一种防治拟穴青蟹苗种真菌病的方法
【技术领域】
[0001] 本发明提供了一种有效防治拟穴青蟹苗种真菌病的方法，属于海水蟹类繁育技术 领域。
【背景技术】
[0002] 真菌病是拟穴青蟹（以下简称青蟹）苗种生产中的常见病。该病一般在蟹苗变态 为Z2(二期潘状幼体）的第二天集中暴发，5~12h内可导致苗池内大部分蟹苗死亡。患病 蟹苗表观症状为体色发白，个体活力下降，显微镜下可清晰看到树状分枝菌丝，也可见到成 熟的菌丝体生出细长的排放管，伸到宿主体外，其末端膨大为球形的顶囊。由于该病除青蟹 外，在中华绒螯蟹、三疣梭子蟹、对虾等甲壳动物的苗种生产中也常有发生，且具有传染性 强，死亡率高的特点，因此受到业界的高度关注。该病病原主要来自亲蟹抱卵孵化期间，底 质或水质欠佳等条件下在蟹卵上滋生的链壶菌（LagenidiumSP)等属的真菌，在受精卵孵 化后随初孵幼体一起进入苗池。附着在幼体上的真菌游动孢子，经过一段时间的休眠，向幼 体体内伸出发芽管，随着发芽管膨大，发育成新的菌丝体，在幼体内迅速生长，很快布满幼 体全身，导致幼体死亡。由于青蟹育苗通常在28~30°C高温条件下进行，该条件下病原菌 繁殖速度极快，病害暴发时可导致种苗场无法进行正常生产，造成重大经济损失。
[0003] 因此，青蟹真菌病的防治对于青蟹苗种生产十分重要。21世纪初，我国青蟹苗种生 产中通常使用氟乐灵（泰国产，40%乳油制剂）、甲醛溶液（福尔马林）和亚甲基蓝等作为 防治真菌病的药物。使用方法分别为：（1)氟乐灵，在Zl幼体入池后按终浓度0.05ml/m3用 淡水稀释，全池泼洒；（2)甲醛溶液，在抱卵蟹放入孵幼水槽（池）待产前夕加入到水体中， 维持25ml/m3的终浓度直至幼体孵出；（3)亚甲基蓝，在Zl幼体入池后，按0.lg/m3~0. 5g/ m3的终浓度全池泼洒。
[0004] 值得注意的是，上述几种防治真菌病的方法，近年来因所用药品药残期过长或使 用效果不佳等原因被禁用或限制使用。如：（1)氟乐灵作为一种农用除草剂，因其成本低 廉、防治真菌病效果明显被国内外青蟹、对虾苗种生产单位接受并广泛使用，但后来由于其 不易降解，易于生物蓄积和对水生生物有毒等原因，在国际上被列为禁药。我国也自2011 年起禁止在水产养殖上应用氟乐灵。（2)甲醛是一种广谱杀菌、杀虫化学制剂，因具有易挥 发、药残期短，对甲壳动物生长、成活影响较小等优点被应用于水产养殖。但在青蟹苗种生 产中，甲醛对真菌病的防治效果不如亚甲基蓝、制霉菌素等抗真菌类药物。此外，将甲醛应 用于真菌病防治，虽然不会对蟹苗的生长、变态产生直接影响，但会对轮虫等蟹苗的早期生 物饵料和育苗系统中的有益微生物群产生较大的伤害，从而间接影响蟹苗的生长和成活。 生产性应用结果表明，以甲醛防治青蟹苗种真菌病的单位水体出苗量一般低于3000只/m3， 综合效果不佳。（3)亚甲基蓝是一种噻嗪类染料，水产养殖上主要是利用它的氧化性来实现 杀菌和杀虫的目的。研究表明，亚甲基蓝在防治中华绒螯蟹离体胚胎真菌病的效果优于孔 雀石绿和甲醛，但由于这种药物具有与孔雀石绿相同的三苯甲烷结构，毒副作用很强，有专 家建议将其列入禁药一类，应用前景也并不看好。由此可见，寻求适合青蟹苗种生产实际的 真菌病防治药品及其使用方法，对青蟹养殖产业的发展具有重要的意义。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种防治拟穴青蟹苗种真菌病的方法。
[0006] 青蟹苗种真菌病防治的前提是所用药品必须符合国家药品管理的相关规定，并能 有效抑制真菌繁殖，产品质量稳定，且对蟹苗的生长发育和包括饵料生物在内的苗池生态 环境无不良影响；另外，还需要根据青蟹苗种培育特点，选择经济、有效的药品使用方法。按 照上述原则，本发明选择制霉菌素作为防治青蟹苗种真菌病的首选药品。该药为人用口服 药，属多烯型抗生素制药，具有共辄多烯大环内酯结构，能抑制真菌活性。使用方法方面，本 发明根据青蟹苗种真菌病的发病特点，以Zl~Z2和Z2~Z3成活率为比较依据，针对青 蟹Zl初孵幼体和Z2初期幼体两个不同发育阶段进行了制霉菌素真菌防治效果试验，最终 确定Zl初孵幼体为制霉菌素适宜用药阶段。在此基础上，为筛选能抑制真菌繁殖，但对蟹 苗生长、变态无碍的合理用药剂量和用药时间，本发明以Z1初孵幼体为试验对象，5000IU/ L(国际单位/L)为浓度梯度，在0~50000IU/L用药浓度范围内进行了 72h的制霉菌素安 全性和有效性试验，最终确定将Zl初孵幼体置于制霉菌素25000IU/L水体中药浴3h后按 常规方法培育蟹苗可有效防止真菌病发生。
[0007] 具体实施方法为：
[0008] A、抱卵亲蟹孵出Zl幼体前夕，将其放入400L圆形平底孵化桶内，每个孵化桶内 抱卵亲蟹放养量视个体大小而定：亲蟹个体重300g以上（抱卵数量200万粒以上），1只/ 桶；小于300g(抱卵数量150万粒以下），2只/桶。黑暗条件下充气待产。
[0009]B、当受精卵全部孵化，Zl初孵幼体全部游离于水体中后，将亲蟹取出，停气，顺时 针搅动水体，采用虹吸法去除集聚一起的死卵、粪便等杂物后，按25000IU/L终浓度将20片 (500000IU/片）制霉菌素片置于250目筛网中，用淡水浸泡、溶解、过滤后泼洒入孵化桶。 充气、黑暗条件下药浴3h后停止充气，用水勺捞取趋光上浮的蟹苗放入育苗池，按常规育 苗方法培育蟹苗。
[0010] 所述的虹吸法，为本领域常规技术，可参见文献：
[0011] 李惠玉，洪性润.底质对小褐虾生长和存活率影响的实验研究，中国水产科学， 2007(1) :90-98.
[0012] 纪文秀，王岩，唐金玉.海水养殖花鲈对几种饲料蛋白原料的表观消化率，水产学 报，2010(1) :101-107.
[0013] 所述的制霉菌素的终浓度，是指制霉菌素总的国际效价单位值除以孵化桶内水的 体积得到的浓度。
[0014] 其中步骤A中充气待产时，保持溶氧量>5mg/L，水温28~30°C。
[0015] 其中步骤B中制霉菌素片用淡水浸泡、溶解、过滤的具体步骤为：制霉菌素片用淡 水冲洗掉肠衣，浸泡后使用250目筛絹搓洗过滤。
[0016] 其中步骤B中药浴时，保持溶氧量>5mg/L，水温28~30 °C。
[0017] 在本发明中，青蟹Zl~M(大眼幼体）中各个时期分别指：Zl代表青蟹潘状幼体1 期，Z2代表潘状幼体2期，以此类推；M代表青蟹大眼幼体。
[0018] 青蟹Zl初孵幼体是指：由于潘状幼体1期通常经过3天左右的培育可蜕壳变态为 潘状幼体2期，Zl初孵幼体是指刚刚从受精卵孵化而来，即第1天的Zl幼体。
[0019] Z2初期是指：通常潘状幼体2期经过2天左右培育后可蜕壳变态为潘状幼体3期， Z2初期是指刚从Zl变态而来的Z2期幼体，即第1天的Z2幼体。
[0020] 有益效果
[0021] 本发明针对青蟹真菌病病原主要来自抱卵亲蟹以及正常情况下幼体孵出时间为 上午6 :00~8 :00,幼体孵出后4~5h不摄食饵料不会影响其正常变态发育的特点而研发， 能够有效防止青蟹苗种生产过程中真菌病的发生，并且与以往直接在育苗池内泼洒药品防 治真菌病的常规方法相比，本发明的药品使用量仅为常规方法的1/20,用药成本从原来每 个育苗池92元降低至4元。另外，市售制霉菌素片的制霉菌素有效含量为500000IU/片， 由淀粉和制霉菌素原药混合压制而成。由于作为黏合剂使用的淀粉在其中占了很大比例， 常规方法用药后，为避免淀粉入池导致苗池水质败坏，通常需要通过大换水保持苗池水质 稳定，这不仅会使育苗水体中轮虫等生物饵料流失，影响蟹苗的正常摄食，而且换水后残留 在育苗水体中的淀粉仍将成为影响苗池水质稳定的隐患。本发明将蟹苗药浴处理与苗种培 育分开进行的方式，可完全避免因用药而产生的上述副作用。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人 员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定 的范围。
[0023] 实施例1
[0024] 本发明分别于2013