ring Harbor, N. Y.； 或 Winnacker^Gene und Klone^[Genes and Clones], VCH Weinheim 2nd Edition 1996 或 Christou，"Trends in Plant Science"l (1996)423431〇
[0234] 为了进行此类基因重组操作，可将通过DNA序列重组而产生突变或序列改变的核 酸分子引入质粒。例如，可借助上述标准方法进行碱基置换、然后移除，或添加天然或合成 序列。为了将DNA片段彼此连接，可向片段加入衔接头（adaptors)或连接体（linkers)。
[0235] 例如，基因产物活性降低的植物细胞的产生可通过如下方法完成：表达至少一种 相应的反义RNA、用于实现共抑制效应的正义RNA (sense RNA)，或者表达至少一种特异性裂 解上述基因产物的转录物而适当地构建的核酶。
[0236] 为此，一方面可使用含有基因产物的所有编码序列（包括可能存在的任何侧翼序 列）的DNA分子，以及使用仅含有部分编码序列的DNA分子，这些部分必须足够长，以使在 细胞中产生反义作用。还可使用与基因产物的编码序列具有高度同源性但不完全相同的 DNA序列。
[0237] 当在植物中表达核酸分子时，合成的蛋白质可定位于植物细胞的任意所需的区 室（compartment)中。然而，为了实现在特定区室中的定位，可例如将编码区域与确保 在特定区室中定位的DNA序列相连。此类序列是本领域技术人员已知的（参见，例如 Braun et al. , EMBO J. 11 (1992), 3219 3227 ；ffolter et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85(1988),846 850 ;Sonnewald et al·，Plant J. I(1991) ,95106)〇
[0238] 转基因植物细胞可通过已知技术再生以得到完整植物。原则上，转基因植物可为 任意所需植物种的植物，即，不仅可为单子叶植物，也可为双子叶植物。
[0239] 因此，可获得转基因植物，其特性通过过表达、阻碍或抑制同源（=天然）基因或 基因序列、或者表达异源（=外源）基因或基因序列而改变。
[0240] 因此，本发明还涉及一种防治耐受性大豆作物中不想要的植物的方法，所述方法 包括向有害植物、有害植物的部位或栽培区域施用一种或多种（A)类除草剂和一种或多种 (B)类除草剂。
[0241] 本发明还涉及化合物（Α) + (Β)的新结合物，以及涉及包含所述新结合物的除草剂 组合物。
[0242] 本发明的活性物质结合物不仅可以两种组分的混合制剂（如果合适，还具有其他 活性化合物、添加剂和/或常规制剂助剂）存在，随后将其用水稀释后以常规方式施用，而 且还可通过用水共同稀释单独配制或部分单独配制的组分而作为所谓的桶混物施用。
[0243] 根据主要的生物学和/或化学物理参数，化合物（A)和（B)或其结合物可以多种 方式配制。以下为可能的制剂的实例：可湿性粉剂（WP)、可乳化浓缩剂（EC)、水溶液（SL)、 乳剂（EW)(例如水包油型乳剂和油包水型乳剂）、可喷雾溶液剂或乳剂、油基或水基分散 剂、悬乳剂、粉剂（DP)、拌种物质、土施颗粒剂或撒播颗粒剂、水分散性颗粒剂（WG)、ULV制 剂、微胶囊剂或蜡剂。
[0244] 原则上，所述各种剂型是已知的，并记载于例如：Winnacker_Kuchler〃Chemische Technologie"[Chemical engineering], Volume 7,C.Hauser Verlag Munich, 4th Edition, 1986 ；van Valkenburg，"Pesticide Formulations"，Marcel Dekker N. Y. , 1973 ； K. Martens，"Spray Drying Handbook"，3rd Ed 1979, G. Goodwin LtdLondon0
[0245] 所需的制剂助剂，例如惰性物质、表面活性剂、溶剂和其他添加剂也是已 知的，并记载于例如：Watkins，''Handbook of Insecticide Dust Diluents and Carriers"，2nd Ed.,Darland Books,Caldwell N. J. ；H.v.Olphenj ^Introduction to Clay Colloid Chemistry" ;2nd Ed. , J. Wiley&Sons, N. Y. Marsdenj ^Solvents Guide"，2nd Ed，Interscience，N. Y. 1950 ;McCutcheon's，''Detergents and Emulsifiers Annual^, MC Publ. Corp. , Ridegewood N. J. ;Sisley and Wood，"Encyclopedia of Surface Active Agents"，Chem. Publ. Co. Inc.，N.Y. 1964 ;Schonfeldt，"Grenzflachenaktive Athylenoxidaddukte"[Surface-active ethylene oxide adducts],Wi ss. Verlagsgesellschaft，Stuttgart 1976, Winnacker-Kuchler，"Chemische Technologie"，Volume 7,C. Hauser Verlag Munich，4th Edition，1986〇
[0246] 基于这些制剂，还可例如以成品制剂或桶混物的形式制备与其它杀虫活性化合物 (例如其他除草剂、杀真菌剂或杀昆虫剂）以及与安全剂、肥料和/或生长调节剂的结合物。
[0247] 可湿性粉剂（可喷雾粉剂）为可均匀分散于水中的产品，且其除了含有活性物质 外，还含有离子型或非离子型表面活性剂（湿润剂、分散剂）（稀释剂或惰性物质除外），例 如聚乙氧基化烷基酚、聚乙氧基化脂肪醇或聚乙氧基化脂肪胺、链烷磺酸盐或烷基苯磺酸 盐、木素磺酸钠、2, 2'_二萘基甲烷-6, 6'_二磺酸钠、二丁基萘磺酸钠或油酰基甲基牛磺酸 钠。
[0248] 可乳化浓缩剂通过在加入一种或多种离子型或非离子型表面活性剂（乳化剂）的 情况下将活性物质溶于有机溶剂中而制备，所述溶剂为例如丁醇、环己酮、二甲基甲酰胺、 二甲苯或高沸点的芳族烃或烃。可用的乳化剂的实例为：烷基芳基磺酸钙盐，例如十二烷基 苯磺酸钙；或非离子型乳化剂，例如脂肪酸聚乙二醇酯、烷基芳基聚乙二醇醚、脂肪醇聚乙 二醇醚、环氧丙烷/环氧乙烷缩合物、烷基聚醚、脱水山梨糖醇酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇 脂肪酸酯或聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯。
[0249] 粉剂通过将活性物质与细分散的固体物质研磨而获得，所述固体物质为例如滑 石、天然粘土（如高岭土、膨润土和叶蜡石）或硅藻土。
[0250] 颗粒剂可以通过将活性物质喷洒在吸附性的颗粒状惰性物质上制备，或可通过借 助粘合剂（例如聚乙烯醇、聚丙烯酸钠或矿物油）将活性物质浓缩物施用于载体（例如砂、 高岭土或颗粒状惰性材料）表面而制备。合适的活性物质还可以制备肥料颗粒的常规方 式一一如果需要，与肥料混合一一制成颗粒。通常，水分散性颗粒剂通过例如喷雾干燥法、 流化床制粒法、盘式制粒法、在不使用固体惰性物质的情况下使用高速混合器混合并挤出 而制备。
[0251] 农业化学制剂通常包含0. 1至99重量％、特别是2至95重量％的A类和/或B 类的活性物质，根据制剂类型，如下含量为常规含量：可湿性粉剂中的活性物质含量为例如 约10至95重量％，加至100重量％的剩余部分由常规制剂组分组成。对于可乳化浓缩剂， 活性物质含量可为例如5至80重量％。
[0252] 在多数情况下，粉剂形式的制剂包含5至20重量％的活性物质，喷雾溶液剂包含 约0. 2至25重量％的活性物质。
[0253] 在颗粒剂如可分散颗粒剂的情况下，活性物质的含量部分取决于活性化合物以液 体形式存在还是以固体形式存在，以及取决于使用何种制粒助剂和填料。通常，在水可分散 型颗粒剂的情况下，活性物质的含量为10至90重量％。
[0254] 此外，如果合适，上述活性物质制剂可以包含常规粘合剂、润湿剂、分散剂、乳化 剂、防腐剂、防冻剂、溶剂、填料、着色剂、载体、消泡剂、蒸发抑制剂、pH调节剂或粘度调节 剂。
[0255] 例如，已知草铵膦铵盐（G1. 2)及其L-对映体的效果可通过表面活性剂、优选通 过选自烷基聚乙二醇醚硫酸盐的湿润剂增强，所述烷基聚乙二醇醚硫酸盐含有例如10-18 个碳原子并且以其碱金属盐或铵盐的形式使用，但也可以镁盐的形式使用，例如C 12/C14-脂 肪醇二甘醇醚硫酸钠（· RTM. Genapol LRO, Hoechst);参见 EP-A-0476555、EP-A-0048436、 EP-A-0336151 或 U.S. Pat No. 4, 400, 196 号和 Proc. EWRS Symp. "Factors Affecting Herbicidal Activity and Selectivity", 227-232(1988)〇
[0256] 此外，已知烷基聚乙二醇醚硫酸盐还适合作为一系列其它除草剂一一尤其是选自 咪唑啉酮类的除草剂--的渗透剂和增效剂；参见EP-A-0502014。
[0257] 使用时，制剂（以市售形式存在）任选地以常规方式稀释，例如在可湿性粉剂、可 乳化浓缩剂、分散剂和水分散颗粒剂中使用水稀释。粉剂、土壤颗粒剂、撒播颗粒剂和可喷 雾溶液剂形式的制剂通常在使用前不用其它惰性物质的情况下进一步稀释。
[0258] 活性物质可施用于植物、植物部位、植物种子或栽培区域（田间土壤），优选施用 于绿色植物和植物部位，并且如果合适，还额外地施用于田间土壤。
[0259] -个可能的用途是以桶混物形式联合施用活性化合物，单个活性物质的浓缩制剂 以最佳制剂形式共同在桶中与水混合，然后施用所得的喷雾混合物。
[0260] 本发明的活性物质（A)和（B)的结合物的联合除草制剂具有更易于施用的优点， 这是因为所述组分的量已经以彼此正确的比例存在。此外，制剂中的佐剂可彼此进行最佳 匹配，而不同制剂的桶混物可能导致不期望的佐剂结合物。
[0261] 常规制剂实施例
[0262] a)粉剂通过下列方式获得：将10重量份活性物质/活性物质混合物与90重量份 作为惰性物质的滑石混合，并且在锤式粉碎机中粉碎该混合物。
[0263] b)易分散于水中的可湿性粉剂通过下列方式获得：将25重量份活性物质/活性 物质混合物、64重量份作为惰性物质的含高岭土的石英、10重量份木素磺酸钾和1重量份 作为润湿剂和分散剂的油酰基甲基牛磺酸钠混合，并在销盘式磨机中研磨该混合物。
[0264] c)易分散于水中的分散浓缩剂通过下列方式获得：将20重量份本活性物质/活 性物质混合物与6重量份烷基酚聚乙二醇醚（RTETriton X207)、3重量份异十三烷醇聚乙 二醇醚（8E0)和71重量份石蜡矿物油（沸程例如约255-277C)混合，并将该混合物在球磨 机中研磨至细度低于5微米。
[0265] d)可乳化浓缩剂由以下物质获得：15重量份活性物质/活性物质混合物、75重量 份作为溶剂的环己酮和10重量份作为乳化剂的乙氧基化壬基酚。
[0266] e)水分散性颗粒剂通过以下方式获得：将75重量份活性物质/活性物质混合物、 10重量份木素磺酸妈、5重量份十二烷基硫酸钠、3重量份聚乙稀醇和7重量份高岭土混合， 在销盘式磨机中研磨该混合物，并在流化床中通过喷洒作为成粒液体的水而使粉末粒化。
[0267] f)水分散性颗粒剂还通过以下方式获得：将25重量份活性物质/活性物质混合 物、5重量份2, 2' -二萘基甲烷-6, 6' -二磺酸钠、2重量份油酰基甲基牛磺酸钠、1重量份 聚乙烯醇、17重量份碳酸钙和50重量份水在胶体研磨机中进行均化和预粉碎，然后在珠磨 机中研磨该混合物，并在喷雾塔中借助于单料喷嘴将所得悬浮液雾化并干燥。
[0268] 协同效应
[0269] 活性物质（A)和（B)之间的协同效应用如下实施例测试：
[0270] 将单子叶和双子叶杂草植物的种子或根茎部分置于塑料盆中的砂壤土中，并用土 覆盖。然后将配制为浓缩水溶液、可湿性粉剂或可乳化浓缩剂形式的组合物以水性溶液、悬 浮液或乳液的形式以100至8001水/ha(经换算）的施用率以各种剂量施用于覆盖土壤的 表面。处理之后，将盆置于温室中，并保持于杂草的良好生长条件下。试验植物出苗后，在 3-4周的试验期之后，通过与未处理的对照组比较，目测评估对植物的损害或出苗损害。
[0271] 通常，观察到本发明的结合物的效果超过单独施用除草剂的效果的形式上的加和 (=协同效应）。
[0272] 如果所观察到的效果数据已经超过单独施用的实验数据的形式上的和（=Ea)，那 么也超过了 Colby的预期值（=Ee)，该值被认为是协同作用的表征且使用下式计算（参见， S.R.Colby;in Weedsl5(1967)pp.20 to22)疋=六+8-(六8/100)，六、8表示活性物质六、8的 效力，对于a g a. s./ha或b g a. s./ha，以％计；E表不预期值，对于a+b g a. s./ha，以％ 计。
[0273] 在合适的低剂量下，观察到的试验数据表明，结合物的效果大于Colby的预期值。
[0274] 出苗后处理的方法
[0275] 将禾本科杂草和阔叶杂草的种子播种在装满砂壤土的盆（直径：8cm)中。对于除 草剂的出苗后处理，使杂草根据物种种植在最优条件下生长到最多至BBCHll (1-2叶期）至 14(3-4叶期）的生长阶段。使用如下杂草：
[0277] 大豆在上述相同条件下生长。测试中使用如下三个品种：
[0278] 1)W366-转基因大豆植物，包含编码荧光假单胞菌的W336突变HPH)蛋 白（美国专利6245968)的嵌合基因，所述嵌合基因融合至叶绿体定向的优化的 转运肽（US 专利 5510471)，且在 35S CaMV 启动子（Odell et al·，1985, Nature 313:810-812)的控制下融合至 TEV 的 5' 增强子序列（〇31'1'；[1^1:011311(1?代6(1，1990，工 Virol. 64:1590-1597)，作为CaMV35S基因的3'转录终止和聚腺苷酸化区域（Sanfagon et al.，1991，Genes&Development 5:141-149)，这种植物在本文中简称为"W336大豆植物"。
[0279] 2) MERLIN -常规
[0280] 3) PR0TINA-常规
[0281] 准备两组在施用时间下达到不同生长阶段的大豆：一组生长至BBCHll (1-2叶期） 阶段且另一组生长至BBCH13 (3-4叶期）阶段。两组大豆设定在相同时间下（与杂草一起） 处理，但分别对其进行评估。
[0282] 使用每公顷300L水的喷雾量在花盆上通过出苗后处理进行施用。除草剂按照下 表单独施用和以结合物施用。
[0283] 该试验在确保最佳生长条件的温室中进行。
[0284] 除草效果通过在施用后的14天和24天通过目测比较处理和未处理植物的等级而 进行评估（〇%=无效果至100%=完全死亡）。
[0285] 根据S. R. Colby, Weeds 15, pages 20to 22 (1967)，使用目测等级计算单独处理和 结合处理之间的相互作用。
[0288]
[0289]
[0290]
【主权项】
1. 除草剂结合物用于防治大豆作物中有害植物的用途，所述除草剂结合物包含： (A) 有效量的至少一种具有HPro抑制活性的活性物质，其选自： (A1)环磺酮 (A2)甲基磺草酮 (A3)磺草酮 (A4)异噁唑草酮 (A5)苯啦挫草酮 (A6)双环吡喃酮 (A7)式⑴的N，0-螯合剂其中 X选自Me、Et、0Me、Cl; A为C-Y，其中 Y选自SMe、S02Me、S02Et、SOMe、SOEt、吡唑-1-基、4, 5-二氢-1，2-噁唑-3-基、CH20Me、CH20CH2CF3、CH20C2H40Me、OMe、OEt、OPr、Oi-Bu、0CH2c-Pr、0C2H40Me、0 (CH2) 30Me; Z选自CF3、CHF2、S02Me、S02Et; W为氢； QN为其中B为氮； R选自Me和Et， (A8)pyrosulfutole(A9)特呋三酮 和 (B) 有效量的除草剂嗪草酮（Bl) 且其中，大豆栽培种对包含于所述除草剂结合物中的活性物质（A)和（B)具有耐受性。2. 除草剂结合物用于防治大豆作物中有害植物的用途，所述除草剂结合物包含： (a)有效量的至少一种具有HPro抑制活性的活性物质，其选自： (A1)环磺酮 (A2)甲基磺草酮 (A3)磺草酮 (A4)异噁唑草酮 (A5)苯啦挫草酮 (A6)双环吡喃酮或 (A7)如上所定义的式（I)的N，0-螯合物 (A8)pyrosulfutole (A9)特呋三酮 和 (B)有效量的除草剂莠去津（B2) 且其中，大豆栽培种对包含于所述除草剂结合物中的活性物质（A)和（B)具有耐受性。3. 根据权利要求1或2所述的用途，其中结合物由有效量的恰好一种具有HPH)抑制活 性的活性物质和有效量的恰好一种活性物质（B)组成。4. 根据权利要求1至3所述的用途，其中大豆栽培种包含赋予HPH)抑制剂耐受性的异 源基因。5. 根据权利要求1至4所述的用途，其中大豆栽培种的HPH)耐受性由hppdPFW3336 基因赋予。6. 根据权利要求1至4所述的用途，其中大豆栽培种的HPH)耐受性由avhppd-03基因 赋予。7. 根据权利要求1至6中任一项所述的用途，其中结合物含有协同有效量的（A)和8. 根据权利要求1至7中任一项所述的用途，其中（A)和⑶的重量比为1:50至50:1。9. 根据权利要求1至8中任一项所述的用途，其中结合物还包含活性物质（G)，所述活 性物质（G)优选地选自： (G1)如下化合物及其盐和酯其中Z为式-0H的基团（草铵膦）或 式-NHCH(CH3)CONHCH(CH3)C00H的肽基团（双丙氨膦）。 和 (G2)包括其盐和酯。10. 根据权利要求9所述的用途，其中（G1)为草铵膦铵。11. 根据权利要求9所述的用途，其中（G2)为草甘膦异丙基铵。12. 根据权利要求9至11所述的用途，其中（A+B)和（G)的重量比为1:50至50:1。13. 根据权利要求1至12中任一项所述的用途，其中大豆栽培种或其部位或种子包括 SYHT0H2 株系。14. 根据权利要求1至12中任一项所述的用途，其中大豆栽培种或其部位或种子包括 EE-GE3 株系。15. 用于防治大豆栽培种中有害植物的方法，所述方法包括在播种前、出苗前、出苗后 或出苗前和出苗后向植物、植物部位、植物种子或栽培区域联合或单独施用有效量的（B) 嗪草酮或莠去津与至少一种具有HPH)抑制活性的活性物质以及任选的（G)，所述至少一种 具有HPH)抑制活性的活性物质选自： (A1)环磺酮 (A2)甲基磺草酮 (A3)磺草酮 (A4)异噁唑草酮 (A5)苯啦挫草酮 (A6)双环吡喃酮或 (A7)如上定义的式（I)的N，0-螯合物剂 (A8)pyrosulfutole (A9)特呋三酮。16. 用于减少用（B)嗪草酮或莠去津处理时的对HPH)抑制剂耐受性大豆栽培种的损害 的方法，所述方法包括在播种前、出苗前、出苗后或出苗前和出苗后向植物、植物部位、植物 种子或栽培区域联合或单独施用（B)与有效量的至少一种具有HPH)抑制活性的活性物质 以及任选的（G)，所述至少一种具有HPH)抑制活性的活性物质选自： (A1)环磺酮 (A2)甲基磺草酮 (A3)磺草酮 (A4)异噁唑草酮 (A5)苯啦挫草酮 (A6)双环吡喃酮或 (A7)如上定义的式（I)的N，0-螯合物 (A8)pyrosulfutole (A9)特呋三酮。17.根据权利要求15或16所述的方法，其中大豆栽培种对施用于其的活性物质（A)和 (B)具有耐受性。
【专利摘要】本发明涉及作物保护产品，所述作物保护产品可用于抵抗耐受性大豆作物中有害植物的，且包含作为除草活性物质的除草剂结合物，所述除草剂结合物选自：(A)HPPD抑制剂和(B)嗪草酮或莠去津，所述(A)HPPD抑制剂选自环磺酮、甲基磺草酮、磺草酮、异噁唑草酮、苯吡唑草酮、双环吡喃酮、式(I)的N,O-螯合物、pyrosulfutole、特呋三酮。
【IPC分类】A01N43/56, A01N43/40, A01N43/707, A01N43/713, A01N43/80, A01N41/10, A01P13/02, A01N43/70, A01N43/08
【公开号】CN104994737
【申请号】CN201380068817
【发明人】E·加茨魏勒, K·特拉博尔德, R·D·巴格威尔, C·沃尔德拉夫, F·波特里
【申请人】拜尔农作物科学股份公司
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2013年11月4日
【公告号】CA2890286A1, EP2916657A1, US20150272121, WO2014072250A1