北苍术组织培养与快速繁殖方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物组培与种植技术领域，具体为一种北苍术组织培养与快速繁殖方 法。
【背景技术】
[0002] 苍术是常用的中药之一，它的需求量大，具有祛风散寒、燥湿健脾和明目的功效。 苍术有北苍术和南苍术(茅苍术)之分。北苍术AcAifleasis 办，为菊科多年生草 本植物，以其根茎入药。主要分布于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、河北、山西、陕西、甘肃、宁 夏、青海等省、自治区。在山西省中条山和太行山一带分布着北苍术的优良资源，属于濒危 植物。为了拯救这一濒危植物，保护种质资源，解决北苍术的种苗和品质复壮问题，为北苍 术药材生产提供优质原料，很多专家学者用组织培养的方法对苍术进行快速繁殖。但大都 集中在茅苍术的组织培养快速繁殖技术的研究，对北苍术的研究基本无人问津。
[0003] 在茅苍术研究方面，以巢建国、李文等为代表的学者，都沿用组织培养的常规方 法，获得无菌苗，培养丛生芽，丛生芽增殖，诱导生根，移栽定植。科研工作者需要分次更换 添加不同激素的培养基。
[0004] 1、每次每种培养基的配制和灭菌方面需要大量的工作，生产成本高且工作效率 低。
[0005] 2、每次更换培养时，由于需要在超净台上人工操作，即使很有经验的技术工作者 都会造成一定程度的污染和浪费，丛生芽的利用率低。
[0006] 3、在丛生芽增殖率方面，目前以巢建国为代表的科研工作者得出的800%为最高， 增殖率比较低。
[0007] 4、苍术主要利用部位为根，生根时添加诱导生根的激素对北苍术品质有所影响。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的在于提供专用于北苍术的组织培养快速繁殖方法，，改良和简化了 常规的组培方法，在北苍术的组织培养快速繁殖中，诱导丛生芽时加入赤霉素，使得繁殖率 提高了数倍，并且简化了生根的方式，无需添加诱导生根的激素就可自然生根，使得繁殖过 程简化，避免了激素添加对北苍术品质的影响。
[0009] 本发明是采用如下技术方案实现的： 一种北苍术组织培养与快速繁殖方法，包括如下步骤： (1 )、选取粒大饱满的种子，洗洁精水浸泡，清水洗净后浸泡于清水3_4h，再用酒精表面 消毒，然后用升汞消毒，无菌水冲洗4-5次，接种于含糖30g/L的1/2MS基本培养基上，培养 两周后，获得无菌苗； (2)、取胚轴在含糖30g/L的l/2MS+6-BA(6-苄氨基腺嘌呤）2mg/l+KT(激动素）lmg/1 +NAA(萘乙酸）0.5mg/l+GA(赤霉素）0.5mg/l的培养基上进行外植体培养，PH=6.0±0.5， 培养温度28°C-30°C，光照强度为2500Lx-2800Lx，光照时间为8小时/天；期间，观察每个 丛生芽的分枝情况； (3)、在超净台上，将诱导产生的丛芽分成单株，并将其中拔高分枝的单株用消毒的剪 刀以45度角切成带芽茎段，与剩余的丛生芽单株一起都转移到含糖30g/L的1/2MS培养基 中，每个半径3. 5cm的培养皿均匀分布4颗茎段或芽，PH=6. 0±0. 5,培养温度28°C-30°C， 光照强度为2500LX-2800Lx，光照时间为8小时/天，自然生根，长成完整植株； (4 )、植株3-5cm时，炼苗移栽。
[0010] 上述方法中，赤霉素的使用，丛生芽拔高、分枝，分枝培养。试管苗组织培养基配 置、温度、光照强弱以及培养时间均经过申请人多次试验后确定。
[0011] 本方法依据植物细胞的全能性，加入所需激素，调节植物细胞生理功能，并提供植 物细胞形成完整植株的最适环境条件。获得所需的植株。申请人在2012年一2015年，经 过多次试验，证实 1/2MS+6-BA2mg/l+KTlmg/1+NAA0.5mg/l+GA0.5mg/l的培养基配 制可以使北苍术的增殖系数提高到21. 3,比现有最先进的技术提高了 2. 6倍以上。本试验 采用正交设计优化了试验过程，试验数据如表1和表2。
[0012] 表1北苍术丛生芽增殖试验因素及水平 ^ Z I-1? A ：D~DA? D ：J\1 ?U：\jI\〇
[0013] 本方法摒弃了传统组织培养：获得无菌苗一诱导愈伤一诱导丛生芽一诱导生根的 繁琐步骤，只需无菌苗一丛生芽及拔高培养一生根培养。在假设试验规模相同的情况下，与 传统培养方法相比将更换三次培养基减少为两次，并且第二次的培养基不需要添加激素， 这样缩减了在超净台上转移试管苗的风险，避免了多次配制、灭菌培养的繁琐工作，不仅简 化了培养步骤，大大提高了增殖系数，而且降低了制苗成本。
[0014] 本发明方法具有如下优点： 1、选取最优外植体胚轴，解决了组织培养中外植体选择的问题。
[0015] 2、创新了培养过程，大大提高了丛生芽的增殖率。
[0016] 3、简化培养操作过程，生产成本低。
[0017] 4、生根时，不使用外源激素，降低了激素对北苍术品质的影响，优化北苍术品质。
[0018] 本发明设计合理，快速培育出北苍术，适合工业化应用，具有较好地市场推广价 值。
【具体实施方式】
[0019] 下面对本发明的具体实施例进行详细说明。
[0020] -种北苍术组织培养与快速繁殖方法，包括如下步骤： (1 )、选取粒大饱满的种子，洗洁精水浸泡lOmin，清水洗净后浸泡于清水3-4h左右，再 用75%酒精表面消毒30s，然后用0. 1%升汞(氯化汞）消毒lOmin，无菌水冲洗4-5次，接种 于1/2MS(含糖30g/L)基本培养基上，培养两周后，获得无菌苗。
[0021] (2)、在 1/2MS(含糖 30g/L)+6-BA2mg/l+KTlmg/1+NAA0? 5mg/l+GA0? 5mg/ 1培养基上，分别取根和胚轴为外植体培养，PH=6. 0±0. 5,培养温度28°C-30°C，光照强度 为2500Lx-2800Lx，光照时间为8小时/天，证实以胚轴为外植体更容易形成完整植株。其 中，以胚轴为外植体的培养可以生成丛生芽，观察每个丛生芽的分枝情况。
[0022] (3)、在超净台上，将诱导产生的丛芽分成单株，并将其中拔高分枝的单株用消 毒的剪刀以45度角切成带芽茎段，与剩余的丛生芽单株一起都转移到1/2MS(含糖30g/ L)培养基中，每个半径3. 5cm的培养皿均匀分布4颗茎段或芽，PH=6. 0±0. 5,培养温度 28°C-30°C，光照强度为2500LX-2800Lx，光照时间为8小时/天，自然生根，长成完整植株。
[0023] (4)、植株3-5cm时，炼苗移栽。
[0024] 以上详细描述了本发明的较佳具体实施，应当理解，本领域的普通技术无需创造 性劳动就可以根据本发明的构思做出诸多修改和变化。因此，凡本领域中技术人员依本发 明在现有技术基础上通过逻辑分析、推理或者根据有限的实验可以得到的技术方案，均应 该在由本权利要求书所确定的保护范围之中。
【主权项】
1. 一种北苍术组织培养与快速繁殖方法，其特征在于：包括如下步骤： (1 )、选取粒大饱满的种子，洗洁精水浸泡，清水洗净后浸泡于清水3-4h，再用酒精表面 消毒，然后用升汞消毒，无菌水冲洗4-5次，接种于含糖30g/L的1/2MS基本培养基上，培养 两周后，获得无菌苗； (2) 、取胚轴在含糖 30g/L 的 1/2MS+6-BA 2mg/l +KT lmg/1 +NAA 0.5mg/l +GA 0. 5mg/l的培养基上进行外植体培养，PH=6.0±0. 5,培养温度28°C -30°C，光照强度为 2500Lx-2800Lx，光照时间为8小时/天；期间，观察每个丛生芽的分枝情况； (3) 、在超净台上，将诱导产生的丛芽分成单株，并将其中拔高分枝的单株用消毒的剪 刀以45度角切成带芽茎段，与剩余的丛生芽单株一起都转移到含糖30g/L的1/2MS培养基 中，每个半径3. 5cm的培养皿均匀分布4颗茎段或芽，PH=6. 0±0. 5,培养温度28°C -30°C， 光照强度为2500LX-2800Lx，光照时间为8小时/天，自然生根，长成完整植株； (4 )、植株3-5cm时，炼苗移栽。
【专利摘要】本发明涉及植物组培与种植技术领域，具体为一种北苍术组织培养与快速繁殖方法，改良和简化了常规的组培方法，在北苍术的组织培养快速繁殖中，诱导丛生芽时加入赤霉素，使得繁殖率提高了数倍，并且简化了生根的方式，无需添加诱导生根的激素就可自然生根，使得繁殖过程简化，避免了激素添加对北苍术品质的影响。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105104211
【申请号】CN201510649019
【发明人】左静静, 刘少翔, 闫贵云, 王卉, 霍利光, 高红, 牛瑜琦, 安晓宁
【申请人】山西省农业科学院作物科学研究所
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年10月10日