一种确定同色兜兰蒴果最佳采摘期的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于花卉栽培及组织培养技术领域，特别涉及一种确定同色兜兰蒴果最佳 采摘期的方法。
【背景技术】
[0002] 同色兜兰（Paphiopedilum concolor (Lindl. )Pfitz)属兰科杓兰亚科兜兰属植 物，是珍稀观赏植物，属于"野生动植物濒危物种国际贸易公约"(CITES)附录I的保护对象 而被禁止贸易。同色兜兰，地生或石上附生，植株丛生，叶4-7枚，矩圆形至狭椭圆形，叶上 有深浅绿色或绿色与乳白色相间的网格状；花葶近直立，1-3朵，多为相继开放，花淡黄色 或近黄色，具紫色细斑点，花期春夏季，是兜兰属植物重要的杂交亲本。
[0003] 同色兜兰常用种子或分株繁殖，但因母株少，分株繁殖速度慢，同时，由于其种子 无胚乳，在自然条件中极难萌发，繁殖率低。非共生无菌萌发是兰科植物种子繁殖的常规 方法。有报道称杓兰属（Cypripedium)和兜兰属植物是兰科植物中种子萌发最困难的种 类，同时，植物种子的发育阶段对无菌播种萌发率有重要的影响。其他兜兰属植物，如卷 萼兜兰（P. appletonianum)、带叶兜兰（P. hirsutissimum)、杏黄兜兰（P. armeniacum)、 硬叶兜兰（P.micranthum)、巨瓣兜兰（P.bellatulum)、古德兜兰（P.godefroyae)、海伦 兜兰（P.helenae)和亨利兜兰（P.henryanum)、白旗兜兰（P.spicerianum)及雪白兜兰 (P. niveum)的种子均存在种子发育过程中萌发率先升尚后降低的规律。
[0004] 本发明对同色兜兰不同发育时期的种子在相同培养条件下萌发时间、萌发率以及 原球茎生长情况的差异进行了系统研究，以期确定同色兜兰播种的最佳采种时期，探讨种 子成熟度与萌发率之间的关系，为同色兜兰的保育研究提供技术支持。
[0005] 公开于该【背景技术】部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应 当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种确定同色兜兰蒴果最佳采摘期的方法，解决了同色兜 兰的保育过程中因蒴果成熟度不佳导致种子萌发率过低的问题。
[0007] 为实现上述目的，本发明提供了一种确定同色兜兰蒴果最佳采摘期的方法，包括 以下步骤：
[0008] (1)果荚采集：对开花后4-10d的同色兜兰进行授粉，自授粉30-270d后摘取果荚 作为试验材料；
[0009] (2)果荚处理：果荚经自来水洗净，中性洗涤剂冲洗，酒精搽拭，流水冲洗15min后 转入超净工作台内，用75%酒精消毒30s，1%次氯酸钠溶液浸泡12min，之后用无菌水冲洗 6次，得到处理后的果荚；
[0010] (3)接种与种子显微结构观察：将处理后的果荚切开，取出种子，然后将一部分种 子接种于萌发培养基上，将另一部分种子置于显微镜下观察微观结构及胚发育状况；
[0011] ⑷种子无菌萌发情况统计：待种子接种于萌发培养基之后，观察、统计种子萌发 率：种子启动萌发15d后在超净工作台上，随机挑取100粒种子置于载玻片上，于显微镜下 观察不同视野，以胚突破种皮形成原球茎视为种子萌发；
[0012] (5)确定采摘期：若种子在显微镜下可见明显膨大，呈梭形，且其萌发率较高，萌 发时间较短时，则该种子的成熟期为最佳米摘期。
[0013] 优选地，本发明的技术方案中，步骤（3)中所述的萌发培养基为l/4MS+100ml? L 1 椰子乳+30g ? L 1鹿糖+4g ? L 1琼脂。
[0014] 优选地，本发明的技术方案中，步骤（3)中所述的萌发培养基的pH5. 2-5. 4。
[0015] 优选地，本发明的技术方案中，步骤（3)中所述的萌发培养基的培养条件为：光照 强度30-40umol ? m2 ? s \光照周期12h ? d \培养温度为25±2°C。
[0016] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0017] 1.本发明的方法确定了同色兜兰蒴果最佳采摘期，避免了蒴果采摘的盲目性，缩 短了同色兜兰的繁殖周期，为同色兜兰的保育研究提供技术支持。
[0018]2.本发明的方法操作简单、快捷、明了，为同色兜兰的保育提供了方便，节省了劳 动力。
【附图说明】
[0019] 图1为同色兜兰不同成熟期种子观察及种苗培养过程。
[0020] 图2为种子成熟度对种子萌发率和萌发所需时间的影响。
[0021] 主要附图标记说明：
[0022] 1-2 :30 DAP 的种子；3 :60 DAP 的种子；4-5 :90 DAP 的种子；6 :120 DAP 的种子 7 : 120 DAP的种子萌发情况；8:150 DAP的种子；9:150 DAP的种子萌发情况；10-11:180 DAP 的种子；12:180 DAP的种子萌发情况；13-14 :210 DAP的种子；15 :210 DAP的种子萌发情 况；16-17 :240 DAP的种子；18 :240 DAP的种子萌发情况。
【具体实施方式】
[0023] 下面结合附图，对本发明的【具体实施方式】进行详细描述，但应当理解本发明的保 护范围并不受【具体实施方式】的限制。
[0024] 除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语"包括"或其变 换如"包含"或"包括有"等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它 元件或其它组成部分。
[0025]实施例1 ：
[0026] 一种确定同色兜兰蒴果最佳采摘期的方法，包括以下步骤：
[0027] (1)果荚采集：对开花后4 d的同色兜兰进行授粉，自授粉30-270 d后摘取果荚 作为试验材料；
[0028] (2)果荚处理：果荚经自来水洗净，中性洗涤剂冲洗，酒精搽拭，流水冲洗15min后 转入超净工作台内，用75%酒精消毒30s，1%次氯酸钠溶液浸泡12min，之后用无菌水冲洗 6次，得到处理后的果荚；
[0029] (3)接种与种子显微结构观察：将处理后的果荚切开，取出种子，然后将一部分种 子接种于萌发培养基上，将另一部分种子置于显微镜下观察微观结构及胚发育状况；所述 的萌发培养基为l/4MS+100ml *L 1椰子乳+30g *L 1蔗糖+4g吨1琼脂；所述的萌发培养基 的pH 5. 2 ;所述的萌发培养基的培养条件为：光照强度30umol m 2 *s \光照周期12h ?(! \ 培养温度为25±2°C ;
[0030] (4)种子无菌萌发情况统计：待种子接种于萌发培养基之后，观察、统计种子萌发 率：种子启动萌发15d后在超净工作台上，随机挑取100粒种子置于载玻片上，于显微镜下 观察不同视野，以胚突破种皮形成原球茎视为种子萌发；
[0031] (5)确定采摘期：若种子在显微镜下可见明显膨大，呈梭形，且其萌发率较高，萌 发时间较短时，则该种子的成熟期为最佳米摘期。
[0032]实施例2：
[0033] 一种确定同色兜兰蒴果最佳采摘期的方法，包括以下步骤：
[0034] (1)果荚采集：对开花后10 d的同色兜兰进行授粉，自授粉30-270 d后摘取果荚 作为试验材料；
[0035] (2)果荚处理：果荚经自来水洗净，中性洗涤剂冲洗，酒精搽拭，流水冲洗15min后 转入超净工作台内，用75%酒精消毒30s，1%次氯酸钠溶液浸泡12min，之后用无菌水冲洗 6次，得到处理后的果荚；
[0036] (3)接种与种子显微结构观察：将处理后的果荚切开，取出种子，然后将一部分种 子接种于萌发培养基上，将另一部分种子置于显微镜下观察微观结构及胚发育状况；所述 的萌发培养基为l/4MS+100ml *L 1椰子乳+30g *L 1蔗糖+4g吨1琼脂；所述的萌发培养基 的pH 5. 4