实现胚胎装入冷冻载体的系统、冷冻载体及冷冻保存方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种生物技术领域，更确切的说涉及一种实现胚胎装入冷冻载体的系统、冷冻载体及冷冻保存方法。
【背景技术】
[0002]冷冻技术在人类辅助生殖技术中已经成为不可或缺的环节，随着冷冻技术的不断发展，慢速冷冻已经逐渐被玻璃化冷冻所取代。玻璃化冷冻技术通过超高的降温速度(>2000°C /分钟)使包裹在高浓度冷冻保护剂中的卵子/胚胎迅速形成玻璃态，避免细胞内冰晶产生损伤细胞，从而大幅度提高卵子/胚胎存活率、复苏率及发育潜能。
[0003]一般的，通过二个方面可以实现高速降温过程:一是通过降温介质的温度(通过开放载体迅速投入液氮实现)；二是控制包裹卵子/胚胎周围冷冻保护剂体积越小越好。
[0004]但对于第二点，实际工作中，通过实验人员的操作将卵子/胚胎连同冷冻保护剂一起转移至玻璃化载体上，包裹卵子/胚胎周围冷冻保护剂体积完全是由操作人员的熟练程度决定而无客观标准。
【发明内容】
[0005]本发明解决的技术问题是提供一种实现胚胎装入冷冻载体的系统、冷冻载体及冷冻保存方法，以在胚胎装入玻璃化冷冻载体时减少包裹卵子/胚胎周围冷冻保护剂体积。
[0006]为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案:
[0007]—种实现胚胎装入冷冻载体的系统，其包括:培养皿和卵子或胚胎玻璃化冷冻载体，其中该卵子或胚胎玻璃化冷冻载体包括:
[0008]载体本体，与所述载体本体一体相连、拖拉所述载体本体的拖杆，其中所述载体本体为网格承载体，所述网格承载体在纵截面上具有弧度；
[0009]所述卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的网格承载体的弧度最底面贴合培养皿底部，借助卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的拖杆，该卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的网格承载体随拖杆在培养皿底部移动使网格承载体中承载的卵子或胚胎周围的冷冻液沿拖动方向转移到培养皿底部。
[0010]进一步的，所述弧度为半圆弧。
[0011]进一步的，网格承载体的网格孔径为80-100um。
[0012]另外，本发明还公开一种卵子或胚胎玻璃化冷冻载体，其包括:
[0013]载体本体，与所述载体本体一体相连、拖拉所述载体本体的拖杆，其中所述载体本体为网格承载体，所述网格承载体在纵截面上具有弧度。
[0014]进一步的，所述弧度为半圆弧。
[0015]进一步的，网格承载体的网格孔径为80_100um。
[0016]另外，本发明还公开一种卵子或胚胎玻璃化冷冻保存方法，包括:卵子或胚胎平衡操作步骤、玻璃化冷冻液清洗步骤、胚胎装入载体步骤，其中，所述胚胎装入载体步骤包括有:
[0017]步骤11:将卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的网格承载体置于15%乙二醇+15% 二甲基亚砜的玻璃化冷冻液中进行浸润；
[0018]步骤12:将完全侵润的卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的网格承载体放置在培养皿内；
[0019]步骤13:将玻璃化冷冻操作步骤中的清洗后的胚胎吸入玻璃吸管，再转移至卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的网格承载体上，并将玻璃吸管内所有剩余液体全部吹打到网格承载体表面；
[0020]步骤14:拖动卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的拖杆，将该卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的网格承载体在培养皿底部移动，使网格承载体上胚胎周围的冷冻液沿拖动方向转移到培养皿底部；
[0021]步骤15:拖动完成后，将卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的网格承载体置于液氮中，完成冷冻操作。
[0022]进一步的，步骤12中将卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的网格承载体放置在培养皿内是以网格承载体的弧度最底面贴合培养皿底部。
[0023]进一步的，卵子或胚胎平衡操作步骤具体为:
[0024]将胚胎置于7.5%乙二醇+7.5% 二甲基亚砜的培养液中放置10分钟左右；期间胚胎先经历皱缩的脱水；再经历从皱缩状态恢复到原大小的水分子被冷冻保护剂置换的过程。
[0025]进一步的，玻璃化冷冻液清洗步骤具体为:将胚胎置于15%乙二醇+15% 二甲基亚砜的玻璃化冷冻液中，清洗5-10遍直至卵子或胚胎平衡操作步骤中包裹在胚胎周围的低浓度平衡液清洗干净。
[0026]与现有技术相比，本发明具有如下有益效果:
[0027]本发明中卵子或胚胎玻璃化冷冻载体包括:载体本体，与所述载体本体一体相连、拖拉所述载体本体的拖杆，其中所述载体本体为网格承载体，所述网格承载体在纵截面上具有弧度；所述卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的网格承载体的弧度最底面贴合培养皿底部，借助卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的拖杆，该卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的网格承载体随拖杆在培养皿底部移动使网格承载体中承载的卵子或胚胎周围的冷冻液沿拖动方向转移到培养皿底部。由于卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的所述网格承载体在纵截面上具有弧度，因此，在拖动过程中，流体的静摩擦力使网格承载体上最底部的冷冻液粘稠液体转移到干净无液体的培养皿底部并随着拖动产生真空吸力；而在网格承载体和培养皿底部形成液体桥梁后，通过虹吸原理可将势能高、压强大的网格承载体上的液体继续压入培养皿底部；而基于液体表面张力将使所有的液体都有集中的趋势，产生所有液体都有均匀分布的趋势而使网格承载体上胚胎周围的冷冻液体都往最底部的部分集中，进而转移到培养皿底部，可以在胚胎装入玻璃化冷冻载体时减少包裹卵子/胚胎周围冷冻保护剂体积。
【附图说明】
[0028]图1为本发明实现胚胎装入冷冻载体的系统中卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的一种具体实施例结构意图；
[0029]图2是本发明中载体本体I为网格承载体的示意图；
[0030]图3是本发明根据虹吸原理进行冷冻液转移的原理示意图；
[0031]图4是本发明实现胚胎装入冷冻载体的系统的初始状态示意图；
[0032]图5是本发明实现胚胎装入冷冻载体的系统实现减少包裹卵子/胚胎周围冷冻保护剂的原理示意图。
【具体实施方式】
[0033]本发明基于玻璃化冷冻方法，具体的，本发明实现胚胎装入冷冻载体的系统，其包括:培养皿和卵子或胚胎玻璃化冷冻载体，与现有技术不同的，本发明中该卵子或胚胎玻璃化冷冻载体包括:
[0034]载体本体I，与所述载体本体I 一体相连、拖拉所述载体本体I的拖杆2，其中所述载体本体I为网格承载体(参考图2)，对于不同的胚胎直径，网格承载体的网格孔径大小可以变化，例如，本实施例中，网格承载体的网格孔径为80-100um，随着胚胎的成长，网格孔径还可以设置更大，这里不再赘述。
[0035]另外，本实施例中所述网格承载体在纵截面上具有弧度，设置所述弧度主要是利用虹吸原理和液体表面张力的原因在进行胚胎转移时，可有效减少包裹在胚胎周围的冷冻液，具体实现时，可以是各种形式的弧度，例如，本实施例中弧度为半圆弧，当然，也可以根据实际状况调整弧度，这里不再赘述。
[0036]另外，在本实施例中，所述卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的网格承载体的弧度最底面最好贴合培养皿底部，借助卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的拖杆2，该卵子或胚胎玻璃化冷冻载体的网格承载体随拖杆2在培养皿底部移动使网格承载体中承载的卵子或胚胎周围的冷冻液沿拖动方向转移到培养皿底部。
[0037]下面详细说明本发明的原理。
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