一种防治黄瓜南方根结线虫病的组合菌剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物防治领域，尤其设及一种防治黄瓜南方根结线虫病的组合菌剂及 其制备方法。
【背景技术】
[0002] 根结线虫是一种高度专化型的杂食性植物病原线虫，线虫寄主范围广泛，常为害 瓜类、茄果类、豆类及萝K葫萝K窝宦、白菜等30多种蔬菜，还能传播一些真菌和细菌性 病害，是当前保护地蔬菜重要害虫之一。随着保护地蔬菜生产面积增加，特别是日光温室大 面积推广W来，复种指数增加，加之重巷多年，导致根结线虫危害日趋严重，一般可造成减 产10 % - 20 %，严重可达30 % - 70 %，甚至绝产。目前国内防治该病害多采用化学防治和 农业防治，效果不太理想。因此，蔬菜根结线虫的生物防治作为一项关键技术受到了广泛重 视。蔬菜根结线虫防治研究中，一定条件下AM真菌和PGPR的生防潜力和效应有待评价。
【发明内容】
[0003] 未解决上述问题，本发明提供一种防治黄瓜南方根结线虫病的组合菌剂，所述组 合菌剂包括AM真菌+PGPR菌剂，是在9种单一菌剂（地表球囊霉、根内球囊霉、摩西球囊 霉、刺无梗囊霉、易误巨抱囊霉、巧光假单胞菌、蜡状芽抱杆菌、多粘类芽抱杆菌、枯草芽抱 杆菌）和12种组合菌剂（摩西球囊霉+多粘类芽抱杆菌、摩西球囊霉+枯草芽抱杆菌、地 表球囊霉+蜡状芽抱杆菌、地表球囊霉+多粘类芽抱杆菌、地表球囊霉+枯草芽抱杆菌、根 内球囊霉+巧光假单胞菌、根内球囊霉+蜡状芽抱杆菌、刺无梗囊霉+多粘类芽抱杆菌、刺 无梗囊霉+枯草芽抱杆菌、刺无梗囊霉+巧光假单胞菌、易误巨抱囊霉+巧光假单胞菌、易 误巨抱囊霉+蜡状芽抱杆菌）中根据生长状况和抗线虫情况筛选出来的，接种量为每株黄 瓜接种AM真菌4000-6000接种势，3X 108CFU/ml浓度的PGPR菌5-15ml。
[0004] 所述组合菌剂进一步优选为为摩西球囊霉和枯草芽抱杆菌，接种量为每株黄瓜接 种摩西球囊霉5000接种势，3X l〇sCFU/ml浓度的枯草芽抱杆菌10ml。
[0005] 制备如权利要求1所述防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂的方法为（1)所述AM真 菌菌种经S叶草在灭菌沙±中扩繁8-10个月，W抱子、菌根化根段、±壤中的菌丝体和根 围±壤组成的接种混合物备用；（2)所述PGH?菌株转移到牛肉膏蛋白腺液体培养基上， 25-30°C下震荡培养28-3化，细菌悬浮液均稀释到浓度为3 X l〇sCFU/ml。进一步优化为摩 西球囊霉种经S叶草在灭菌沙±中扩繁8-10个月，W抱子、菌根化根段、±壤中的菌丝体 和根围±壤组成的接种混合物备用；所述枯草芽抱杆菌菌株转移到牛肉膏蛋白腺液体培养 基上，29°C下震荡培养30h，细菌悬浮液均稀释到浓度为3X 108CFU/ml。
[0006] 一种防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂的应用方法，由W下步骤组成：
[0007] (1)播种时接种AM真菌，接种量为每株黄瓜5000接种势；
[000引 （2)黄瓜生长至S叶一屯、时用灌根法接种PGPR，接种量为每株黄瓜接种浓度 3X10化即/ml的菌液10ml。
[0009] 进一步优选为：
[0010] (1)播种时接种摩西球囊霉，接种量为每株黄瓜5000接种势；
[0011] (2)黄瓜生长至=叶一屯、时用灌根法接种枯草芽抱杆菌，接种量为每株黄瓜接种 浓度3 X l〇8c即/ml枯草芽抱杆菌10ml。
[0012] 与现有技术相比，本发明的优点和积极效果：
[0013] 1、传统化学防治导致线虫抗药性增强，虫口密度上升，环境污染加重，本发明属于 生物防治，不会对环境造成污染，且防效在盆栽条件下达到68. 4%。
[0014] 2、本发明作为生物菌剂，具有稳定、经济、长效、相对安全的特点，不需像化学药剂 需要多次喷洒，只需一次接种即可达到防治效果，减轻环境污染。
[0015] 3、本生物菌剂不仅可W防治根结线虫，还对黄瓜生长起到促进作用，可作为生物 肥料使用。
【具体实施方式】
[0016] 实施例1 ;
[0017] (1)摩西球囊霉（Glomus mosseae)，文中W Gm表示，经S叶草在灭菌沙±中扩繁 8-10个月，W抱子、菌根化根段、±壤中的菌丝体和根围±壤组成的接种混合物备用；枯草 芽抱杆菌炬acillus subtilis)，文中WBS表示，菌株转移到牛肉膏蛋白腺液体培养基上， 29°C下震荡培养30h，细菌悬浮液均稀释到浓度为3X l〇sCFU/ml备用。
[001引 做播种时接种摩西球囊霉，接种量为每株黄瓜5000接种势潰瓜生长至S叶一 屯、时用灌根法接种枯草芽抱杆菌，接种量为每株黄瓜接种浓度3 X l0sCFU/ml枯草芽抱杆菌 10ml。
[0019] 对比实施例1-10 ;
[0020] (1)供试AM真菌菌剂有地表球囊霉（Glomus versi化rme)、根内球囊霉 (Glomus intraradices)、刺无梗囊霉（Acaulospora spinosa)、易误巨抱囊霉（Gigaspora decipens)4种，分别由Gv、Gi、Gm、Asp、Giga表示，由青岛农业大学菌根生物技术研究所提 供。菌种是经S叶草在灭菌沙±中扩繁8-10个月，W菌根化根段、±壤中的菌丝体和根围 ±壤组成的接种混合物。
[0021] 供试PGPR有巧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens)、蜡状芽抱杆菌 炬acillus cereus)、多粘类芽抱杆菌（Paenibacillus polymyxa)3 种，文章中分别 WPF、 BC、PP表示，菌株转移到牛肉膏蛋白腺液体培养基上，28°C下震荡培养30h。细菌悬浮液均 稀释到浓度为3X 108c化/mL。
[002引 似播种时接种AM真菌，接种量为每株黄瓜5000接种势潰瓜生长至立叶一屯、时 用灌根法接种PGPR，接种量为每株黄瓜接种浓度3X l0sCFU/ml的菌液10ml。
[0023] 对比试验及结果分析：
[0024] 1.供试品种及处理；供试黄瓜品种为津优35号，将黄瓜种子用75%酒精消毒后浸 种12h，放在垫有滤纸的培养皿中，置于恒温培养箱中，于28°C下催芽，出芽后播种。
[002引 2.南方根结线虫制成卵悬浮液，W Mi表示，接种3000卵/株。
[0026] 3.试验在青岛农业大学日光温室进行。试验用基质为± ;胚石；草炭=2 ; 1 ; 1，基质用高压灭菌锅121°C灭菌比，灭菌后装入用酒精消毒的16cmX22cm花盆中。初步试 验设不接种对照（CK)和 22 个处理，分别为 Gm、Gv、Gi、Asp、Gigaspora、PF、BC、PP、BS、Gm+PP、 Gm+BS、Gv+BC、Gv+BS、Gv+PP、Gi+PF、Gi+BC、Asp+PF、Asp+BS、Asp+PP、Giga+PF、Giga+BC，随 机排列，每个处理S次重复，根据生长状况筛选出Gm+BS、Gv+BS、Gv+PP、Gi+BC四个组合菌 剂，进行下一步试验。
[0027] 试验设不接种对照（CK)和22个处理，分别为Gm、Gv、Gi、PF、BC、PP、BS、Gm+BS、 Gv+BS、Gv+PP、Gi+BC、Gm+Mi、Gv+Mi、Gi+Mi、PF+Mi、BC+Mi、PP+Mi、BS+Mi、Gm+BS+Mi、 Gv+BS+Mi、Gv+PP+Mi、Gi+BC+Mi，随机排列，每个处理4次重复。种子发芽后播种，播种前将 5000接种势单位（IPU) AM真菌接种物加入花盆，对照则加入等量的灭菌混合接种物和接种 物滤液，每盆2粒。昼温27°C -30°C、夜温16°C -18°C，出苗后每盆间苗后留1株苗，待幼苗 子叶出±后每2d诱1次水，黄瓜生长至S叶一屯、时采用灌根法接种PGPR和南方根结线虫， PGHU农度为3X l〇8c化/mL悬浮液，每株接10ml，南方根结线虫3000卵/株。黄瓜生长期 间适当补充化agland营养液，其他常规管理。
[002引 4.结果与分析
[0029] 4. 1黄瓜根结线虫发病状况
[0030] 由下表可W看出，摩西球囊霉+枯草芽抱杆菌组合菌剂接种的黄瓜病情指数最 低，达到30%，其防效最高，达到68. 4%。
[0031]
【主权项】
1. 一种防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂，其特征在于：所述组合菌剂包括AM真菌 +PGPR菌剂，接种量为每株黄瓜接种AM真菌4000-6000接种势，3 X 108CFU/ml浓度的PGPR 菌剂 5_ 15ml。
2. 如权利要求1所述的一种防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂，其特征在于：所述组 合菌剂为摩西球囊霉和枯草芽孢杆菌，接种量为每株黄瓜接种摩西球囊霉5000接种势， 3X 108CFU/ml浓度的枯草芽孢杆菌10ml。
3. 制备如权利要求1所述防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂的方法，其特征在于：所述 AM真菌菌种经三叶草在灭菌沙土中扩繁8-10个月，以孢子、菌根化根段、土壤中的菌丝体 和根围土壤组成的接种混合物备用；所述PGPR菌株转移到牛肉膏蛋白胨液体培养基上， 25-30°C下震荡培养28-32h，细菌悬浮液均稀释到浓度为3 X 108CFU/ml。
4. 如权利要求3所述的防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂的制备方法，其特征在于：摩 西球囊霉种经三叶草在灭菌沙土中扩繁8-10个月，以孢子、菌根化根段、土壤中的菌丝体 和根围土壤组成的接种混合物备用；所述枯草芽孢杆菌菌株转移到牛肉膏蛋白胨液体培养 基上，29°C下震荡培养30h，细菌悬浮液均稀释到浓度为3 X IO8CFUAiI。
5. -种防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂的应用方法，其特征在于由以下步骤组成： ⑴播种时接种AM真菌，接种量为每株黄瓜5000接种势； (2)黄瓜生长至三叶一心时用灌根法接种PGPR，接种量为每株黄瓜接种浓度 3X108CFU/ml 的菌液 10ml。
6. 如权利要求5所述的一种防治黄瓜根结线虫病的组合菌剂的应用方法，其特征在于 由以下步骤组成： (1) 播种时接种摩西球囊，接种量为每株黄瓜5000接种势； (2) 黄瓜生长至三叶一心时用灌根法接种枯草芽孢杆菌，接种量为每株黄瓜接种浓度 3 X108CFU/ml枯草芽抱杆菌10ml。
【专利摘要】本发明属于生物防治领域，是一种防治温室蔬菜根结线虫病害的生防菌剂。该复合微生物菌剂包括摩西球囊霉接种物和枯草芽孢杆菌发酵液，该组合菌剂是在9种单一菌剂和12种组合菌剂中根据生长状况和抗线虫情况筛选出来的。每份复合微生物菌剂中含5000接种势摩西球囊霉，枯草芽孢杆菌发酵液总活菌数达到3×108CFU/ml，将摩西球囊霉和枯草芽孢杆菌菌剂复配在一起后，相比于单独的摩西球囊霉菌剂或枯草芽孢杆菌菌剂，二者呈现出非常显著的协同增效的防治根结线虫功效，对于根结线虫的防效有了显著改善。
【IPC分类】A01N63-04, A01P5-00, A01G13-00
【公开号】CN104621184
【申请号】CN201510036361
【发明人】李敏, 韩亚楠, 刘润进
【申请人】青岛农业大学
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年1月23日