑制剂于改变蜂王浆中MRJP3蛋白质的 新颖用途
[0001] 本申请是申请号为201010236081. 7、申请日为2010年7月22日，发明名称为"组 蛋白去乙酰化酶抑制剂于改变蜂王浆中MRJP3蛋白质的新颖用途"的发明专利申请的分案 申请。
技术领域
[0002] 本发明涉及促进蜂王子（蜂王幼虫）、蜂王蛹和蜂王生长的方法，所述方法是通过 以组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACi)或含有（一或多种）HDAC抑制剂的混合物或配方喂饲 年轻工蜂。具体来说，经喂饲HDACi的年轻工蜂所分泌的蜂王浆中，68kDa与64kDaMRJP3 蛋白质间的比例发生改变。
【背景技术】
[0003] 蜜蜂是现代农业中最具价值的生物物种之一，其生产多种蜂产品，例如蜂王浆、 蜂蜜、蜂胶与花粉，而这些产品提供给人类丰富的营养来源（赫尔纳（HellnerM.)等人， 2008)。因此，研究蜜蜂的生长、演化与发育是相当重要的课题。
[0004] 蜜蜂的社会属于母系社会，且由蜂王所领导。在蜂群当中，工蜂与蜂王均由受精卵 孵化而成；而雄蜂则是由无受精的卵子孵化生长而成（温斯顿（WinstonM.L.)，1987)。蜂 王将单一的卵产于蜂巢的个别巢房当中，在三到四天内，产下的卵可孵化出幼虫。孵化出的 幼虫由年轻工蜂负责喂食，并在巢房中经由数个发育阶段成长。当幼虫进入化蛹期间时，工 蜂会封闭巢房的开口。通常蜂王会在16天内自巢房羽化而出，而工蜂和雄蜂各需21天和 24天。蜂王个体较大，其寿命是一般工蜂的10-15倍。受精卵将发育为工蜂或蜂王，此受到 蜂群的调控。原则上，一群蜂只会有一只蜂王。此外，蜂王所食用的食物也有别于同一蜂群 中的其它蜂只；蜂王终其一生以蜂王浆为食物，而工蜂只在发育初期食用蜂王浆。部分学者 则认为工蜂在发育期仍食用蜂王浆，只是其所食用的蜂王浆与蜂王所食用的蜂王浆化学组 成可能不同。无论如何，蜂王楽可视为是延续蜂群最重要的物质（罗宾逊（RobinsonG.E.) 等人，1987)。
[0005] 蜂王浆是蜂王子与蜂王最重要的食物和养分来源，其由年轻工蜂的咽头腺与大颚 腺所分泌。蜂王浆的化学组成可能会随着蜂王子的不同发育阶段而有所改变。总的来说， 一般认为前述蜂王浆的成份改变是源自糖类、而非蛋白质组成的变化（派仁（PeirenN.) 等人，2005)。
[0006] 已知蜂王浆包含多种可促进人体健康的物质，并具有多样药理特性（高木-土井 (Takaki-DoiS.)等人，2009 ;曼奴（MannoorM.K.)等人，2009 ;和咖思科（GasicS.)等人， 2007)。因此，蜂王浆已广泛用于促进人类健康的保健产品。最近的研究发现，蜂王浆可以促 进免疫调控（维科威克（VuecvicD.)等人，2007)、抗菌（布卡（BoukraaL. )，2008)、滋养脑 神经（桥本（HashimotoM.)等人，2005)、抗癌和抗氧化（古蒂（GouH.)等人，2008)。研究 发现蜂王浆为乳白色浆状物质，其组成为：约60-70 %的水分、12-15 %的蛋白质、10-12 % 的糖类、3-5%的脂肪、和多种微量元素与矿物质（斯卡塞利（ScarselliR.)等人，2005)。 在蛋白质成份当中，约有80-90%属于水溶性蛋白质，而其余为非水溶性蛋白质。换句话说， 蜂王浆中所含的蛋白质成份多为水溶性蛋白质。
[0007] 在上述水溶性蛋白质中，以MRJP(主要蜂王浆蛋白质，MajorRoyalJelly Proteins)家族（MRJP1-9)为主（斯密佐娃（SchmitzovaJ.)等人，1998)。所述MRJP蛋 白质的氨基酸序列虽已经分析，然而，其所负责的作用和功能尚待研究。
[0008] MRJPl在蜜蜂脑部被发现，其可能与蜜蜂行为有关。MRJPl占蜂王浆中水溶性蛋 白质的44%，而且是所有MRJP家族蛋白质中含量最高者（玛勒科瓦（MalecovaB.)等人， 2003) 。目前针对MRJP3的研究居多，一般认为其与免疫调控有关（科诺（KohnoK.)等人， 2004) 。MRJP3占蜂王浆中整体水溶性蛋白质的12 %，而且其含量在所有MRJP蛋白质（MRJPs 1-9)中居第二位。MRJP3的特点在于其抗过敏和抗发炎活性。此外，MRJP的高多态性基因 可导致MRJP3蛋白质变异体（例如60-70kDa蛋白质）的生成（斯特芬-艾尔伯特（Stefan Albert)等人，1999)。
[0009] MRJP蛋白质提供丰富的必需氨基酸和其它营养成份（古泽（FurusawaT.)等人， 2008)。蜂王浆是蜂王子唯一的营养来源，而MRJP蛋白质则是蜂王浆中最重要的蛋白质。因 此，需要研发具有特殊组成的蜂王浆。
【发明内容】
[0010] 本发明提供一种方法，经所述方法培育的蜜蜂幼虫相比于正常幼虫，重量至少大 50%、大一倍（100% )、甚至大数倍；经所述方法培育的蜂蛹相比于正常蜂蛹，重量至少大 50%、甚至大一至数倍；经所述方法培育的蜂王相比于正常蜂王，重量至少大50%、甚至大 一至数倍。
[0011] 本发明提供一种培育相比于对照组幼虫重量至少大50%、甚至大一倍（100% )的 蜜蜂幼虫的方法；所述方法包括以一种HDAC抑制剂或数种HDAC抑制剂的混合物喂饲年轻 工蜂，并以所述年轻工蜂所分泌的蜂王浆喂饲幼虫。其中对照组的幼虫所食用的蜂王浆是 由未喂饲HDAC抑制剂或数种HDAC抑制剂的混合物的年轻工蜂分泌。
[0012] 本发明提供一种培育相比于对照组蜂蛹重量至少大50%的蜂蛹、或相比于对照组 蜂王重量至少大50%的蜂王的方法；所述方法包括以一种HDAC抑制剂或数种HDAC抑制剂 的混合物喂饲年轻工蜂，并以所述年轻工蜂所分泌的蜂王浆喂饲幼虫，而获得由所述幼虫 发育而成的蛹或蜂王，其中对照组的蛹或蜂王由食用未喂饲HDAC抑制剂或数种HDAC抑制 剂混合物的年轻工蜂所分泌的蜂王浆的蜜蜂幼虫发育而成。
[0013] 本发明另外提供一种蜂王浆，其所含68kDa与64kDaMRJP3蛋白质的比例相比于 对照组蜂王浆有所改变。
[0014] 本发明另外提供一种调控工蜂mrjp3基因的表观遗传（epigenetics)的方法，其 包括以HDAC抑制剂喂饲工蜂以调控工蜂的mrjp3基因表达。
【附图说明】
[0015] 图1显示喂饲台湾绿蜂胶萃取物的年轻工蜂分泌特殊蜂王浆，所述蜂王浆诱发幼 虫的快速生长。U-I和U-2 :对照组；A-I和A-2 :经I. 25g/kg的台湾绿蜂胶萃取物处理者； B-I和B-2 :经2. 50g/kg的台湾绿蜂胶萃取物处理者；C-I和C-2 :经5.Og/kg的台湾绿蜂 胶萃取物处理者。
[0016] 图2显示喂饲蜂胶素C的年轻工蜂分泌特殊蜂王浆，所述蜂王浆诱发幼虫的快速 生长。U-2 :对照组；C1-2 :经50mg/kg的蜂胶素C处理者；C2-2 :经100mg/kg的蜂胶素C处 理者。
[0017] 图3显示喂饲蜂胶素G的年轻工蜂分泌的蜂王浆中所鉴别出的水溶性蛋白质的组 成。所述样品在不同时间点收集。U-I:对照组；T-I:经5.Og/kg台湾绿蜂胶萃取物处理的 阳性对照组；Gl-I:经150mg/kg蜂胶素G处理者；G2-1 :经300mg/kg蜂胶素G处理者；G3-1 : 经600mg/kg蜂胶素G处理者。
[0018] 图4显示喂饲NBM-HD-I的年轻工蜂分泌的蜂王浆中所鉴别出的水溶性蛋白质的 组成。所述样品在不同时间点收集。U-I:对照组；T-I:经5.Og/kg台湾绿蜂胶萃取物处理 的阳性对照组；Hl-I:经 50mg/kgNBM-HD-I处理者；H2-1 :经 100mg/kgNBM-HD-I处理者； H3-1 :经 200mg/kgNBM-HD-I处理者。
[0019] 图5显示二维凝胶电泳分析的结果，其目的在于分析在72小时自经NBM-HD-I 处理的组别的幼虫萃取出的水溶性蛋白质。L-I:MRJP1 ;L-2 :MRJP3 ;L-3