稻纵卷叶螟采集与生物测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于农业科学研宄领域，具体涉及一种从田间采集稻纵卷叶螟以及杀虫剂 对稻纵卷叶螟毒力测定的方法。
【背景技术】
[0002] 稻纵卷叶螟是亚洲水稻种植区的重要迀飞性害虫，常年对水稻生产造成严重的经 济危害与损失。稻纵卷叶螟对水稻的危害通过在叶片上卷叶取食叶片表皮，影响光合作用， 造成水稻减产，发生严重时整个叶片表皮被吃光，稻田形成一片白色，造成水稻绝收。生产 上对于稻纵卷叶螟的防治以使用化学杀虫剂为主，这就需要科学研宄机构以及农药企业研 发出对稻纵卷叶螟高效的杀虫剂品种及混剂。
[0003] 由于目前稻纵卷叶螟的室内大规模饲养仍有困难，现有饲养技术难以满足杀虫剂 筛选对大量标准试虫的要求，所以国内外对稻纵卷叶螟防治药剂筛选的研宄报道非常少， 对稻纵卷叶螟抗药性的研宄与室内连续继代饲养的报道更少见。虽有文献报道（廖怀建 等，2012)可采用玉米小苗饲养稻纵卷叶螟，但其饲养规模仍难以满足杀虫剂生物测定对大 量标准试虫的需求。过去我们曾采用水稻苗将稻纵卷叶螟幼虫饲养至3龄，再测定杀虫剂 对稻纵卷叶螟3龄幼虫的毒力，从29种杀虫剂中筛选出推荐用于防治稻纵卷叶螟的药剂品 种（高忠文等，2008)，该方法需要利用水稻叶片来饲养稻纵卷叶螟幼虫，事先需准备大量 水稻苗，这就需要较大的水稻育苗空间；稻纵卷叶螟成虫卵产在稻苗上孵化后以稻叶为食， 由于稻叶较小，幼虫长至3龄需要转移多片稻叶取食，对稻叶的消耗较大；另外，幼虫发育 至3龄后需要从卷叶中将单头幼虫取去，选取适龄幼虫进行生物测定，这需要耗费大量人 力，特别费时费工，造成稻纵卷叶螟药剂生物测定的效率特别低。也有人采用从田间采集 的稻纵卷叶螟幼虫直接进行生物测定，但从田间采集到的幼虫难以保证试虫的生理状态一 致，并且田间幼虫可能被天敌寄生或病原菌感染影响对杀虫剂的敏感性，因此，采集田间幼 虫直接进行生物测定的方法并不可取。
【发明内容】
[0004] 针对目前稻纵卷叶螟室内饲养困难、杀虫剂生物测定对标准试虫的技术要求较 高、试虫数量要求较大的难题，以及防治药剂研发对简便、易行的稻纵卷叶螟生物测定技术 的迫切需求，本发明提供了一种简便地从田间采集稻纵卷叶螟成虫，并将野外采集成虫快 速投递到生物测定实验室的方法，以及利用初孵幼虫进行杀虫剂筛选的生物测定技术。
[0005] 本发明为实现上述目的所采取的技术方案是，利用捕虫网从稻田网捕稻纵卷叶螟 成虫，将捕到的成虫转移到透明塑料杯中，塑料杯用保鲜膜封口，杯内用棉球为成虫提供补 充营养，成虫在塑料杯内取食补充营养后，产卵于塑料杯内壁上，塑料杯带回实验室进行孵 育，也可将塑料杯装入透气纸箱中通过快递寄送到生物测定实验室，塑料杯中孵化出的初 孵幼虫直接用于生物测定，测定方法采用稻苗浸渍法。
[0006] 本发明中所述的稻纵卷叶螟成虫采集方法是，早6~8时与下午5~7时用捕虫 网从稻田网捕稻纵卷叶螟成虫，网中捕到的成虫用透明管（直径2厘米，长15~20厘米， 一端用尼龙网封口，一端开口）转移到透明塑料杯（350~500毫升）中，塑料杯用保鲜膜 封口，成虫直接产卵于塑料杯内壁上。
[0007]本发明中所述的稻纵卷叶螟补充营养是5%~20%糖水或蜂蜜水，补充营养提供 方法是在塑料杯内底部贴一块1平方厘米左右的双面胶，将一小团棉球用双面胶固定在塑 料杯底，将补充营养液吸附到棉球中。固定于杯底的棉球不会在塑料杯内上下移动，可减少 湿润棉球对杯内成虫的不良影响。作为优选，稻纵卷叶螟补充营养使用浓度为10%糖水或 蜂蜜水。
[0008]本发明中所述的生物测定方法是稻苗浸渍法，具体的操作步骤如下： 1) 生物测定稻苗的准备：一次性塑料杯（350毫升）装满土后培育水稻苗，每杯15~ 35株稻苗，2~4周后（大约20~25厘米高）可用于生物测定。 2) 杀虫剂母液配制：杀虫剂原药母液的配制方法是根据该药剂的溶解度与以前报道 的LC5(I值估算所要配制的母液浓度。准确称取所需原药量放入容量瓶中，加入溶剂（丙酮、 二甲基甲酰胺或二甲亚砜）定容至刻度线。配制好的母液用封口膜封好瓶口，标签注明浓 度、药名、配制时间和药剂厂家后置4°C保存备用。若采用制剂进行生物测定，则不必配制母 液，而是直接用制剂配制生物测定的工作液。 3) 生物测定工作液配制：用移液管吸取所需的母液量或液态制剂量或准确称取固体 制剂的量，用含1%。TritonX-100的蒸馏水配制生物测定最高浓度的药液800毫升，取其中 的400毫升用含1%。TritonX-100的蒸馏水进行倍比稀释得到所需要的系列浓度。 4) 稻苗浸渍方法：将一次性杯中已培育2~4周的稻苗（20~25厘米高）轻轻倒置 杯底向上，稻苗向下使稻苗完全浸入工作药液中10~60秒，稻苗取出后自然干燥。 5) 试虫处理方法：在培养皿（07~9厘米）中放入3张大小适当的滤纸，加水将滤纸 充分湿润，将20~40根稻苗的中上部茎叶部分剪成5厘米长片段，放入培养皿中的滤纸 上，将稻纵卷叶螟初孵幼虫用毛笔轻轻地挑入到培养皿中的稻叶上，用适当大小的纯棉布 经水湿润后覆盖培养皿，再用培养皿盖盖紧。试虫置25°C，相对湿度75%，光照16 : 8下 的培养箱中培养。作为优选，试虫处理在每日上午的8~10时进行。 6) 结果观察：药剂处理3~5日后观察稻纵卷叶螟幼虫存活情况，打开培养皿盖，撕开 已卷的稻叶取出幼虫，用细毛笔将幼虫轻轻翻转，腹部向上，以幼虫不能自主活动为死亡标 准。上述测定每个杀虫剂设5~8个系列浓度，以含1%。TritonX-100的蒸馏水为对照，每 个处理重复3~6次。
[0009]本发明采用稻纵卷叶螟田间成虫所产的卵，经孵出后直接利用初孵幼虫进行生物 测定，为稻纵卷叶螟防治药剂的筛选提供了一种简便易行、结果重现性好的生物测定技术， 该方法具有以下突出优点： 1) 免去幼虫饲养环节，省时省力省空间：不需要为试虫饲养培育大量的水稻苗，节省 了育苗所需的空间；试虫不需要在室内进行饲养，极大地减轻了试虫准备所需的时间，也减 少了试虫饲养所需的人力。在稻纵卷叶螟田间发生期，完成20种药剂的生物测定从稻苗准 备到完成只需4周时间。 2) 测定结果重现性好：本发明中试虫采用初孵幼虫，试虫的生理状态非常一致，克服 了幼虫饲养中由于幼虫发育进度不同造成的试虫个体间生理差异，以及不同实验室饲养方 法不一致所产生的生理差异，试验结果重现性好，不同实验室之间测定结果也具可比性。 3) 成本低：本发明提供的稻纵卷叶螟成虫采集与补充营养提供方法，可远距离寄送稻 纵卷叶螟，在我国水稻种植区稻田采集的成虫当天通过快递寄送到国内的生物测定实验 室，本发明提供的方法成虫存活率高，产卵量大，3~5天收到后即进行生物测定，极大地降 低了试虫的采集成本。同时采用初孵幼虫进行测定，免去了试虫饲养的过程，能节省大量开 支。 4) 测定结果能准确反映杀虫剂的毒力：采用本发明方法测得的数据与采用3龄幼虫测 定的结果其趋势基本一致。
【具体实施方式】
[0010] 为了更好地理解本发明，下面结合实施例对本发明作进一步说明。但本发明要求 保护的范围并不局限于实施例表示的范围。
[0011] 实施例1 :稻纵卷叶螟成虫采集与补充营养提供方法 在稻纵卷叶螟发生期，每天早6~8时与下午5~7时用捕虫网从稻田网捕稻纵卷叶 螟成虫，捕到的成虫用透明管（直径2厘米，长15~20厘米，一端用尼龙网封口）转移到 透明塑料杯（350~500毫升