一种杀菌剂组合物及其在炭疽病菌分离中的应用

文档序号:8270925阅读:447来源:国知局
一种杀菌剂组合物及其在炭疽病菌分离中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物分离领域,具体地说,涉及一种杀菌剂组合物及其在炭疽病菌 分离中的应用。
【背景技术】
[0002] 炭疽病菌(Colletotrichumspp.)是一种重要的病原菌,其分布广泛,且寄 主繁多,能够危害多种作物,树木、观赏植物等,同时也可以引起人体的疾病。引起 炭疽病的病原菌有炭疽属内的多个种(Colletotrichumspp.),其中,胶孢炭疽病菌 (C.gloeosporioides)、尖孢炭疽病菌(C.acutatum)、平头炭疽病菌(C.truncatum)是导致 我国很多地区多种作物炭疽病发生菌中危害的优势种。该病原菌引起的炭疽病是一种世界 范围内的重要病害,其中辣椒炭疽病即是炭疽病菌侵染辣椒后造成的重要病害,在我国各 辣椒种植区均有报道,在世界各地均有分布,以亚洲发生最为严重,且我国各辣椒种植区均 有报道,通常也是由上述多种炭疽病菌复合侵染所致。其主要危害辣椒叶片和果实,每年都 给辣椒生产带来严重的损失,一般减产为10%?20%左右,严重的减产可达50%以上,是 影响我国辣椒生产的主要病害之一。
[0003] 辣椒炭疽病的初侵染来源包括潜伏在种子内的菌丝或附着在种子表面的分生孢 子,或在病残体上越冬的分生孢子盘、菌丝体等。病菌多从寄主的伤口侵入,借风雨传播蔓 延,进行再侵染。辣椒炭疽病发病初期呈水渍状圆斑,进而发展为中央灰褐色,有同心轮纹, 着生小黑点的圆型或不规则型病斑,干燥时呈现出膜状且易破裂。当病菌侵染叶片时,初期 病斑呈褪绿水渍状,后慢慢扩大,病斑中间灰白色,周围褐色。在果实上,病斑表面初期为水 渍状,逐渐扩展为褐色凹陷,圆形或不规则形状,病斑上生有黑点,为病原菌分生孢子。
[0004] 辣椒炭疽病初侵染是以种传为主,再侵染主要依靠气流和雨水传播。再侵染过程 常与早疫病菌复合侵染,由于早疫病菌生长速率较炭疽病菌快,且其引起的早疫病发病症 状与炭疽病较难区分,因此给炭疽病菌的分离造成了较大的干扰。此外,在炭疽病发病后 期,发病部位常伴随有镰刀菌等杂菌,因此在炭疽病菌的实际分离过程中经常难以高效、准 确地成功分离获得炭疽病菌。为了进一步开展炭疽病菌的致病性和遗传多样性等相关研 宄,以及准确调查病原菌的越冬菌量和田间发病情况,为做好病害的预测预报提供指导,进 一步筛选高效的药剂,最终达到有效防治该病害的目的,分离获得纯化的炭疽病菌是必要 的前提条件。
[0005] 常规的病原菌分离方法是《植病研宄方法》介绍的用75%乙醇和0. 1%升汞液表 面消毒处理。实际工作中,在实验室进行分离的炭疽样本往往不是新鲜样品,而是经田间采 样后存放有一定时间的病残体,这些发病组织中就不可避免的常常带有其他杂菌,按常规 方法进行分离组织病原菌时,由于这些杂菌尤其是早疫病菌、镰刀病菌等的生长较炭疽病 菌迅速,其菌丝常将炭疽病菌覆盖,而快速生长的细菌也会抑制炭疽病菌的生长。因此,利 用普通培养基从病组织中分离辣椒炭疽病菌时,病组织仅经过表面消毒处理,达不到分离 纯化的目的。若表面消毒时间太长,往往在杀死非目标菌的同时,也会把将目标菌杀死,造 成目标菌分离率低或难于分离到目标菌。

【发明内容】

[0006] 为了解决现有技术中存在的问题,本发明的目的是提供一种杀菌剂组合物及其在 炭疽病菌分离中的应用。
[0007] 为了实现本发明目的,本发明首先提供一种杀菌剂组合物,所述杀菌剂组合物包 括啶酰菌胺、氰烯菌酯和青霉素。
[0008] 进一步地,所述杀菌剂组合物还包括利福平,所述杀菌剂组合物中啶酰菌胺、氰烯 菌酯、利福平和青霉素的质量比为(10-25) :(5-10) :(50-100) :(50-100)。
[0009] 作为优选,所述杀菌剂组合物中啶酰菌胺、氰烯菌酯、利福平和青霉素的质量比为 10 :5 :50 :50,或 20 :7 :70 :70,或 25 :10 :100 :100。
[0010] 进一步地,所述杀菌剂组合物还包括硫酸新霉素,所述杀菌剂组合物中啶酰菌胺、 氰烯菌酯、硫酸新霉素和青霉素的质量比为(10-25) :(5-10) :(30-50) :(50-100)。
[0011] 作为优选,所述杀菌剂组合物中啶酰菌胺、氰烯菌酯、硫酸新霉素和青霉素的质量 比为 10 :5 :30 :50,或 20 :7 :40 :70,或 25 :10 :50 :100。
[0012] 本发明还提供了含有前述杀菌剂的培养基,所述培养基为PDA培养基。
[0013] 本发明还提供了所述培养基在分离炭疽病菌中的应用。
[0014] 本发明还提供了一种分离炭疽病菌的方法,利用所述培养基培养样本,得到炭疽 病菌;其中,所述样本为感染炭疽病菌的植物叶片、果实。
[0015] 进一步地,所述方法具体为:将感染炭疽病菌的组织使用清水清理干净后充分晾 干,切取病健交界处的小块组织接种在权利要求6所述的培养基上,28°C下黑暗培养,至有 菌丝长出;挑取菌丝转接到PDA培养基上培养,待长满培养皿后置于28°C黑光灯下培养7d, 诱导其产生孢子;加入灭菌水于培养皿中洗脱孢子,并挑单个孢子置于PDA培养基上培养, 至长出菌落,得到炭疽病菌。
[0016] 其中,所述PDA培养基的制备方法为:称取马铃薯200g,削皮切块后置于IL蒸馏 水中加热30分钟,用四层纱布过滤收集滤液后再次定容至1L,加入14g琼脂粉和18g葡萄 糖煮沸,121°C湿热灭菌20分钟,即得。
[0017] 本发明的有益效果在于:
[0018] 本发明提供的培养基具有可行性、准确性、实用快捷和成本低廉、制备简便的特 点。利用本发明所述培养基分离炭疽病菌,可解决炭疽病菌等植物病原真菌分离过程中各 种非目标真菌和细菌污染严重的问题,且速度快,效率高,省时、省力。本发明为成功分离其 他真菌菌株提供了参考,为进行田间一次性分离以及室内纯化炭疽病菌提供技术支持。本 发明所述培养基可用于简便、快捷地从病株组织上一次性分离炭疽病菌以及室内纯化炭疽 病菌。
【附图说明】
[0019] 图1为两种真菌抑制剂对炭疽病菌、早疫病菌和镰刀病菌的抑制作用。
[0020] 图2为四种抗生素对植株叶片表面细菌的抑制作用。
[0021] 图3为四种抗生素对果皮表面的细菌抑制作用。
[0022] 图4为辣椒炭疽病的发病症状。
【具体实施方式】
[0023] 以下实施例用于说明本发明,但不用来限制本发明的范围。
[0024] 啶酰菌胺原药购自北京明德立达农业科技有限公司,其主要活性成分的化学名称 是2-氯-N-(4'_氯二苯-2-基)烟酰胺,通用名称为啶酰菌胺,分子式:C18H12C12N2Otl该药 中主要活性成分物质的质量百分含量为95. 0 %。
[0025] 氰烯菌酯原药由农业部农药检定所提供,其主要活性成分的化学名称是:2_氰 基-3-氨基-3-苯基丙烯酸乙酯,通用名称为氰烯菌酯,分子式:C12H12N2O2。该药中主要活 性成分物质的质量百分含量为93. 4%。
[0026] 青霉素、氯霉素、利福平和硫酸新霉素,均购自北京拓英坊科技有限公司。
[0027] 实施例1杀菌剂
[0028] 所述杀菌剂包括啶酰菌胺、氰烯菌酯、利福平和青霉素。
[0029] 所述杀菌剂中啶酰菌胺、氰烯菌酯、利福平和青霉素的质量比为10 :5 :50 :50。
当前第1页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1