红景天提取物在抑制番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的应用
【专利说明】红景天提取物在抑制番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的应 用
[0001] 本申请是申请号为201410069489. 8、申请日为2014年02月27日、发明创造名称 为"红景天提取物及其制备方法与应用"的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明涉及红景天提取物在抑制番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的应用。
【背景技术】
[0003] 植物病原真菌广泛分布于世界各地，引起农作物、林木、蔬菜、经济作物、观赏作物 病害，常造成植物早期失绿、叶枯、落叶、枯萎和腐烂，严重影响植物生长发育、产量及品质， 给农业生产和人民生活带来严重损失。目前植物真菌病害防治仍以有机合成的化学药剂防 治为主，但大量化学农药的使用，带来了很大的负面生态影响，且容易使植物产生药害和 抗药性，严重影响抗植物病原真菌制剂在农业生产中的应用。近年来，随着日光温室、塑料 大棚、地膜覆盖等保护措施的改进，果蔬的真菌病害严重，已经成为制约我国水果和蔬菜高 效、安全生产的主要原因，常使国家经济和人民生活遭受严重损失。随着无公害农产品生产 规模的逐步扩大和化学农药使用产生的抗药性、农药残留等问题的日益严重，寻找和使用 无毒，高效的新型植物源农药越来越受到人们的重视。
[0004] 景天科（Crassulaceae)红景天属（Rhodiola)植物，全世界约有90种，主要分布 于北半球高寒地带。多分布于喜马拉雅地区、亚洲西部至北部，经朝鲜、日本至北美洲，中国 为红景天属植物的分布中心，约70余种。红景天属植物为多年生具根状茎草本，根状茎上 有鳞片；花单性异株或杂性，排成伞房花序，通常4数，雄花有退化的雌蕊，雌花无退化的雄 蕊，花瓣很小或完全消失。药理作用研究表明，红景天具有抗肿瘤、抗氧化、抗疲劳、抗辐射 等功能，为航空、航天、军事医学、运动医学和卫生保健的重要药材。其中目前研究比较清楚 也是大家较为认同的主要生理活性物质是红景天苷（salidroside)。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的技术问题是提供红景天提取物及其制备方法与应用。
[0006] 本发明提供了三种红景天提取物。
[0007] 本发明所提供的第一种红景天提取物为红景天95%乙醇提取物，其制备方法包 括：用95%乙醇水溶液提取红景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到红景 天95%乙醇提取物；所述红景天95%乙醇提取物为第一种红景天提取物；所述红景天为大 花红景天、高山红景天和/或小花红景天。
[0008] 本发明所提供的第二种红景天提取物为红景天乙酸乙酯萃取物，其制备方法包 括：1)用95%乙醇水溶液提取红景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得到红 景天95 %乙醇提取物；
[0009] 2)将所述红景天95%乙醇提取物用水分散成混悬液，用石油醚萃取所述混悬液， 收集水相，用乙酸乙酯萃取所述水相，收集乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯 即得到红景天乙酸乙酯萃取物；所述红景天乙酸乙酯萃取物为第二种红景天提取物；
[0010] 所述红景天为大花红景天、高山红景天和/或小花红景天。
[0011] 本发明所提供的第三种红景天提取物为红景天乙酸乙酯洗脱物，其制备方法包 括：
[0012] 1)用95%乙醇水溶液提取红景天根，收集提取液并除去所述提取液中的乙醇，得 到红景天95 %乙醇提取物；
[0013] 2)将所述红景天95%乙醇提取物用水分散成混悬液，用石油醚萃取所述混悬液， 收集水相，用乙酸乙酯萃取所述水相，收集乙酸乙酯相，除去所述乙酸乙酯相中的乙酸乙酯 即得到红景天乙酸乙酯萃取物；
[0014] 3)将步骤2)的红景天乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析得到红景天乙酸乙酯洗脱 物；所述硅胶柱层析的洗脱是先用乙酸乙酯-石油醚进行洗脱，然后用乙酸乙酯进行洗脱， 收集用乙酸乙酯洗脱得到的洗脱液，得到红景天乙酸乙酯洗脱物；所述乙酸乙酯-石油醚 是乙酸乙酯和石油醚按照1:1的体积比混合得到的混合物；所述红景天乙酸乙酯洗脱物为 第三种红景天提取物；
[0015] 所述红景天为大花红景天。
[0016] 实验证明，大花红景天95 %乙醇提取物在浓度为lmg/ml时，对番前灰霉病病菌的 抑菌率达到0. 523,对白菜黑斑病菌的抑菌率达到0. 490 ;小花红景天95%乙醇提取物在 浓度为lmg/ml时，对番茄灰霉病病菌的抑菌率达到0. 404,对白菜黑斑病菌的抑菌率达到 0. 449 ;高山红景天95%乙醇提取物在浓度为lmg/ml时，对番茄灰霉病病菌的抑菌率达到 0. 510,对白菜黑斑病菌的抑菌率达到0. 337。大花红景天乙酸乙酯萃取物在浓度为0.Img/ ml时对番茄灰霉病病菌的抑菌率达到0. 580,大花红景天乙酸乙酯洗脱物在浓度为0.Img/ ml时对番茄灰霉病病菌的抑菌率达到0. 690 ;大花红景天乙酸乙酯萃取物在浓度为0.Img/ ml时对白菜黑斑病菌的抑菌率达到0. 406,大花红景天乙酸乙酯洗脱物在浓度为0.lmg/ml 时对白菜黑斑病菌的抑菌率达到〇. 376。说明大花红景天、高山红景天和/或小花红景天可 用于制备番茄灰霉病病菌和/或白菜黑斑病菌抑制剂。
[0017] 上述第一种红景天提取物、第二种红景天提取物和第二种红景天提取物在制备番 茄灰霉病病菌和/或白菜黑斑病菌抑制剂中的应用，大花红景天、高山红景天和/或小花红 景天在制备番茄灰霉病病菌和/或白菜黑斑病菌抑制剂中的应用也属于本发明的保护范 围。
[0018] 以上述红景天提取物为活性成分的植物病原真菌抑制剂也属于本发明的保护范 围；所述植物病原真菌为番茄灰霉病菌和白菜黑斑病菌中的二种或一种。
[0019] 上文中，所述95 %乙醇水溶液是乙醇体积百分含量为95 %的水溶液。
[0020] 本发明以中草药红景天为原料开发了一种环境友好、高效、低毒的潜在新型和谐 农药，对生态长远发展、人类的健康和病害的综合治理都具有深远的意义。与传统的农药相 比，本发明具有以下的特点和优点：1、本发明的红景天提取物，对番茄灰霉病病菌和白菜黑 斑病菌具有明显的抑制作用，可作为一种植物源农药开发。2、本发明的红景天提取物与红 景天中保健成分红景天苷所在极性部位并不重叠（邰韧辉，高纯度红景天苷的制备工艺研 究，现代中药研究与实践，2004，18(4)，58-59.)不影响红景天药效成分的使用，可以成为 很好的开发资源。
【附图说明】
[0021] 图1为大花红景天、小花红景天和高山红景天的95%乙醇提取物对白菜黑斑病菌 的抑制作用。
[0022] 图中，左侧1号图片为对照培养基平板，左侧2号图片为大花红景天95%乙醇提 取物的含量为lmg/mL的带药培养基平板，3号图片为小花红景天95%乙醇提取物的含量为 111^/1]11的带药培养基平板，4号图片为高山红景天95%乙醇提取物的含量为111^/1]11的带药 培养基平板。
[0023] 图2为大花红景天、小花红景天和高山红景天的95%乙醇提取物对番前灰霉病菌 的抑制作用。
[0024] 图中，左侧1号图片为对照培养基平板，左侧2号图片为大花红景天95%乙醇提 取物的含量为lmg/mL的带药培养基平板，3号图片为小花红景天95%乙醇提取物的含量为 111^/1]11的带药培养基平板，4号图片为高山红景天95%乙醇提取物的含量为111^/1]11的带药 培养基平板。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合【具体实施方式】对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐 明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为 常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0026] 下述实施例中的番前灰霉病菌（Botrytiscinerea)(朱建兰.番前灰霉病菌的生 物学特性研究，甘肃农业大学学报，1995, 30 (1)，73-78.)，公众可从野外采集，也可从北京 农学院获得，该生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。本申请 中简称番前灰霉病菌。
[0027] 下述实施例中的桃褐腐病菌（Moniliniafructicola)(胡海文，杨海清，王 朋，刘素花，赵晓燕，刘正坪.桃褐腐病菌拮抗细菌的分离筛选与鉴定，中国农学通报， 2009, 25 (12) : 195-200)，公众可从野外采集，也可从北京农学院获得，该生物材料只为重复 本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。本申请中简称桃褐腐病菌。
[0028] 下述实施例中的李干腐病菌（Polvporushirsutus)(任娜敏，马焕普，刘志民.诘 抗放线菌F1发酵液抑菌谱及稳定性分析，北京农学院