一种杀菌组合物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物防治领域，具体地说，涉及一种杀菌组合物及其应用。
【背景技术】
[0002] 植物病害一直严重地威胁着农业生产。人类防治植物病害可以追溯到几千年前， 过去使用的多为植物源或无机化学农药。20世纪40年代初期，有机合成农药大量产生，有 效地控制了病害，但抗药性、环境污染和人类健康受到威胁，即3R(Resistance, Residue, Re surgence)问题的出现引起了人们的广泛关注，于是生物防治的研究开发应用被提到了议 事日程上来，并得到各国政府的重视。从植物病害防治的角度来讲，生物防治就是利用生物 及其代谢产物控制病原体从而达到防治植物病害的方法。它的实质就是利用生物种间关 系、种内关系，调节有害生物种群密度，即生物群防治生物群。植物病害生物防治主要有如 下模式：真菌防治真菌病害、细菌防治真菌病害、细菌防治细菌病害、病毒噬菌体防治细菌 病害、真菌防治线虫病害、细菌防治线虫病害和病毒弱毒株防治病毒病害等。
[0003] 荧光假单胞杆菌，是根际促生细菌中研究较多的一种细菌，其拮抗病菌的机理涉 及营养竞争、生态位排斥、产生抗生素、水解酶等，诱导植物产生系统抗性，抑制病原菌孢子 萌发、消解菌丝、阻隔病菌侵染等方式，减少植物病害的发生。
[0004] 粉红粘帚霉，是一种真菌，能释放一种特殊的挥发物。这种真菌，它生活在植物细 胞之间，以纤维素为底物，能排出一种强烈的气体，后被证实是一种气体抗生素，能杀死其 他真菌。概括起来，具备以下优良性状，生防潜力巨大：①具有广泛的环境适应性，可利用各 种简单或复杂的碳源和氮源，甚至还有转化和降解一些有害或持久存在的污染物的能力； ②产生多样的拮抗作用（主要包括竞争作用、重寄生作用、产生抗生物质和溶菌酶类）；③ 具有广谱的寄生性。其生长周期内可以产生3种繁殖体，即菌丝体、厚垣孢子和分生孢子。 目前生产上常用的粘帚霉菌剂多为活分生孢子和菌丝混合制剂。因为生物农药制剂要求具 有一定的货架期，而影响菌剂保质期的主要因素是菌体类型。菌丝在自然条件下容易失水 导致死亡，而其分生孢子虽然产孢量大，但存活期也较短；显然，分生孢子和菌丝这两种菌 体类型都难以满足粘帚霉作为生物农药制剂的要求。厚垣孢子作为抵抗不良环境而休眠的 生存结构，具有更容易大规模生产、存活时间长、容易贮藏、施用和商品化及货架寿命长等 优点，能满足作为生物农药的要求，增殖比分生孢子更好，并且萌发率也更高。因此，本研究 采用粘帚霉厚垣孢子进行复配对商品化生产具有重要的实践意义。
[0005] 葡萄霜霉病是一种由卵菌纲单轴霉属霜霉菌引起的一种世界性卵菌病害。葡萄霜 霉病在大多数葡萄种植品种上均有发生并影响葡萄生产和产量。由于该病害流行特点，在 雨水较多的年份产量损失可高达1〇〇%。葡萄霜霉病在中国的绝大多数地区均有不同程度 的发生。据调查，2010年中国葡萄霜霉病发病率在一些地区高达70%。目前葡萄霜霉病防 治主要以化学药剂防治为主。常用药剂有甲霜灵、霜脲氰、嘧菌酯、氟吡菌胺等，病菌对这些 药剂已经存在抗药性或者抗性风险较高。
[0006] 因此，目前亟需稳定性好、药效明显且持效期长、并能够延缓病原物抗药性产生和 发展的时间，以及更为环保的杀菌组合物。
【发明内容】
[0007] 为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种杀菌组合物及其应 用。
[0008] 为了实现本发明目的，本发明首先提供一种杀菌组合物，所述杀菌组合物含有荧 光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子的质量 比为 1000:1 ~1:1000。
[0009] 作为优选，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子的质量比为100:1~ 1:100。
[0010] 更为优选，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子的质量比为30:1~1:30。
[0011] 最为优选，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子的质量比为10:1~1:10。
[0012] 进一步地，所述荧光假单胞杆菌中活孢子数为0. 1亿/克~10000亿/克，优选为 1亿/克~5000亿/克，最优选为2000亿/克。
[0013] 进一步地，所述粉红粘帚霉厚垣孢子中活孢子数为0. 1亿/克~10亿/克，优选 为0.5亿/克~5亿/克，最优选为1亿/克。
[0014] 本发明还提供了一种含有前述杀菌组合物的杀菌制剂。
[0015] 作为优选，所述制剂为可湿性粉剂或水乳剂。
[0016] 进一步地，所述制剂为向前述杀菌组合物中加入助剂并调节pH值到5~7后，配 成可湿性粉剂和水乳剂。其中，所述粉红粘帚霉厚垣孢子和荧光假单胞杆菌均采用原粉。助 齐阿以选用湿润剂、分散剂、填料、粘结剂、崩解剂等中的一种或几种。
[0017] 本发明还进一步提供了前述杀菌组合物和前述杀菌制剂在防治单轴霉引起的植 物病害中的应用。
[0018] 本发明的有益效果在于：
[0019] 本发明提供的杀菌组合物通过将荧光假单胞杆菌与粉红粘帚霉厚垣孢子的组合， 发现二者在防治单轴霉引起的霜霉病害中显示出明显的协同作用，且降低了现有植物病原 菌对化学药剂潜在抗药性风险；荧光假单胞杆菌与粉红粘帚霉厚垣孢子组合具有明显的协 同作用，同时又减少了药剂用药量，更环保，从而使该组合物可以广泛应用于防治由单轴霉 引起的霜霉病害。
【具体实施方式】
[0020] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0021] 本发明使用的助剂包括分散剂、乳化剂、崩解剂、抗冻剂、增稠剂、润湿剂等，其作 用在于使杀菌组合物在制剂中稳定并发挥药效，其均为农药制剂中常用或允许使用的已知 物质。
[0022] 实施例1杀菌组合物及其对葡萄霜霉病的抑制作用
[0023] 荧光假单胞杆菌（所采用的荧光假单胞杆菌中活孢子数为2000亿/克）和粉红 粘帚霉厚垣孢子（所采用的粉红粘帚霉厚垣孢子中活孢子数为1亿/克）复配对葡萄霜霉 病菌的室内毒力测定及配比筛选。
[0024] 试验采用葡萄霜霉病菌（Plasmopara viticola)为测试对象。试验方法参考《中 华人民共和国农业行业标准NY/T1156. 3-2006》。
[0025] 首先按照两药剂各组份质量比设置其系列配比10:1、5:1、1:1、1 :5、1:10,稀释 3000倍。试验靶标菌采自保定市满城县。采集刚形成淡黄色病斑的初期病叶，带回实验室 用自来水冲洗，叶背向上置于有保湿滤纸的培养皿内，18°C保湿黑暗培养24h促使新鲜孢 子囊产生。用毛笔刷洗孢子囊，并制成浓度约为2 X107个/mL孢子囊悬浮液。
[0026] 葡萄供试品种"巨峰"，取新梢顶端第1~3展开叶为供试叶片。以叶盘漂浮法进 行测定。
[0027] 分别在直径9cm的无菌培养皿中加不同浓度药液20mL，对照加等量蒸馏水。用打 孔器将葡萄叶片打成直径1. 5cm的叶盘，每皿15片叶盘漂浮于不同浓度药液中，叶背向上， 每处理重复3次。药剂处理24h后，每个叶盘用移液枪接种20 yL孢子囊悬浮液。接种后 置18±1°C，12h黑暗/光照条件下培养7d。7d后调查病情指数。
[0028] 葡萄霜霉病病情指数分级标准：
[0029] 0级：叶片无病斑
[0030] 1级：病斑面积占整个叶片面积的5%以下；
[0031] 3级：病斑面积占整个叶片面积的6-10% ;
[0032] 5级：病斑面积占整个叶片面积的11-25% ;
[0033] 7级：病斑面积占整个叶片面积的26-50% ;
[0034] 9级：病斑面积占整个叶片面积的50%以上。
[0035] 利用DPSv6. 55软件进行统计并对抑制率做邓肯Duncan分级显著差异性（p0. 05) 分析。具体测定结果见表1。
[0036] 表1荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子组合对葡萄霜霉病的抑制作用
[0037]
【主权项】
1. 一种杀菌组合物，其特征在于，所述杀菌组合物含有荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉 厚垣孢子，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子的质量比为1000:1~1:1000。
2. 根据权利要求1所述的杀菌组合物，其特征在于，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚 霉厚垣孢子的质量比为100:1~1:100。
3. 根据权利要求2所述的杀菌组合物，其特征在于，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚 霉厚垣孢子的质量比为30:1~1:30。
4. 根据权利要求3所述的杀菌组合物，其特征在于，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚 霉厚垣孢子的质量比为10:1~1:10。
5. 根据权利要求1-4任一项所述的杀菌组合物，其特征在于，所述荧光假单胞杆菌中 活孢子数为〇. 1亿/克~10000亿/克，优选为1亿/克~5000亿/克，最优选为2000亿 /克。
6. 根据权利要求1-4任一项所述的杀菌组合物，其特征在于，所述粉红粘帚霉厚垣孢 子中活孢子数为〇. 1亿/克~10亿/克，优选为〇. 5亿/克~5亿/克，最优选为1亿/ 克。
7. -种杀菌制剂，其特征在于，含有权利要求1-6任一项所述的杀菌组合物。
8. 根据权利要求7所述的杀菌制剂，其特征在于，所述制剂为可湿性粉剂或水乳剂。
9. 根据权利要求7或8所述的杀菌制剂，其特征在于，所述制剂为向权利要求1-6任一 项所述的杀菌组合物中加入助剂，并调节PH值为5~7,即得。
10. 权利要求1-6任一项所述的杀菌组合物或权利要求7-9任一项所述的杀菌制剂在 防治单轴霉引起的植物病害中的应用。
【专利摘要】本发明提供了一种杀菌组合物，所述杀菌组合物含有荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子，所述荧光假单胞杆菌和粉红粘帚霉厚垣孢子的质量比为1000:1～1:1000。本发明提供的杀菌组合物通过将荧光假单胞杆菌与粉红粘帚霉厚垣孢子的组合，在防治单轴霉引起的霜霉病害中显示出明显的协同作用，且降低了现有植物病原菌对化学药剂潜在抗药性风险；荧光假单胞杆菌与粉红粘帚霉厚垣孢子组合具有明显的协同作用，同时又减少了药剂用药量，更环保，从而使该组合物可以广泛应用于防治由单轴霉引起的霜霉病害。
【IPC分类】A01P3-00, A01N63-00, A01N63-04
【公开号】CN104663731
【申请号】CN201510064450
【发明人】冉隆贤, 申红妙, 李正楠, 李会平, 郭金堂
【申请人】河北农业大学
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2015年2月9日