白芨快繁和高效栽培方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物培养应用技术领域，特别涉及一种白芨组织培养方法。
【背景技术】
[0002]白发，学名Bletilla striata，又名连及草、甘根、白给、箬兰等，为兰科白发属多年生草本植物，主要分布在中国、日本以及缅甸北部。花有紫红、白、蓝、黄和粉等色，可盆栽室内观赏。具有收敛止血、消肿生肌等功效，广泛应用与医药、日化产品等领域，近年来其应用不断扩展，需求量不断增加，但由于种子发育不完全，自然环境下难以萌发，生产上多靠块茎繁殖，然而繁殖系数有限，投入大，但产量低，难以满足市场需求。
【发明内容】
[0003]本发明提供一种白芨组织培养方法，以解决上述问题。
[0004]本发明实施例提供了一种白芨组织培养方法，包括步骤:
[0005]步骤A，将选取的白芨蒴果用水冲洗后进行灭菌处理；
[0006]步骤B，在无菌条件下将所述白芨蒴果中的种子均匀抖落在第一培养基上，进行暗培养4.5-5.5d，再移至培养室在预定的温度和光照强度条件下进行培养，至长成1.8-2.2cm高的白芨丛生苗；
[0007]步骤C，将所述白芨丛生苗接种于第二培养基中，在预定的温度和光照强度下进行培养，直至小苗基部有原球茎出现；
[0008]步骤D，将带原球茎的小苗揭开瓶盖，在室内自然光下炼苗6-8天，提高小苗适应性；
[0009]步骤E，将所述步骤D中得到的带原球茎的小苗取出，洗净根部附着的培养基，用800-1000倍多菌灵浸泡根部0.5-lh，晾干后移栽至育苗基质中，于温室遮阴保湿通风处培养，温度控制在22.5-23.5°C，直至小苗存活，长成健壮白芨植株。
[0010]其中，所述步骤A中进行灭菌处理包括步骤:
[0011]在超净工作台上采用75%乙醇消毒28-32s，0.1%升汞消毒14_16min，再用无菌水冲洗3-5次，置于灭菌的滤纸上吸干水分，备用。
[0012]其中，所述步骤在超净工作台上采用75%乙醇消毒28_32s，0.1%升汞消毒14-16min，再用无菌水冲洗3_5次包括:
[0013]在超净工作台上采用75%乙醇消毒30s，0.1 %升汞消毒15min，再用无菌水冲洗4次。
[0014]其中，所述步骤B包括步骤:
[0015]在无菌条件下，用消过毒的手术刀切开所述白芨蒴果顶部，用无菌镊子将种子均匀抖落在第一培养基上，立即盖上瓶盖，做好标记后，放在培养箱进行暗培养5d，再移至培养室，培养温度23-27°C，光照度2000-25001x，光照时长11.5-12.5h/d，培养时间为29-31d，长成2cm高白芨丛生苗。
[0016]其中，所述步骤C包括步骤:
[0017]将所述白芨丛生苗接种于第二培养基中，培养温度23_27°C，光照度2000-25001x，光照时长11.5-12.5h/d，培养时间为89-91d，至小苗基部有直径为0.5mm的原球茎出现。优选地，此步骤中接种于第二培养基后的光照时长为12h/d，培养时间为90d。
[0018]其中，所述步骤A之前还包括步骤:
[0019]预先配置第一培养基，所述第一培养基包括l/2MS、30g/L蔗糖、7g/L琼脂、lg/L活性炭，ph为5.8。
[0020]其中，所述步骤A之前还包括步骤:
[0021]预先配置第二培养基，所述第二培养基包括MS、(X 75mg/L ΝΑΑ、(λ 5mg/L6_BA、25g/L 鹿糖、200g/L 土豆、6.5g/L 琼脂、5g/L 活性炭，ph 为 5.8。
[0022]其中，所述步骤E之前包括步骤:
[0023]配置育苗基质，所述育苗基质包括腐殖土、珍珠岩和河沙。
[0024]其中，所述育苗基质中的成分按体积份数计为腐殖土:珍珠岩:河沙=2:1:1。
[0025]本发明实施例提供了一种白芨组织培养方法，以性状优良的白芨种子为外植体，在特定的温度光照度条件下进行消毒处理、接种诱导萌发、继代培养，长成完整的白芨植株小苗，最后将完整小苗移栽至育苗基质中，培养成白芨种苗，整个培养过程标准可控，实现了白芨种苗的工厂化标准生产，繁殖速度快，一年四季均可繁殖生产种苗，不受地域和气候影响，相比传统的野生采挖和人工块茎栽培，生产过程可控，出产率高，产量更大，解决了现有技术中白芨培养产出率低难以满足市场需要的技术问题。
【附图说明】
[0026]图1为本发明提供的白芨组织培养方法的一个实施例的流程图。
【具体实施方式】
[0027]本发明实施例提供了一种白芨组织培养方法。参见图1所示，该方法包括步骤:
[0028]步骤S110，将选取的白芨蒴果用水冲洗后进行灭菌处理。
[0029]白芨蒴果应选用形状优良的白芨植株的成熟蒴果。
[0030]优选地，灭菌处理采用如下方式:在超净工作台上采用75%乙醇消毒28-32S，
0.1 %升汞消毒14-16min，再用无菌水冲洗3_5次，置于灭菌的滤纸上吸干水分，备用。
[0031]其中，本发明中除非特别说明，s为时间计量单位秒，min为时间计量单位分钟，d为时间计量单位天，h为时间计量单位小时，mm为长度计量单位毫米，cm为长度计量单位厘米，Ix为光照强度单位勒克斯。
[0032]步骤S111，在无菌条件下将所述白芨蒴果中的种子均匀抖落在第一培养基上，进行暗培养4.5-5.5d，再移至培养室在预定的温度和光照强度条件下进行培养，至长成
1.8-2.2cm高的白芨丛生苗。
[0033]步骤S112，将白芨丛生苗接种于第二培养基中，在预定的温度和光照强度下进行培养，直至小苗基部有原球茎出现。
[0034]在该步骤中，预定的温度和光照强度可以为:培养温度23-27 °C，光照度2000-25001x ;而光照时长可以为11.5-12.5h/d，培养时间为29_31d。
[0035]步骤SI 13，将带原球茎的小苗揭开瓶盖，在室内自然光下炼苗6-8天，提高小苗适应性。
[0036]步骤SI 14，将所述步骤SI 13中得到的带原球茎的小苗取出，洗净根部附着的培养基，用800-1000倍多菌灵浸泡根部0.5-lh,晾干后移栽至育苗基质中，于温室遮阴保湿通风处培养，温度控制在22.5-23.5°C，直至小苗存活，长成健壮白芨植株。
[0037]育苗基质，按体积份数计，为腐殖土:珍珠岩:河砂=2:1:1。
[0038]其中，第一培养基为种子萌发培养基，第二培养基为继代培养基。优选地，作为一种可实施方式，第一培养基包括:l/2MS+30g/L蔗糖+7g/L琼脂+lg/L活性炭，第一培养基Ph值为5.8。
[0039]第二培养基包括:MS+0.75mg/L NAA+0.5mg/L 6_BA+25g/L 蔗糖 +200g/L 土豆+6.5g/L琼脂+5g/L活性炭，第二培养基ph值为5.8。
[0040]其中，MS为常规基本培养基Murashige&Skoogl962，即 Murashige 和 SkOog 于 1962年为烟草细胞培养设计的常规培养基。将常规基本培养基MS中大量元素浓度减半即得到1/2MS ；6-BA为6-苄基腺嘌呤，NAA为萘乙酸。
[0041]下面列举一个本发明提供的白芨组织培养方法的一个较佳的实施例，其步骤如下:
[0042]I)白芨种子蒴果的选取与灭菌:选取成熟的白芨蒴果，将白芨蒴果用水冲洗干净，在超净工作台上采用75%乙醇消毒30s，0.1 %升萊消毒15min，再用无菌水冲洗4次，置