一种纯色万代兰组织培养繁育方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种纯色万代兰组织培养繁育方法。
【背景技术】
[0002]纯色万代兰(Vanda subconcolor T.Tang et F.T.Wang)为兰科万代兰属附生草本植物，属于热带附生兰，具有较强的抗旱能力，容易栽培，叶片和根都很有特色，叶片呈棒状，生长在直立的茎两旁，花序从叶腋中长出，四季都可以开花；若光照充足，一年可以开2-3次花；花期长，花色艳丽繁多，花姿奔放，是世界级的花卉名品，富有极高的观赏价值。纯色万代兰的种子细小，本身无法储存养分，自然条件下，其种子萌发阶段完全依靠菌根真菌为其提供养分，自然繁殖率低，种子种苗稀缺，资源更新非常困难。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种纯色万代兰组织培养繁育方法，能够快速有效地提高纯色万代兰种苗的繁殖速度和质量，实现纯色万代兰优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。
[0004]本发明通过以下技术方案达到上述目的:一种纯色万代兰组织培养繁育方法，包括以下步骤:
[0005](I)外植体的选择与消毒:取纯色万代兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
[0006](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(I)得到的外植体剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001UX，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加了 1.0mg/L的
6-苄基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸INAA、2.0mg/LPVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的PH值为5.8 ;
[0007](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养60天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加了 0.2-0.6mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、
0.2-0.6mg/L的激动素ΚΤ、2.0-4.0mg/L萘乙酸ΝΑΑ、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
[0008]本发明的突出优点在于:
[0009](I)采用生物技术对纯色万代兰进行组织培养快速繁殖，能够在短时间内培育出大量适合栽培种植的纯色万代兰幼苗，保障纯色万代兰种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
[0010](2)采用本发明所述的培养方法得到的纯色万代兰丛生芽增殖系数达到8-10倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根。
【具体实施方式】
[0011]下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
[0012]实施例1
[0013]本发明所述的纯色万代兰组织培养繁育方法的一个实例，包括以下步骤:
[0014](I)外植体的选择与消毒:取纯色万代兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
[0015](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23_27°C，光照强度15001ux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加了 1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸INAA、2.0mg/LPVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0016](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养60天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加了 0.2mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.6mg/L的激动素KT、3.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为8.0。
[0017]实施例2
[0018]本发明所述的纯色万代兰组织培养繁育方法的另一个实例，包括以下步骤:
[0019](I)外植体的选择与消毒:取纯色万代兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
[0020](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(I)得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23_27°C，光照强度15001ux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加了 1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸INAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0021](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养60天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加了 0.6mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.4mg/L的激动素KT、4.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为8.6。
[0022]实施例3
[0023]本发明所述的纯色万代兰组织培养繁育方法的再一个实例，包括以下步骤:
[0024](I)外植体的选择与消毒:取纯色万代兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了
2-3滴吐温-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
[0025](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(I)得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23_27°C，光照强度15001ux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加了 1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸INAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0026](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养60天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加了 0.6mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.2mg/L的激动素KT、2.0mg/L萘乙酸NAA,2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP，30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为9.8。
[0027]实施例4
[0028]本发明所述的纯色万代兰组织培养繁育方法的又一个实例，包括以下步骤:
[0029](I)外植体的选择与消毒:取纯色万代兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了
2-3滴吐温-20的100毫升0.lv/v%升萊消毒8_10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水；
[0030](2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤(I)得到的外植体置于解剖镜下，剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23_27°C，光照强度15001ux，光照时间为8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加了 1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸INAA、2.0mg/LPVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8 ;
[0031](3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养60天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加了 0.4mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、0.4mg/L的激动素KT、3.0mg/L萘乙酸NAA、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP，30g/L蔗糖和
3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，丛生芽增殖系数为10.2。
【主权项】
1.一种纯色万代兰组织培养繁育方法，其特征在于:该方法包括以下步骤: (1)外植体的选择与消毒:取纯色万代兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体，剥去外层包叶后，依次用2v/v%洗洁精水溶液浸泡5min、线状自来水冲洗15_30min、添加了 2_3滴吐温-20的100毫升0.1?八％升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3_5次，最后用消毒滤纸除去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高温高压灭菌的蒸馏水； (2)外植体初代诱导获得无菌试管苗:将步骤⑴得到的外植体剥去0.2-0.3mm的茎尖分生组织，接种到MS培养基中，在培养温度为23-27°C，光照强度15001UX，光照时间为.8-10小时/天的条件下培养60天得到无菌试管苗，其中MS培养基中添加了 1.0mg/L的.6-苄基腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的吲哚乙酸INAA、2.0mg/LPVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的PH值为5.8 ; (3)试管苗丛生芽快速繁殖培养:将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于MS繁殖培养基中，在培养温度23-27°C，光照强度15001ux，光照时间为8_10小时/天的条件下培养60天得到试管苗丛生芽，其中MS繁殖培养基中添加了 0.2-0.6mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、.0.2-0.6mg/L的激动素ΚΤ、2.0-4.0mg/L萘乙酸ΝΑΑ、2.0mg/L聚乙烯吡咯烷酮PVP、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。
【专利摘要】一种纯色万代兰组织培养繁育方法，包括如下步骤：(1)取纯色万代兰健康植株新萌发的嫩芽作为外植体进行消毒；(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到无菌试管苗；(3)将所述无菌试管苗置于MS繁殖培养基中进行试管苗快速繁殖培养获得丛生芽。采用本发明所述的培养方法得到的纯色万代兰丛生芽增殖系数达到8-10倍，能够在短时间内提供健壮的纯色万代兰优质种苗，有效解决纯色万代兰的规模化育苗问题。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105210871
【申请号】CN201510660352
【发明人】韦坤华, 王晓峰, 韦范, 李林轩, 黄宝优, 肖冬, 缪剑华, 王一诺, 李翠, 韦莹
【申请人】广西壮族自治区药用植物园
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年10月12日