一种可提高增殖率的番茄试管苗快速繁育方法
【技术领域】
[0001] 本发明具体设及一种可提高增殖率的番茄试管苗快速繁育方法。
【背景技术】
[0002] 番茄是茄科番茄属番茄种的一年生草本植物，是主要的栽培蔬菜。其具有品种多 样，适应范围广、产量高、营养丰富、生长期长等特点，故其栽培面积不断扩大。随着栽培面 积的不断增加，番茄的品种在不断地更新换代，新品种在生产上不断应用。目前，番茄栽培 多W实生苗为主，容易受到干旱、寒冷和多种病虫害等的危害，导致良种的抗性降低而影响 产量和品质；同时番茄种子几乎是F1代杂种，需要每年制种或从国外进口种子，种子成本 高居不下，增加生产成本。利用组织培养技术进行快速繁殖对番茄的种苗繁育、转基因操 作、杂交育种、种质资源保存等问题均有较大的意义，可W降低生产成本，保持其优良性状， 在短期内向市场提供大量种苗，具有很高的经济价值。然而，在番茄组织培养快繁中，其试 管苗增殖时顶端优势很强，很少产生丛生芽或从节上长芽，通常W茎段进行扩繁，W致繁殖 系数较低，不能达到生产上快繁的目的，为此，在前期培养的基础上，对其培养技术和条件 进行优化，W增加番茄试管苗的有效节数，筛选出合适的培养基配方，从而提高其增殖系 数，W满足生产的需要。
【发明内容】
[0003] 本发明要解决的技术问题，在于提供一种可提高增殖率的番茄试管苗快速繁育方 法。
[0004] 本发明是运样实现的：一种可提高增殖率的番茄试管苗快速繁育方法，包括W下 步骤： 阳〇化](1)外植体处理：取培养25~30d且生长健壮的番茄试管芽苗，切除叶片并留 0. 5cm长的叶柄后，45°角斜切取0. 5~1. 0cm的带节茎段作为番茄试管苗继代增殖的外植 体；
[0006] 似继代增殖培养：将外植体45°角斜插接种于继代增殖培养基中，并于溫度 25±rc，光照强度为3000~50001X的L邸灯，每天光照12h的条件下培养28d，得到增殖 后新的番茄试管芽苗。
[0007] 进一步地，所述继代增殖培养基包括下述成分：MS培养基、6-节氨基腺嚷岭 0. 0Img/l、吗|噪下酸0. 5mg/l、薦糖30g/L和琼脂粉6g/L;其中，各成分的浓度均W继代增殖 培养基总溶液的体积为基准。
[0008] 本发明的优点在于：不仅能够快速获得大量番茄试管苗，且所获得的番茄试管苗 具有生长力强及高质量的优点，从而为番茄生物技术研究和工厂化规模化番茄种苗快速繁 育等奠定了良好的基础。
【具体实施方式】
[0009] 一、一种可提高增殖率的番茄试管苗快速繁育方法，包括W下步骤：
[0010] (1)外植体处理：于无菌条件下，取培养25~30d且生长健壮的番茄试管芽苗于 无菌滤纸上，切除叶片并留0. 5cm长的叶柄后，45°角斜切取0. 5~1. 0cm的带节茎段作为 番茄试管苗继代增殖的外植体；
[0011] (2)继代增殖培养：将外植体45°角斜插且蔽芽朝上接种于继代增殖培养基中， 并于溫度25 +rc，光照强度为3000~50001x的L邸灯，每天光照12h的条件下培养28d， 得到增殖后新的番茄试管芽苗。
[0012] 所述继代增殖培养基包括下述成分：MS培养基、6-节氨基腺嚷岭0. 01 @A)mg/l、 吗I噪下酸0. 5mg/l、薦糖30g/L和琼脂粉6g/L;其中，各成分的浓度均W继代增殖培养基总 溶液的体积为基准。 阳01引所述MS培养基具体包括W下各成分：硝酸锭（NH4NO3) 1650mg/l、硝酸钟 (KN03) 1900mg/L、氯化巧（CaClz? 2&0) 440mg/L、硫酸儀（M拆〇4? 7&0) 370mg/L、憐酸二 氨钟（KH2PO4) 170mg/L、硫酸儘（MnS〇4? &0)22. 3mg/L、硫酸锋狂nS〇4? 7&0)8.6mg/L、氯 化钻（C0CI2? 6&0)0. 025mg/L、硫酸铜（CuS〇4? 5&0)0. 02mg/L、棚酸化B03)6. 2、钢酸钢 (NazMcA? 2&0) 0. 25mg/l、舰化钟化1) 0. 83111邑/1、硫酸亚铁（FeS〇4? 7&0) 28. 7mg/l、乙二胺 四乙酸二钢（Naz-EDTA) 37. 3mg/l、烟酸 0. 5mg/l、维生素Be〇. 5mg/l、维生素Bi〇.Img/l、肌醇 lOOmg/l、甘氨酸 2mg/L。
[0014] 二、番茄试管苗接种技术优化
[0015] 在番茄试管苗继代增殖试验过程中，发现带有叶片的外植体，经常会因为叶片的 营养竞争而使接种茎段的蔽芽无法萌发，会大大降低萌发；如果将叶柄全部去除，多数的蔽 芽的芽点会变黑，也会极大的降低萌发率，通过试验表明，当带节茎段的叶柄保留0. 5cm左 右时，在合适的培养基中，绝大多数的蔽芽会正常萌发。
[0016] 在番茄试管苗继代增殖试验过程中，发现横切和斜切对试管苗后期生长的影响比 较大。横切时，试管苗后期会表现较为瘦弱，而45°角斜切，后期试管苗生长会比较强壮，运 可能跟外植体与培养基的接触面有关系，接触面大，容易吸收更多的养分。研究还发现，接 种采用45°角斜插且蔽芽朝上的方式，其试管苗的生长情况明显优于垂直接种的效果，运 可能是斜插接种能充分保证蔽芽顶端始终朝上，并且斜插与培养基的接触面大，增加养分 的吸收。
[0017]S、番茄增殖培养过程中培养基中吗I噪下酸（IBA)浓度优化 阳01引 1、附加不同IBA浓度的培养基
[0019] 本试验对IBA的使用浓度进行优化，将番茄试管苗茎段接种到附加不同IBA浓度 的继代增殖培养基即J1~J6培养基中，培养28d后观察其芽苗生长情况，记录各观察项目 的数据。培养基配方如下：
[0020] J1：MS+BA0.Img/L+IBA0.Olmg/L
[0021] J2 :MS+BA 0. Img/L+IBA 0. 05mg/L
[0022] J3 :MS+BA 0. Img/L+IBA 0.Img/L
[0023] J4 ：MS+BA 0. Img/L+IBA 0. 2mg/L
[0024]J5 :MS+BA 0. Img/L+IBA 0. 5mg/L
[00巧]J6 :MS+BA0.Img/L+IBA1.Omg/L 阳0%] W上培养基均加入薦糖30g/l、琼脂粉6g/L，pH调整为5.8左右。
[0027] 2、不同IBA浓度对番茄茎段蔽芽萌发的影响
[002引将上述番茄外植体接种到上述继代增殖培养基J1~J6中，培养28d后，从番茄试 管苗茎段蔽芽萌发率看（见表1)，在IBA浓度为0. 01~0. 5mg/L即继代增殖培养基J1~巧 时，随着IBA浓度的增加，番茄茎段蔽芽的萌发率的变化趋势为先升高后降低再升高后降 低，两个萌发率高点分别为98.89%和82.22%，对应的184浓度分别为0.05111邑/1和0.5111邑/ L(即继代增殖培养基J2和巧），它们间存在一定的差异；当IBA浓度升高到l.Omg/L(即继 代增殖培养基J6)时，番茄茎段蔽芽萌发率与IBA浓度0. 5mg/L时极显著的下降。运说明 IBA浓度对番茄蔽芽的萌发有较大的影响，其中WIBA浓度为0. 05mg/L和0. 5mg/L时，萌发 率较高。
[0029] 表1番茄试管苗茎段蔽芽萌发情况
[0030]
[0031] 注：表中不同字母表示邓肯氏新复极差测验差异显著性，其中大写字母为差异极 显著（P<0. 01)，小写字母为差异显著（P<0. 05)。下同。
[00巧 3、不同IBA浓度对番茄试管苗株高、有效节数和叶片数的影响
[0033] 将上文所述的番茄外植体接种到上述继代增殖培养基J1~J6培养基中，培养28d 后，从番茄试管苗植株株高、有效节数和叶片数看（见表2)。从表2可W看出，在IBA浓度 在0. 01~1.Omg/L时，番茄试管苗的株高呈先降低后升高再迅速降低的趋势，平均株高最 高为6.21畑1，此时IBA浓度为0. 5mg/L。
[0034]由于番茄试管苗顶端优势明显，丛芽的发生率低，增殖主要靠节段来实现，因此本 试验对番茄试管苗的有效节数和叶片数进行了统计分析。从番茄试管苗植株有效节数看， 在IBA浓度为0. 01~1.Omg/L时，番茄试管苗有效节数呈先减少后增加再减少的趋势，节 数最多时IBA的使用浓度是0. 5mg/l，平均节数为3. 79个。
[0035] 从表2可W看出，随IBA浓度的升高，番茄试管苗叶片数的变化与节数的变化是一 致的，呈先减少后增加再减少的趋势，平均叶片数最多为5. 92片，所对应的IBA浓度也是 0. 5mg/L。
[0036] 表2番茄试管苗株高、有效节数和叶片数的变化情况
[0037]
[0038] 4、不同IBA浓度对番茄试管苗基部愈伤组织形成的影响
[0039] 在番茄试管苗培养过程中，其基部常会形成愈伤组织，基部愈伤组织会与试管苗 竞争养分而影响番茄试管苗的正常生长，同时试管苗基部长出愈伤组织后，其根也大部分 从愈伤组织中长出，会影响试管苗的成活率。愈伤组织的产生和大小与生长素的使用浓度 密切相关，因此，在进行IBA浓度试验中，对番茄试管苗基部愈伤组织的情况进行观察，W 确定IBA的最佳使用浓度。在记录番茄愈伤组织发生情况中，采用了两个指标，即试管苗基 部愈伤组织发生率和愈伤组织指数（根据愈伤组织的大小，少许愈伤组织记为" + "，较小愈 伤组织记为"++"，中度大小记为"+++"，大团记为"++++"，W此类推）。番茄试管苗基部愈 伤组织发生情况见表3,从表3可W看出，番茄试管苗基部愈伤组织发生率的变化表现为先 升高后降低再升高后降低的"M"形趋势