一种滇桂石斛组织培养繁育方法

文档序号:9383959阅读:373来源:国知局
一种滇桂石斛组织培养繁育方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物繁殖方法,特别是一种滇桂石斛组织培养繁育方法。
【背景技术】
[0002]漠桂石斛(Dendrobiumguangxiense S.J.Cheng et C.Ζ.Tang),为兰科石斛属多年生植物,国家二级保护植物。生于海拔约1200米的石灰山岩石上或树干上。产于中国广西、贵州西南和云南东南部。滇桂石斛的茎紫色而柔软,是加工紫皮楓斗的主要原料之一,具有较高的药用价值,同时滇桂石斛花唇瓣上有紫红色斑块,具有很高的观赏价值。
[0003]目前滇桂石斛已经有人工栽培,主要通过分株繁育或扦插方式繁殖,但所需时间很长,繁殖倍率低,生产上难以实现大面积栽培。虽然滇桂石斛也有种子,但种子不具胚乳,无发芽能力,只有在真菌共生下,才能促进种子萌发生长,且发芽率非常低,通过种子繁育也无法满足生产需要。

【发明内容】

[0004]本发明的目的是提供一种滇桂石斛组织培养繁育方法,能够有效快速地提高滇桂石斛种苗的繁殖速度和质量,实现滇桂石斛优质种苗的工厂化育苗,以满足生产上的需要。
[0005]本发明通过以下技术方案达到上述目的:一种滇桂石斛组织培养繁育方法,包括以下步骤:
[0006](I)外植体的选择与消毒:取滇桂石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体,剥去外层包叶后,依次用2% (v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1 % (v/v)升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水;
[0007](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(I)得到的外植体置于解剖镜下,剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织,接种到MS培养基中,在培养温度为23_27°C,光照强度15001ux,光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗,其中MS培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的PH值为5.8 ;
[0008](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中,在培养温度23-27°C,光照强度15001ux,光照时间为8_10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽,其中MS繁殖培养基中添加2.0-3.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、2.5-4.0mg/L的萘乙酸ΝΑΑ、0.1-1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8。
[0009]本发明的突出优点在于:
[0010](I)采用生物技术对滇桂石斛进行组织培养快速繁殖,通过滇桂石斛丛生芽的繁殖,能够在短时间内培育出大量适合栽培种植的滇桂石斛幼苗,保障滇桂石斛种苗的增殖系数和种苗质量,实现规模化生产,满足生产上的需要。
[0011](2)采用本发明所述的培养方法得到的滇桂石斛丛生芽增殖系数达到25-30倍,丛生芽健壮,接种到生根培养基后容易生根。
【具体实施方式】
[0012]下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0013]实施例1
[0014]本发明所述的滇桂石斛的组织培养快速繁殖方法的一个实例,包括以下步骤:
[0015](I)外植体的选择与消毒:取滇桂石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体,剥去外层包叶后,依次用2% (v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1 % (v/v)升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水;
[0016](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(I)得到的外植体置于解剖镜下,剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织,接种到MS培养基中,在培养温度为23_27°C,光照强度15001ux,光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗,其中MS培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的PH值为5.8 ;
[0017](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中,在培养温度23-27°C,光照强度15001ux,光照时间为8_10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽,其中MS繁殖培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、2.5mg/L的萘乙酸NAA、1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,丛生芽增殖系数为24.8。
[0018]实施例2
[0019]本发明所述的滇桂石斛的组织培养快速繁殖方法的另一个实例,包括以下步骤:
[0020](I)外植体的选择与消毒:取滇桂石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体,剥去外层包叶后,依次用2% (v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1 % (v/v)升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水;
[0021](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的外植体置于解剖镜下,剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织,接种到MS培养基中,在培养温度为23_27°C,光照强度15001ux,光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗,其中MS培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的PH值为5.8 ;
[0022](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中,在培养温度23-27°C,光照强度15001ux,光照时间为8_10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽,其中MS繁殖培养基添加含3.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、4.0mg/L的萘乙酸NAA、0.lmg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,丛生芽增殖系数为28.6。
[0023]实施例3
[0024]本发明所述的滇桂石斛的组织培养快速繁殖方法的再一个实例,包括以下步骤:
[0025](I)外植体的选择与消毒:取滇桂石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体,剥去外层包叶后,依次用2% (v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1 % (v/v)升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水;
[0026](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的外植体置于解剖镜下,剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织,接种到MS培养基中,在培养温度为23_27°C,光照强度15001ux,光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗,其中MS培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的PH值为5.8 ;
[0027](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中,在培养温度23-27°C,光照强度15001ux,光照时间为8_10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽,其中MS繁殖培养基中添加2.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、3.0mg/L的萘乙酸NAA、0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,丛生芽增殖系数为27.3。
[0028]实施例4
[0029]本发明所述的滇桂石斛的组织培养快速繁殖方法的又一个实例,包括以下步骤:
[0030](I)外植体的选择与消毒:取滇桂石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体,剥去外层包叶后,依次用2% (v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1 % (v/v)升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水;
[0031](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的外植体置于解剖镜下,剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织,接种到MS培养基中,在培养温度为23_27°C,光照强度15001ux,光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗,其中MS培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的PH值为5.8 ;
[0032](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中,在培养温度23-27°C,光照强度15001ux,光照时间为8_10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽,其中MS繁殖培养基中添加3.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6_BA、3.0mg/L的萘乙酸NAA、0.5mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,丛生芽增殖系数为30.2。
【主权项】
1.一种滇桂石斛组织培养繁育方法,其特征在于:该方法包括以下步骤: (1)外植体的选择与消毒:取滇桂石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体,剥去外层包叶后,依次用2% (v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1% (v/v)升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水; (2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(I)得到的外植体置于解剖镜下,剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织,接种到MS培养基中,在培养温度为23-27°C,光照强度15001ux,光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗,其中MS培养基中添加2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的PH值为5.8 ; (3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中,在培养温度23-27°C,光照强度15001ux,光照时间为8-10小时/天的条件下培养75天得到试管苗丛生芽,其中MS繁殖培养基中添加1.5-3.5mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、1.0-4.0mg/L的萘乙酸ΝΑΑ、0.1-1.0mg/L的激动素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8。
【专利摘要】一种滇桂石斛组织培养繁育方法,包括如下步骤:(1)取滇桂石斛健康植株新萌发的嫩芽作为外植体进行消毒;(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到无菌试管苗;(3)将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽。采用本发明所述的培养方法得到的滇桂石斛丛生芽增殖系数达到25-30倍,能够在短时间内提供成活率高的滇桂石斛优质种苗,有效解决滇桂石斛的规模化育苗问题。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105104197
【申请号】CN201510518070
【发明人】韦坤华, 李林轩, 梁莹, 黄丹娜, 缪剑华, 王晓峰, 韦莹, 王一诺
【申请人】广西壮族自治区药用植物园
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年8月21日
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