一种植物复合免疫制品生产工艺的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于一种植物复合免疫制品的生产工艺，具体地说是一种具有全面提高植物免疫功能抑制植物病害发生的复合免疫制品的生产工艺。
【背景技术】
[0002]植物和人以及动物一样，其本身通过应激反应，对疾病具有免疫功能。为适应当前保护生态环境的需要，进而保护人类身体健康，一些国家和地区开始采取化学诱抗的方法来增强植物的免疫功能以达到植物防病治病的目的，但效果非但不明显，而且仍然存在着化学污染的问题。也有一些国家在进行植物疫苗研究，并开始进行试验性应用，但这些植物疫苗一般都是单独疫苗，只对一种病害有一定的防治和治疗作用，且采取的是传统动物免疫制剂的制取方法进行制取的，一次制取的数量有限，成本较高，不仅不能从根本上解决农药污染问题，而且因制取方法的限制，无法大量满足市场的需求。
【发明内容】
[0003]本发明的目的，在于提供一种快速高效且能工厂化大规模生产的植物复合免疫制品生广工艺O
[0004]本发明采取以下技术方案，一种植物复合免疫制品生产工艺，步骤如下:
第一步，收集病毒源，预先在田间采集该种发病植物上的病菌或病毒，进行分离提纯； 第二步，建立植物病专用毒园，接种上述病菌或病毒到专用植物病毒园中，让该种植物大量感染病菌和病毒；
第三步，在病毒园植物发病进入高发期，采收病变组织，用100— 200目普通粉碎机进行粉碎，送入发酵池，搅拌均匀，进行发酵减毒。在发酵过程中，发酵温度要达到36°C以上，时间为5— 7天。
[0005]第四步，待发酵完成后，送入150— 250目分离机加入等量的水进行分离；为提高利用率，分离后的残渣继续加入同等量的水继续搅拌，进行第二次分离；把两次分离出来的含有病菌或病毒的混合液体通过中空纤维系统浓缩到原浓度的三分之一后装入商品瓶中，即成为植物复合免疫制品。
[0006]进一步，装瓶后的病毒疫苗可进行二次紫外线灭毒，制成植物复合免疫制品。
[0007]进一步，第一步中的提纯方法为:
采集的病毒源组织在捣碎机捣碎，加入缓冲液(I: 2W/V)中，再加入0.0lmol铜试剂和0.5%巯基乙醇，匀浆3-5分钟；再加冷却氯仿(I: 1W/V)，变速研磨I分钟；初步离心，4°C静置15分钟，留上层水相，得初提液；
初提液中加4%聚乙二醇和0.25mol氯化钠，搅拌I小时；离心10000g，4°C温度下30分钟，留沉淀；用lml/lOOml缓冲液缓冲液再悬浮沉淀，搅拌2小时；离心3000g，4°C静置10分钟，留上清液；再离心10000g，4°C静置30分钟，留沉淀；再用浓度为lml/lOOml缓冲液悬浮，制成再提液； 最后离心3000g，4°C静置10分钟，留上清液，即为提纯后的病毒悬浮液，4°C保存。
[0008]本发明适合果树、蔬菜、粮食作物、林木、花卉等所有植物品种的复合免疫制品的生产。
[0009]本发明尤其适用于葡萄中的白腐病、黑痘病、霜霉病、或炭疽病的复合免疫制品生产。
[0010]本发明，生产工艺简单，生产成本较低，不仅可以制取多种植物的免疫复合制剂，而且可以工业化、规模化生产，生产量大，可以快速满足市场的需求，由于该复合免疫制品含有大量的减毒或灭度病菌病毒和大量的植物血清，不仅可以增强植物的免疫功能，而且对发病植物具有一定的治疗作用，对改善生态环境、保障农产品的质量安全和保护人类健康具有非常重要的作用。
【具体实施方式】
[0011]实施例1
以制作葡萄复合免疫制品为例
第一步，采集病毒源，采集葡萄上的发病病菌，白腐病、黑痘病、霜霉病或炭疽病，用上述技术方案所述的病毒提纯方法进行适当的分离提纯，得到一种复合性病毒源。采集的病毒源组织在捣碎机捣碎，加入缓冲液(I: 2W/V)中，再加入0.0lmol铜试剂和0.5%巯基乙醇，匀浆3-5分钟；再加冷却氯仿(I: 1W/V)，变速研磨I分钟；初步离心，4°C静置15分钟，留上层水相，得初提液；初提液中加4%聚乙二醇和0.25mol氯化钠，搅拌I小时；离心10000g，4°C温度下30分钟，留沉淀；用lml/100ml缓冲液缓冲液再悬浮沉淀，搅拌2小时；离心3000g，4°C静置10分钟，留上清液；再离心10000g，4°C静置30分钟，留沉淀；再用浓度为lml/lOOml缓冲液悬浮，制成再提液；最后离心3000g，4°C静置10分钟，留上清液，即为提纯后的病毒悬浮液，4 V保存。
[0012]第二步，进行病毒源扩繁，建立专供繁殖病菌、病毒接种使用的植物病毒园，在适合病菌、病毒生长的季节，把采集到的病毒悬浮液，在定向的同种植物(如果树中的葡萄)上通过蚜虫传播、摩擦、嫁接、或人为制造伤口喷雾等方法进行接种，并通过大棚设施增温和灌水增加湿度的办法，创造适宜发病的生长环境，让该定向植物大量感染病菌、病毒。
[0013]第三步，采收发病组织进行发酵减毒，在发病达到高峰后，采收该定向植物的病变组织，用100— 200目普通粉碎机进行粉碎，送入专用发酵池，搅拌均匀，进行发酵减毒。在发酵过程中，发酵温度要达到36°C以上，时间为5— 7天。
[0014]第四步，分离提纯制成商品，发酵完成后，送入150— 250目分离机加入等量的水进行分离。为提高利用率，分离后的残渣继续加入同等量的水继续搅拌，进行第二次分离。把两次分离出来的含有病菌、病毒的混合液体通过中空纤维系统浓缩到原浓度的三分之一后装入商品瓶中，即成为植物复合免疫制品。
[0015]在实施列中，也可把两次分离出来的病菌或病毒混合液体通过浓缩后装入商品瓶中，送进紫外线室用30— 40瓦的紫外线灯进行照射，照射时间一般为30-40分钟。经紫外线照射后的病菌、病毒混合液体通过浓缩后(浓缩比例同上)装入商品瓶中即成为免疫制品O
[0016]在实施列中，还可以把两次分离出来的病菌、病毒混合液体送入高压锅内进行高温杀毒。杀毒温度为100°C，时间为30分钟。经高温杀毒后的病菌、病毒混合液体通过浓缩后(浓缩比例同上)装入商品瓶中即成为免疫制品。
[0017]在实施列中，本生产工艺除上述所举葡萄外，适合果树、蔬菜、粮食作物、林木、花卉等所有植物品种的复合免疫制品的生产，其生产工艺、生产流程、生产方法和上述相同。
[0018]在实际生产运用中，拌种用灭毒免疫制品较好，一般施用浓度为商品免疫制品的50分之一，即1:50的比例；木本植物用原液，采取对树根或嫩梢接种的方式进行；草本植物采取在病毒适宜发生期前进行喷洒，施用浓度为免疫制品600— 700分之一，即1:600—700。
【主权项】
1.一种植物复合免疫制品生产工艺，其特征在于，步骤如下: 第一步，收集病毒源，预先在田间采集该种发病植物上的病菌或病毒，进行分离提纯； 第二步，建立植物病专用毒园，接种上述病菌或病毒到专用植物病毒园中，让该种植物大量感染病菌和病毒； 第三步，在病毒园植物发病进入高发期，采收病变组织，用100— 200目普通粉碎机进行粉碎，送入发酵池，搅拌均匀，进行发酵减毒；在发酵过程中，发酵温度要达到36°C以上，时间为5—7天； 第四步，待发酵完成后，送入150— 250目分离机加入等量的水进行分离；为提高利用率，分离后的残渣继续加入同等量的水继续搅拌，进行第二次分离；把两次分离出来的含有病菌或病毒的混合液体通过中空纤维系统浓缩到原浓度的三分之一后装入商品瓶中，即成为植物复合免疫制品。2.如权利要求1所述的植物复合免疫制品生产工艺，其特征在于，装瓶后的病毒疫苗可进行二次紫外线灭毒，制成植物复合免疫制品。3.如权利要求1所述的植物复合免疫制品生产工艺，其特征在于，第一步中的提纯方法为: 采集的病毒源组织在捣碎机捣碎，加入缓冲液(I: 2W/V)中，再加入0.0lmol铜试剂和0.5%巯基乙醇，匀浆3-5分钟；再加冷却氯仿(I: 1W/V)，变速研磨I分钟；初步离心，4°C静置15分钟，留上层水相，得初提液； 初提液中加4%聚乙二醇和0.25mol氯化钠，搅拌I小时；离心10000g，4°C温度下30分钟，留沉淀；用lml/lOOml缓冲液缓冲液再悬浮沉淀，搅拌2小时；离心3000g，4°C静置10分钟，留上清液；再离心10000g，4°C静置30分钟，留沉淀；再用浓度为lml/lOOml缓冲液悬浮，制成再提液； 最后离心3000g，4°C静置10分钟，留上清液，即为提纯后的病毒悬浮液，4°C保存。4.如权利要求1-3所述的植物复合免疫制品生产工艺，其特征在于，适合果树、蔬菜、粮食作物、林木、花卉等所有植物品种的复合免疫制品的生产。5.如权利要求1-3所述的植物复合免疫制品生产工艺，其特征在于，适用于葡萄中的白腐病、黑痘病、霜霉病、或炭疽病的复合免疫制品生产。
【专利摘要】一种植物复合免疫制品生产工艺，首先采取植物病毒源，通过人工接种到专用生产植株上，然后采集发病植物组织粉碎后进行发酵处理，再进行分离，经二次减毒或灭毒后制成植物免疫制剂成品。本发明，可以进行工厂化大规模生产，具有成本低，产品功能强、生产快的特点。
【IPC分类】A01P21/00, C12N7/08, C12N7/00, A01N63/02, A01P3/00
【公开号】CN105145637
【申请号】CN201510439088
【发明人】李素影
【申请人】李素影
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年7月24日