大叶钩藤的快速繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物栽培领域，更具体地说，本发明涉及一种大叶钩藤的快速繁殖方 法。
【背景技术】
[0002] 大叶钩藤为茜草科钩藤属植物，为常用中药，临床多用于治疗头晕目眩、惊痫抽 搐、全身麻木等心血管和神经系统疾病，现已成为治疗高血压方剂中常用药物，壮、瑶民间 除了用其带钩茎枝外，还常以地上部分（茎枝及叶）或叶入药用。大叶钩藤主要产于云南、 广西、广东、海南；生于次生林中，常攀援于林冠之上。国外分布于印度、不丹、孟加拉国、緬 甸、泰国北部、老挝、越南等地，生于灌木林或杂木林中。大叶钩藤的利用主要以野生资源 为主，目前也有少量引种栽培，栽培中以种子播种和扦插繁殖为主，但成活率和繁殖系数偏 低，利用组织培养快繁技术，可以有效快速的增加其繁殖系数，不仅能满足市场对大叶钩藤 药材的需求，又有利于大叶钩藤野生资源的保护。目前钩藤属中其他种的组织快繁已有报 道，而以大叶钩藤枝条作为繁殖材料的组织培养与快速繁殖尚未见报道。本发明通过建立 大叶钩藤的组织培养快速繁殖方法，具有繁殖率高、繁殖速率快等优点，便于在生产上大面 积推广种植，满足了中药资源开发的迫切需要。
【发明内容】
[0003]本发明的一个目的是解决上述问题和缺陷，并提供后面将说明的优点。
[0004]本发明还有一个目的是提供一种大叶钩藤的快速繁殖方法，首先利用针对大叶钩 藤的第一培养基和第二培养基培养大叶钩藤的无菌外植体至生根，加快大叶钩藤苗的生根 速率。
[0005]本发明还有一个目的是提供一种适用于大叶钩藤苗的基质，保证大叶钩藤苗减少 虫害的侵蚀，提高大叶钩藤的产量。
[0006]为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种大叶钩藤的快速繁殖方 法，包括以下步骤：
[0007]步骤一、制作大叶钩藤的无菌外植体；
[0008]步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养，控制温度为24°C~ 26°C，诱导腋芽形成；所述第一培养基包括B5培养基、1~I. 3mg/L的竹醋液、35g/L的罗汉 果渣和4g/L的琼脂；
[0009]步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培 养，控制温度为24°C~26°C，培养直至生根；其中，所述第二培养基包括固态培养基和液态 培养基，所述第二培养基放置于培养盒中，使固态培养基在所述液态培养基的上方；
[0010] 所述固态培养基包括white培养基、0? 1~0? 2mg/L的香蕉泥、0? 1~0? 5mg/L的 激动素KT、0. 7~0? 8mg/L的吲哚丁酸、4g/L的琼脂和0? 1~0? 5g/L的活性炭；
[0011] 所述液态培养基包括B5培养基、0. 6~0. 9mg/L竹醋液和0. 2~0. 4mg/L椰子提 取液；所述椰子提取液的制作方法为将所述椰衣纤维粉碎至150-200目，向所述椰衣纤维 中加入其5倍质量的淘米水，控制温度为70°C，温浸1小时；过滤，得第一滤液和第一滤渣， 向所述第一滤渣中加入其3倍质量的淘米水，控制温度为80°C，温浸1. 5小时，过滤，得第二 滤液，将所述第一滤液和第二滤液合并，并浓缩至I. 52mg/L，即得所述椰子提取液。
[0012] 优选的是，所述步骤三中，从无菌外植体的下端开始，将带有腋芽的无菌外植体的 1/8浸没于所述液态培养基，将带有腋芽的无菌外植体的3/8置于所述固态培养基中。
[0013] 优选的是，所述培养盒包括：
[0014] 盒体，其为去顶倒置圆锥状；
[0015] 隔板，其为圆形，所述隔板可拆卸的固定于所述盒体内，使所述盒体形成上部空间 和下部空间，所述隔板平行于所述盒体的底部，所述隔板上间隔设置有2~4个使所述无菌 外植体通过的第一通孔；
[0016] 其中，所述盒体的底部设置有排水管，所述排水管上设有第一控制阀，所述盒体的 下部空间的侧壁设置有进水管，所述进水管上设有第二控制阀，所述固态培养基设置于所 述上部空间中，所述液态培养基置于所述下部空间中。
[0017] 优选的是，还包括：步骤四、将生根的大叶钩藤苗移栽至基质中培养，移栽 后在所述基质表面铺设一层聚乙烯缓释膜，所述聚乙烯缓释膜中注入有质量配比为 10 :I: 10 : 2的硫酸亚铁、有机螯合肽、硼砂和七水硫酸锌；
[0018] 所述基质从下到上由草灰层、细胞分裂剂层、鱼骨层和膨润土层按厚度比为 4 : 1 : 2 : 5构成。
[0019] 优选的是，所述步骤一中，选取大叶钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段，摘除多余叶片， 用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面，然后剪成2-4cm长的带腋芽的嫩茎段作为大叶钩 藤的无菌外植体。
[0020] 优选的是，所述步骤一中，对大叶钩藤的外植体进行消毒，具体消毒的过程为：用 质量比为1 : 100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min，再用无菌水润洗所述 外植体三遍，之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1%的竹醋液 中25-30min，之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述外植体20-30s。
[0021] 优选的是，大叶钩藤的无菌外植体在第一培养基中培养时，调节pH为5. 7,控制光 照强度为16001x，每天的光照时间为8小时；大叶钩藤的无菌外植体在第二培养基中培养 时，调节所述固态培养基的pH为5. 7,调节所述液态培养基的pH为5. 3,控制光照强度为 20001x，每天的光照时间为11小时。
[0022] 本发明至少包括以下有益效果：
[0023] 1、大叶钩藤苗的外植体消毒采用的是由大蒜素和乙醇混合而成的消毒液，相较于 一般消毒液和洗洁精，本发明的消毒液提取的是大蒜中的有效成分，在保证大叶钩藤苗的 外植体杀菌消毒的同时，可以提高大叶钩藤苗的外植体在组织培养时的成活率，成活率可 提高26%左右。用消毒后的茶水对外植体冲洗，使外植体上附着一层茶水膜，茶水中的茶多 酚对植物的病原真菌和分生孢子的萌发有极强的抑制作用，防止外植体的生长感染真菌， 提高带外植体的存活率。
[0024] 2、大叶钩藤的快速培养首先通过组织培养，培养大叶钩藤的外植体生根，之后再 移栽，采用本发明的培养基配合大叶钩藤的生长，大大加快了大叶钩藤的生长速度，其中大 叶钩藤无菌外植体腋芽的形成仅需一周左右、在得到有腋芽的无菌外植体后植入第二培养 基中培养7-10天就可得到大叶钩藤的生根苗。比普通的培养基培养不仅提高了存活率，同 时还大大缩短了培育时间。
[0025] 3、第一培养基和第二培养基中添加有竹醋液，竹醋液能有效地促进大叶钩藤无菌 外植体腋芽的形成，缩短腋芽形成的时间，明显改善大叶钩藤的组织细胞分裂，生长，使大 叶钩藤的根分化出来，同时促进形成层细胞分裂，长大，使茎逐渐加粗。同时竹醋液有利于 提高大叶钩藤对光的吸收，促进大叶钩藤的光合作用，促进大叶钩藤苗的营养吸收。
[0026] 4、在生根阶段，采用固态培养基和液态培养基的搭配，液态培养基中采用的是竹 醋液和椰子提取液，保证了大叶钩藤快速繁殖的同时，不会出现畸形化，使组织培养出的大 叶钩藤苗和自然生长的大叶钩藤苗生长顺序相同，不会出现异化现象，在后期的移栽存活 率也很高。
[0027] 5、整个组织培养中所用的激素相较于一般的组织培养所用的激素要少，由于在激 素环境下会导致根原基维管束的排列紊乱，有时会导致根无法顺利的萌发，将大叶钩藤的 根原基维管束浸泡于液态培养基中，将上面一部分设置于固态培养基中，保证了大叶钩藤 生根所需的环境，同时提高了大叶钩藤根的萌发率。
[0028] 6、针对固液两用培养基，设计了一种培养盒，培养盒通过隔板分隔成两个空间，上 面一个空间可以搁置固态培养基，下面一个空间可放置液态培养基，隔板上设置有2~4个 第一通孔，用于放置大叶钩藤的无菌外植体，同时也可保证固液两个培养基之间一定的连 通，设置进水管和排水管，可在不更换固态培养及且不移出大叶钩藤苗的情况下定期更换 液态培养基，隔板也可从盒体中抽出，盒体设置成倒置圆锥状方便隔板的取出。
[0029] 7、基质的表面铺设聚乙烯醇缓释膜，可缓慢释放大叶钩藤所需的营养物质，不需 人工管理，保证了大叶钩藤生长所需。
[0030] 8、鱼骨层中的营养物质是水溶性物质，全是大叶钩藤生长所需，且很容易被大叶 钩藤吸收，减少了难降解的有机化学物质的使用，从而减少了对环境的污染。
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