一种杀虫活性物质及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物防治植物害虫领域，尤其涉及一种杀虫活性物质，具体地，涉及一 种从长枝木霉菌的次级代谢产物中制备得到的杀虫活性物质，以及这种杀虫活性物质的制 备方法及其在生物防治植物害虫方面的应用，尤其是在烟粉虱和草莓红蜘蛛防治方面的应 用。
【背景技术】
[0002] 烟粉虱[Bemisia tabaci (Gennadius)]，俗称小白蛾，是一种世界性的害虫。原发 于热带和亚热带区，借助花卉及其它经济作物的苗木迅速扩散，在世界各地广泛传播并暴 发成灾，近年来也已成为我国新发生的一种虫害，危害番茄、黄瓜、辣椒等蔬菜及棉花等众 多作物。烟粉虱直接刺吸植物汁液，导致植株衰弱，若虫和成虫还可以分泌蜜露，诱发煤污 病的产生，密度高时，叶片呈现黑色，严重影响光合作用。另外，烟粉虱还可以在30种作物 上传播70种以上的病毒病，给农业生产造成了严重的损失。烟粉虱具有寄主广泛、体被蜡 质、世代重叠、繁殖速度快、传播扩散途径多等特点，防治极为困难。
[0003] 草莓红蜘蛛，学名朱砂叶螨（Tetranychuscinnabarinus Boisduval)，是草莓的重 要害虫，草莓在生长中、后期，经常遭受红蜘蛛的暴发危害，被害植株矮化早衰，叶片呈红褐 色干枯。在开花期受害，则果实缩小，畸形果增多，严重影响草莓鲜果的产量。
[0004] 长期以来人们一直使用化学农药控制病虫害，但是化学农药的毒性较大且残留量 也较高，特别像草莓这类鲜食水果，长时间使用化学农药，对环境及人们的健康都会产生严 重影响，还会破坏生态平衡。所以需要进一步筛选和开发出，有效防治烟粉虱和红蜘蛛的高 效、低毒的生物农药，用以减少和取代化学农药的使用量。
【发明内容】
[0005] 基于上述的【背景技术】，本发明提供了一种从长枝木霉菌的次级代谢产物中制备得 到的杀虫活性物质，以及这种杀虫活性物质的制备方法及其在生物防治植物害虫方面的应 用。本申请发明人发现，长枝木霉菌的代谢产物中含有对烟粉虱和草莓红蜘蛛有灭杀作 用的有效成分。本发明申请人上海万力华生物科技有限公司于2014年1月14日将该菌 株提交给中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏号为CGMCC No.8723〇
[0006] 本发明的第一方面的主题是一种从长枝木霉菌的次级代谢产物中制备杀虫活性 物质的方法，其特征在于，包括：
[0007] 步骤1 :对能产生杀虫活性物质的长枝木霉菌进行液体发酵，得到含有杀虫活性 代谢产物的培养液；
[0008] 步骤2 :将得到的含有杀虫活性代谢产物的培养液进行粗提取操作，得到杀虫活 性物质的粗提物。
[0009] 进一步地，所述方法还包括将所述杀虫活性物质的粗提物进一步加工制得一种杀 虫剂的步骤3,具体包括：使用本技术领域已知的农药所通用的固相液相及乳化剂分散润 湿剂等各种载体，配制成任意剂型的杀虫剂，优选自乳油、水分散粒剂、可湿性粉剂、悬浮 剂、悬乳剂、泡腾片剂中的任意一种，更优选地，进一步适当添加包括分散剂，润湿剂，乳化 剂，渗透剂，粘着剂，消泡剂，发泡剂，增稠剂，稳定剂中的任意一种或几种的助剂。
[0010] 在本发明的实施例中，所述步骤1，具体包括将能产生杀虫活性物质的长枝木霉菌 菌株接种到液体发酵培养基中培养。
[0011] 优选地，所述长枝木霉菌菌株为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (CGMCC)保藏，保藏号为CGMCC No. 8723的菌株。
[0012] 优选地，所述培养基的组分包括：5g/L蛋白胨，30g/L蔗糖，2g/L牛肉膏，0. 25g/L 硫酸镁，〇.5g/L磷酸二氢钾；其中，所述蛋白胨、蔗糖、牛肉膏、硫酸镁和磷酸二氢钾的浓度 所对应的体积为培养基的体积。
[0013] 优选地，所述培养的温度为25~30 °C。
[0014] 优选地，所述培养的方式是：200-500rpm的转速振荡培养5~7天，优选为300rpm 的转速。
[0015] 进一步地，所述步骤1中由该菌株发酵上述培养基得到的发酵制品也属于本产品 的保护范围。
[0016] 在本发明的实施例中，所述粗提取操作优选为将得到的含有杀虫活性代谢产物的 培养液进行离心过滤，分离上清液和菌丝体，然后分别对上清液和菌丝体进行杀虫活性物 质的分离提取，合并提取液并浓缩，得到所述粗提物。
[0017] 优选地，所述上清液的分离提取方法为：将20BV的上清液，以4BV/h流速通HZ806 大孔吸附树脂吸附后，用2倍柱体积20%的酒精水溶液，2BV/h流速洗脱去除杂质，再用 2.58￥的50%酒精水溶液28￥/11洗脱，收集洗脱液。
[0018] 优选地，所述菌丝体的分离提取方法为：将菌丝体用70%的酒精浸泡24小时后过 滤，收集滤液，该过程重复两次，然后将滤液浓缩去除酒精，再用等体积正丁醇萃取两遍，收 集并合并有机相提取液。
[0019] 优选地，所述浓缩的方法为：于55°C，-0.1 Mpa真空旋转蒸发仪中浓缩至恒重。
[0020] 本发明的第二方面的主题是一种上述所述制备方法制备得到的杀虫活性物质。
[0021] 进一步地，所述杀虫活性物质可以进一步制备得到一种杀虫剂。
[0022] 本发明的第三方面的主题是一种上述所述杀虫活性物质的应用，包括在烟粉虱和 草莓红蜘蛛防治方面的应用。
[0023] 本发明所涉及的一种长枝木霉菌的次级代谢产物所含有的杀虫活性物质，对人畜 无毒性，并符合生态环保使用要求。经测试，本发明所涉及的杀虫活性物质在使用时靶标性 强，将制备的8%的初提物乳油制剂稀释500倍，对烟粉虱和草莓红蜘蛛的灭杀率达90%以 上。同时，该初提物在常温下保存两年，仍具有灭杀活性。本发明中具有杀虫活性的粗提物 的化学稳定性强，在pH = 2. 0~11. 0、温度为10~100°C条件下均对烟粉虱和草莓红蜘蛛 有杀灭作用。
[0024] 可见，本发明的优点在于使用所述菌株进行白粉虱和草莓红蜘蛛的防治安全可 靠，不产生药害，不危害人类健康，不污染环境。
【附图说明】
[0025] 图1为在本发明的一个优选实施例中，所述粗提取操作的线路示意图。
【具体实施方式】
[0026] 本发明提供了一种从长枝木霉菌的次级代谢产物中制备杀虫活性物质的方法，其 特征在于，包括：
[0027] 步骤1 :对能产生杀虫活性物质的长枝木霉菌进行液体发酵，得到含有杀虫活性 代谢产物的培养液；
[0028] 步骤2 :将得到的含有杀虫活性代谢产物的培养液进行粗提取操作，得到杀虫活 性物质的粗提物。
[0029] 进一步地，所述方法还包括将所述杀虫活性物质的粗提物进一步加工制得一种杀 虫剂的步骤3,具体包括：使用本技术领域已知的农药所通用的固相液相及乳化剂分散润 湿剂等各种载体，配制成任意剂型的杀虫剂，优选自乳油、水分散粒剂、可湿性粉剂、悬浮 剂、悬乳剂、泡腾片剂中的任意一种，更优选地，进一步适当添加包括分散剂，润湿剂，乳化 剂，渗透剂，粘着剂，消泡剂，发泡剂，增稠剂，稳定剂中的任意一种或几种的助剂。
[0030] 在本发明的实施例中，所述步骤1，具体包括将能产生杀虫活性物质的长枝木霉菌 菌株接种到液体发酵培养基中培养。
[0031] 所述长枝木霉菌菌株为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC) 保藏，保藏号为CGMCC No. 8723的菌株。
[0032] 所述培养基的组分包括：5g/L蛋白胨，30g/L蔗糖，2g/L牛肉膏，0· 25g/L硫酸镁， 〇.5g/L磷酸二氢钾；其中，所述蛋白胨、蔗糖、牛肉膏、硫酸镁和磷酸二氢钾的浓度所对应 的体积为培养基的体积。
[0033] 所述培养的温度为25~30 °C。
[0034] 所述培养的方式是：200-500rpm的转速振荡培养5~7天，优选为300rpm的转速。
[0035] 进一步地，所述步骤1中由该菌株发酵上述培养基得到的发酵制品也属于本产品 的保护范围。
[0036] 在本发明的实施例中，所述粗提取操作优选为将得到的含有杀虫活性代谢产物的 培养液进行离心过滤，分离上清液和菌丝体，然后分别对上清液和菌丝体进行杀虫活性物 质的分离提取，合并提取液并浓缩，得到所述粗提物。
[0037] 所述上清液的分离提取方法为：将20BV的上清液，以4BV/h流速通HZ806大孔吸 附树脂吸附后，用2倍柱体积20 %的酒精水溶液，2BV/h流速洗脱去除杂质，再用2. 5BV的 50 %酒精水溶液2BV/h洗脱，收集洗脱液。
[0038] 所述菌丝体的分离提取方法为：将菌丝体用70%的酒精浸泡24小时后过滤，收集 滤液，该过程重复两次，然后将滤液浓缩去除酒精，再用等体积正丁醇萃取两遍，收集并合 并有机相提取液。
[0039] 所述浓缩的方法为：于55°C，-0.1 Mpa真空旋转蒸发仪中浓缩至恒重。
[0040] 本发明还提供了一种上述所述制备方法制备得到的杀虫活性物质。
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