诺丽果提取物及其在制备防治植物炭疽病药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属植物应用领域，设及一种植物活性提取物及其应用，具体是一种诺丽果 提取物及其在制备防治植物炭痘病药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 植物炭痘病是由病原菌中的一类真菌，即黑盘抱目中的炭痘属 (Colletotrichum)真菌的有性世代所引起的病害的统称。该病主要危害叶片和果实，也 可危害枝梢，引起叶斑、落叶、果实腐烂和枝梢枯死。该病的主要特点是病部易产生黑色小 点，往往呈轮纹状排雷，潮湿条件下溢出粉红色黏抱子团。目前防治植物炭痘病的防治方法 主要是化学防治，虽然防治效果较好，但化学防治需要使用大量的化学品，容易引起环境污 染。
[0003] 诺丽果（Morindacitri化lia)又称为萝梨、四季果或印桑權（Indianmu化erry)， 是一种草本植物，原产于亚洲、澳大利亚及一些太平洋岛蜗，其果被当地人称作"神奇果"， 现引种于我国海南省。诺丽果可用来治疗多种疾病，如糖尿病、高血压、屯、脏不适、疼痛、精 神压抑及消化不良等。
[0004] 诺丽果提取物具有抗氧化、抗炎、增强记忆力、屯、肌保护、肝细胞福射损伤保护作 用、抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的活性，对真菌白色念珠菌也有抑制活性。如研究发现 诺丽果提取物能在幽口螺杆菌侵染过程中能下调炎症因子化gA，比-8,C0X-2和iNOS的表 达而具有抗炎症特性化uang，etal.，2014);诺丽果乙醇提取物W及氯仿和乙酸乙醋活性 部位能显著的增强东赏窘碱诱导的记忆缺失模型鼠的记忆力和脑血流量，并减弱氧化应激 压力和降低乙酷胆碱醋酶活性（Pachau;ri,etal.2012)。Murali化aran等报道诺丽果的 乙酷已醋提取物能显著的增加由AP25-35诱导的认知缺陷型鼠的短期记忆和长期记忆功 能，降低鼠脑中的乙酷胆碱醋酶活性，恢复AP诱导降低的超氧岐化酶，谷脫甘肤还原酶， 谷脫甘肤过氧化物酶、抗坏血酸水平（Murali化aran,etal. , 2010)。此外，诺丽果乙醇提取 物还能抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的活性。经检索，诺丽果提取物在防治植物炭痘病 上的应用尚无报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种诺丽果提取物及其在制备防治植物炭痘病药物中的应 用。
[0006] 本发明所述的诺丽果提取物是将新鲜成熟的诺丽果棒汁后经过滤、离屯、，得到的 上清液为诺丽果汁，诺丽果汁经冷冻干燥成粉末状，用乙醇超声波浸提，浸提液进行抽滤， 滤液浓缩至浸膏状得到诺丽果提取物。
[0007] 一种诺丽果极性部位提取物，是取上述诺丽果提取物加入蒸馈水制成悬浮液，用 与悬浮液等体积的石油酸或乙酸乙醋萃取，萃取相进行浓缩得到诺丽果石油酸部位提取物 或诺丽果乙酸乙醋部位提取物。
[0008] 本发明还包括上述诺丽果提取物、诺丽果石油酸部位提取物或诺丽果乙酸乙醋部 位提取物在制备防治植物炭痘病药物中的应用。发明人在抑菌试验基础上，发现上述提取 物在防治植物炭痘病上具有良好的抑菌效果，可W用来制备防治植物炭痘病药物。
[0009] 所述防治植物炭痘病药物是将诺丽果提取物、诺丽果石油酸部位提取物或诺丽果 乙酸乙醋部位提取物与常规辅料配合，采用现有工艺制得的临床上允许的制剂。
[0010] 本发明所提供的诺丽果提取物在防治植物炭痘病上具有良好的药效，可W用来开 发防治植物炭痘病药物，避免化学合成药物产生的3R问题：抗性（resistance)、再增猎獄 (resurgence)和残留（resi化e)。为植物炭痘病的防治提供一条有效途径，其制备方法简 单，成本低。
【具体实施方式】
[0011] 下面结合实施例，对本发明的【具体实施方式】作进一步详细描述。W下实施例用于 说明本发明，但不用来限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通 常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。 阳〇1引实施例一
[0013] 将新鲜成熟的诺丽果棒汁后用4层纱布过滤，W4000r/min离屯、20min，上清液为 诺丽果汁。诺丽果汁经冷冻干燥机冻干成粉末状，用95 %乙醇超声波（超声频率40曲Z，溫 度30°C，时间20min)浸提3次，合并浸提液进行抽滤，滤液经减压旋转蒸发仪（水浴溫度 45°C)浓缩成浸膏得到诺丽果乙醇提取物。
[0014] 实施例二
[0015]将新鲜成熟的诺丽果棒汁后用4层纱布过滤，WSOOOr/min离屯、15min，上清液为 诺丽果汁。诺丽果汁经冷冻干燥机冻干成粉末状，用95%乙醇超声波（超声频率40曲Z，溫 度32°C，时间30min)浸提3次，合并浸提液进行抽滤，滤液经减压旋转蒸发仪（水浴溫度 45°C)浓缩成浸膏得到诺丽果乙醇提取物。加入诺丽果乙醇提取物2倍体积的蒸馈水制成 悬浮液，用悬浮液等体积的石油酸（沸程60-90°C)萃取，萃取相经减压旋转蒸发仪浓缩得 到诺丽果石油酸部位提取物。 W16] 实施例S
[0017] 将新鲜成熟的诺丽果棒汁后用4层纱布过滤，W5000r/min离屯、lOmin，上清液为 诺丽果汁。诺丽果汁经冷冻干燥机冻干成粉末状，用95 %乙醇超声波（超声频率40曲Z，溫 度34°C，时间40min)浸提3次，合并浸提液进行抽滤，滤液经减压旋转蒸发仪（水浴溫度 45°C)浓缩成浸膏得到诺丽果乙醇提取物。加入诺丽果乙醇提取物2倍体积的蒸馈水制成 悬浮液，用悬浮液等体积的乙酸乙醋萃取，萃取相经减压旋转蒸发仪浓缩得到诺丽果乙酸 乙醋部位提取物。 阳〇1引实施例四
[0019] 将新鲜成熟的诺丽果棒汁后用4层纱布过滤，W5000r/min离屯、lOmin，上清液为 诺丽果汁。诺丽果汁经冷冻干燥机冻干成粉末状，用95%乙醇超声波（超声频率40曲Z，溫 度36°C，时间50min)浸提3次，合并浸提液进行抽滤，滤液经减压旋转蒸发仪（水浴溫度 45°C)浓缩成浸膏得到诺丽果乙醇提取物。加入诺丽果乙醇提取物2倍体积的蒸馈水制成 悬浮液，依次用悬浮液等体积的正下醇萃取，萃取相经减压旋转蒸发仪浓缩得到诺丽果正 下醇部位提取物。
[0020] 抑菌实验：
[0021] 1、诺丽提取物的溶解
[0022] 将诺丽果乙醇提取物、石油酸部位提取物、乙酸乙醋部位提取物、正下醇部位提取 物分别用水、氯仿、体积比为1 :1的丙酬和氯仿混合物、丙酬溶解，配制成20mg/ml的溶液。
[0023] 2、生物自显影法评价诺丽果提取物抑制植物病原真菌活性 W24] 实验共选用3株植物病原真菌，分别为兰花尖抱炭痘菌（Colletotrichum acutatumSimmonds)，草替炭痘病菌（ColletotrichumfragariaeBrooks)，兰花胶抱炭 痘菌（Colletotrichumgloeosporioides)，采用生物自显影法观察薄层板上抑菌圈的大 小来评价诺丽果不同提取物对运种=种病菌的抑制活性，菌株的培养及生物自显影法参照 T油anca等报道的方法。分别取浓度为20mg/血的诺丽果实不同提取物4和8y以在薄层层 析硅胶板上矩阵点样，挥干，紫外杀菌30min;用喷雾器将制备好的菌株悬浮液（每ml含有 3. 0X105抱子）和0. 1 %吐溫-80均匀喷洒到硅胶板上，再向硅胶板上均匀喷洒菌株悬浮液 3倍量的巧光显示剂；（3)将接种了菌株的硅胶板置于30cmX13cmX7. 5cm的湿室（相对湿 度为100 % )中溫度为24±rC的生长箱内进行培育，每天光照12h，光强度为60 ± 5ymol/ m^si，培养4d后观察实验结果。实验设置空白对照（C&OH)，每个处理均设3个重复，结果 取平均值。 阳0巧]3、实验结果
[00%] 诺丽果提取物抑制兰花和草替炭痘病菌活性结果（抑菌直径：mm表示无活性）
[0027]
[0028] 实验结果表明，诺丽果乙醇提取物、石油酸部位提取物、乙酸乙醋部位提取物对兰 花尖抱炭痘菌（Colletotrichuma州tatumSimmonds)、草替炭痘病菌（Colletotrichum fragariaebrooks)、兰花胶抱炭痘菌（Colletotrichumgloeosporioides)均具有较好的 抑制活性，正下醇部位提取物则没有抑菌活性，说明诺丽果乙醇提取物、石油酸部位提取 物、乙酸乙醋部位提取物在防治植物炭痘病上具有良好的药效，可W用来开发防治植物炭 痘病药物，为植物炭痘病的防治提供一条有效途径。
[0029] W上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可W做出若干改进和润饰，运些改进和润饰 也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种诺丽果提取物，其特征是将新鲜成熟的诺丽果榨汁后经过滤、离心，得到的上清 液为诺丽果汁，诺丽果汁经冷冻干燥成粉末状，用乙醇超声波浸提，浸提液进行抽滤，滤液 浓缩至浸膏状得到诺丽果提取物。2. -种诺丽果极性部位提取物，其特征在于：取权利要求1所述的诺丽果提取物加入 蒸馏水制成悬浮液，用悬浮液等体积的石油醚或乙酸乙酯萃取，萃取相进行浓缩得到诺丽 果石油醚部位提取物或诺丽果乙酸乙酯部位提取物。3. 权利要求1或2所述的诺丽果提取物、诺丽果石油醚部位提取物或诺丽果乙酸乙酯 部位提取物在制备防治植物炭疽病药物中的应用。4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述防治植物炭疽病药物是将诺丽果提 取物、诺丽果石油醚部位提取物或诺丽果乙酸乙酯部位提取物与常规辅料配合，采用现有 工艺制得的临床上允许的制剂。
【专利摘要】本发明属植物应用领域，涉及一种诺丽果提取物及其在制备防治植物炭疽病药物中的应用，所述的诺丽果提取物是将新鲜成熟的诺丽果榨汁后经过滤、离心，得到诺丽果汁，诺丽果汁经冷冻干燥成粉末状，用乙醇超声波浸提，浸提液进行抽滤，滤液浓缩至浸膏状得到诺丽果提取物。在抑菌实验基础上，发现诺丽果提取物在防治植物炭疽病上具有良好的药效，可以用来制备防治植物炭疽病药物，为植物炭疽病的防治提供有效途径，其制备方法简单，成本低。
【IPC分类】A01P3/00, A01N65/08
【公开号】CN105145643
【申请号】CN201510481154
【发明人】谭琳, 臧小平, 马伏宁, 刘以道, 郑晓燕, 马蔚红
【申请人】中国热带农业科学院海口实验站
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年8月7日