促进安吉白茶愈伤组织增殖和提高其中茶多酚含量的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物组织培养领域，涉及一种促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高 其中茶多酚含量的方法。
【背景技术】
[0002] 安吉白茶是一种汉族名茶，产自浙江省安吉县溪龙乡，是茶（Camelliasinensis) 中一种能稳定遗传的白化突变品种。春季幼叶呈白色，尤以一芽二叶为最白，经脉翠绿。随 着气温升高，光照增强，叶色逐渐转化为白色，夏秋茶为绿色。安吉白茶原产于浙江省安吉 县，目前已有江苏、江西、河南、四川、重庆、贵州等地引种安吉白茶。
[0003] 安吉白茶具有很好的保健功效。如安吉白茶含有多种氨基酸的复合物和茶叶脂质 中的二苯胺，能够保肝护胃，可促进肝脏合成凝血素，具有抗衰老的功效；再如安吉白茶富 含氨基丁酸，能降血压、降血脂、降血糖；又如安吉白茶含微量元素锰、锌、硒及茶多酚类物 质，能增强记忆力，保护神经细胞，对脑损伤有很大的帮助；还如安吉白茶的茶多酚能防癌 抗癌等。
[0004] 目前尚未有关于如何促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高其中茶多酚含量的 相关报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的一个目的是提供一种促进安吉白茶愈伤组织增殖和/提高安吉白茶愈 伤组织中茶多酚含量的方法。
[0006] 本发明所提供的促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高安吉白茶愈伤组织中茶 多酚含量的方法，具体包括如下步骤：将安吉白茶愈伤组织置于培养基A中进行培养，从而 促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高安吉白茶愈伤组织中茶多酚含量；所述培养基A是 在MS固体培养基中加入TDZ、IAA和苯丙氨酸后得到的培养基；所述培养基A中TDZ的终浓 度可为0. 5mg/L、IAA的终浓度可为1. Omg/L、苯丙氨酸的终浓度可为0. 1-1. Omg/L ;pH5. 8。
[0007] 进一步，所述培养基A中TDZ的终浓度具体为0. 5mg/L、IAA的终浓度具体为 1. Omg/L、苯丙氨酸的终浓度具体为0? 5mg/L ;pH5. 8。
[0008] 本发明的另一个目的是提供一种促进安吉白茶愈伤组织增殖的方法。
[0009] 本发明所提供的促进安吉白茶愈伤组织增殖的方法，包括如下步骤：将安吉白茶 愈伤组织置于培养基B中进行培养，从而促进安吉白茶愈伤组织增殖；所述培养基B是 在MS固体培养基中加入TDZ和IAA后得到的培养基；所述培养基B中TDZ的终浓度可为 0? 5-4.Omg/L、IAA的终浓度可为 0? 5-4.Omg/L;pH5. 8。
[0010] 进一步，所述培养基B中TDZ的终浓度具体为0.5mg/L、IAA的终浓度具体为 1. 0mg/L ;pH5. 8。
[0011] 在上述两种方法中，所述培养的条件均可为：温度25±2°C、光照时间12h/天、光 照强度30~40mmol?m2 ?si。所述培养的周期均可为45天。
[0012] 进一步，所述安吉白茶愈伤组织可按照包括如下步骤的方法制备获得：将安吉白 茶的叶片接种于愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导培养，获得所述安吉白茶愈伤组 织；所述愈伤组织诱导培养基在MS固体培养基中加入TDZ后得到的培养基；所述愈伤组织 诱导培养基中1DZ的终浓度可为1. 0-2.Omg/L(如1.Omg/L) ;pH5. 8 ;
[0013] 其中，所述愈伤组织诱导培养的条件可为：温度25±2°C、光照时间12h/天、光照 强度30~40mmol?m2 ?s%所述愈伤组织诱导培养的周期可为45天。
[0014] 在上述方法的步骤（1)中，所述安吉白茶的叶片为消毒后的叶片，大小约为 0. 5X0. 5cm;所述消毒具体可为：将待消毒的安吉白茶的叶片用流水冲洗lh，将冲洗过的 叶片用体积分数为70 %的酒精消毒30s，再用质量分数为0. 1 %的升汞水溶液消毒8min，最 后用无菌水冲洗（如冲洗5次）。
[0015] 本发明的又一个目的是提供一种用于促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高安 吉白茶愈伤组织中茶多酚含量的培养基。
[0016] 本发明所提供的用于促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高安吉白茶愈伤组织 中茶多酚含量的培养基，具体可为如下（A)或（B):
[0017] (A)所述培养基A;
[0018] (B)由所述培养基A以及所述愈伤组织诱导培养基组成的成套培养基。
[0019] 本发明的还一个目的是提供一种用于促进安吉白茶愈伤组织增殖的培养基。
[0020] 本发明所提供的用于促进安吉白茶愈伤组织增殖的培养基，具体可为如下（C)或 (D)：
[0021] (C)所述培养基B;
[0022] (D)由所述培养基B以及所述愈伤组织诱导培养基组成的成套培养基。
[0023] 如下（E)或（F)的应用也属于本发明的保护范围：
[0024] (E)所述（A)或所述⑶的培养基在促进安吉白茶愈伤组织增殖和/或提高安吉 白茶愈伤组织中茶多酚含量中的应用；
[0025] (F)所述（C)或所述⑶的培养基在促进安吉白茶愈伤组织增殖中的应用。
[0026] 在本发明中，所述MS固体培养基中的碳源为蔗糖；所述MS固体培养基中的凝胶剂 为琼脂。
[0027] 所述蔗糖在所述MS固体培养基中的终浓度为30g/L;所述琼脂在所述MS固体培 养基中的终浓度为7g/L。
[0028] 更加具体的，所述MS固体培养基的pH5. 8,溶剂为水，溶质及其浓度如下：
[0029] a?大量：NH4N031. 65g/L，KN031. 9g/L，MgS04 7H20 0? 37g/L，KH2P040. 17g/L， CaCl2 ? 2H20 0. 44g/L；
[0030] b?微量：KI0? 83mg/L，H3B036. 2mg/L，MnS04 4H20 22. 3mg/L，ZnS04 7H208. 6mg/L， Na2Mo04 2H20 0? 25mg/L，CuS04 5H20 0? 025mg/L，C〇C12.6H20 0? 025mg/L;
[0031] c.维生素：烟酸0? 5mg/L，盐酸吡咳素0? 5mg/L，盐酸硫胺素0?lmg/L，甘氨酸2mg/ L；
[0032] d?铁盐：FeS04 7H20 27. 8mg/L，Na2EDTA37. 3mg/L;
[0033] e?肌醇 0?lg/L;
[0034] f?鹿糖 3〇g/L;
[0035] g?琼脂 7g/L。
[0036] 以上各浓度为相应组分在所述MS固体培养基中的终浓度。
[0037] 本发明以安吉白茶的嫩叶为外植体，研究了其愈伤组织诱导、增殖和茶多酚合成 的最佳条件。研究结果表明：MS+TDZ1.0-2.0mg/mL为愈伤组织诱导的最佳培养基，诱导率 为86. 54% -90. 21% ;愈伤组织呈红色，质地疏松、生长旺盛。2, 4-D、NAA、6-BA不利于愈伤 组织的增殖，IAA、TDZ有利于其增殖。MS+TDZ0. 5-4. 0mg/L+IAA0. 5-4.Omg/L是愈伤组织增 殖的最佳培养基，鲜重增殖倍数最高可达16. 89倍，干重增殖倍数最高可达20. 75倍。培养 基中添加TDZ、IAA和苯丙氨酸有利于愈伤组织中茶多酚的合成与积累。当TDZ为0. 5mg/ L、IAA为1.Omg/L、苯丙氨酸为0. 5mg/L时，茶多酚的含量最高，达26. 72%。MS+TDZO. 5mg/ L+IAA1.Omg/L+苯丙氨酸0. 5mg/L是安吉白茶愈伤组织中茶多酚的合成与积累的适宜培养 基。本发明对于安吉白茶资源的开发利用及茶多酚的工业化生产具有重要意义。
【具体实施方式】
[0038] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0039] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0040] 下述实施例中所涉及的MS固体培养基的pH为5. 8,具体配方如表1所示：
[0041] 表1MS固体培养基组成（pH5. 8)
[0042]
[0043]
[0044] 实施例1、安吉白茶的愈伤组织的诱导
[0045] 一、外植体的选择与消毒处理
[0046] 安吉白茶于2013年5月采自贵州省德江县平原乡，且按照原产地栽培安吉白茶的 形态态特征标准进行了确认，实物与名称相符。取安吉白茶嫩叶，自来水冲洗lh，在超净工 作台上先用70% (体积分数）乙醇消毒30s，再用0.1% (质量分数）HgCU容液灭菌8min， 无菌水冲洗5次，待用。
[0047] 二、安吉白茶的愈伤组织的诱导
[0048] 在超净工作台内，将步骤一经消毒后的安吉白茶的叶片切成约0. 5X0. 5cm大小 的切块，分别接种到含有不同浓度的2, 4-D、NAA、6-BA、K