马鲛鱼精液的超低温冷冻保存方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及鱼类精液的保存，具体涉及马鲛鱼精液的超低温冷冻保存方法。
【背景技术】
[0002]马鲛鱼属鲈形目，鲅科，是一种重要的海洋经济鱼类。虽然马鲛鱼人工繁殖和养殖难度较大，但目前已获得初步成果。马鲛鱼批量人工繁殖中，对马鲛鱼精液的保存也是关健点。鱼类精液的保存方法多种多样，如4°C常温保存，低温保存，超低温冷冻保存，不同的方法保存液也有所不同，超低温冷冻保存的保存液称为冷冻保存液，简称冻存液，如公开号为CN104604845就公开了哲罗鲑精液的冷冻保存液及保存方法，其冻存液的组成为氯化钠、氯化钾、氯化钙、碳酸氢钠、磷酸二氢钾、葡萄糖和水，其保存方法为冻存液中加入适量丙三醇，4°C下平衡，然后加入精液，4°C下平衡，再用二次加入适量丙三醇平衡，然后在液氮中速冻冻存。该冻存方法较复杂，要多次用丙三醇平衡，但冻存液仍为液态，在液氮中速冻时有可能冻坏精子。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题是提供一种方法简单，速冻时精子不会冻坏的马鲛鱼精液的超低温冷冻保存方法。
[0004]本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为:马鲛鱼精液的超低温冷冻保存方法，其步骤如下:
a、按体积比1:3?5的比例，将精液和冻存液放入冷冻管，封盖，然后冷冻管浸入布满干冰和异丙醇的盒子降温，降温至冷冻管内冻存液冻结，该盒子内先堆满干冰，再在干冰间隙中注满异丙醇；
b、取出冷冻管放入液氮中保存。
[0005]与现有技术相比，本发明的优点在于马鲛鱼精液的超低温冷冻保存方法，精液和冻存液先在异丙醇和干冰作用下降温，其中干冰为冷冻介质，异丙醇为降温的梯度介质，可以在不损伤精子情况下，使冷冻管内冻存液逐渐冻结，再在液氮中保存，这样在液氮中速冻前，精子已冻结，速冻就不会损伤精子，因此本发明是一种方法简单，速冻时精子不会冻坏的马鲛鱼精液的超低温冷冻保存方法。
【具体实施方式】
[0006]以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
[0007]实施例1
吸取新鲜精液1ml，放入冷冻管，再加入4ml冻存液混合，封盖，然后冷冻管浸入布满干冰和异丙醇的盒子降温，盒子内先堆满干冰，再在干冰间隙中注满异丙醇，降温几小时后，冷冻管内冻存液冻结，取出冷冻管放入液氮中保存。
[0008]实施例2与实施例1基本相同，所不同的只是精液为5ml，冻存液为15ml。
[0009]实施例3
与实施例1基本相同，所不同的只是精液为3ml，冻存液为15ml。
【主权项】
1.马鲛鱼精液的超低温冷冻保存方法，其特征在于步骤如下: a、按体积比1:3?5的比例，将精液和冻存液放入冷冻管，封盖，然后冷冻管浸入布满干冰和异丙醇的盒子降温，降温至冷冻管内冻存液冻结，该盒子是盒子内先堆满干冰，再在干冰间隙中注满异丙醇； b、取出冷冻管放入液氮中保存。
【专利摘要】本发明公开了马鲛鱼精液的超低温冷冻保存方法，精液和冻存液先在异丙醇和干冰作用下降温，其中干冰为冷冻介质，异丙醇为降温的梯度介质，可以在不损伤精子情况下，使冷冻管内冻存液逐渐冻结，再在液氮中保存，这样在液氮中速冻前，精子已冻结，速冻就不会损伤精子，因此本发明是一种方法简单，速冻时精子不会冻坏的马鲛鱼精液的超低温冷冻保存方法。
【IPC分类】A01N1/02
【公开号】CN105010305
【申请号】CN201510380279
【发明人】郑春静, 刘军
【申请人】宁波市海洋与渔业研究院
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2015年7月2日