一种环二肽Cyclo-(L-Ile-L-Pro)的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于农业微生物学技术领域，具体设及一种环二肤切Clo-化-Ile-L-Pro) 的应用。
【背景技术】
[0002] 植物寄生线虫是一类能够寄生于植物各个组织，造成植物出现病症的病原动物。 主要分为根结线虫、松材线虫、大豆抱囊线虫和茎线虫等，W根结线虫危害最为严重，在世 界范围内广泛分布。根结线虫可W寄生3000多种植物，尤其是番茄、黄瓜、花生等常见蔬菜 作物，据不完全估计，线虫在全球造成的经济损失在800亿左右。在根结线虫病害严重的热 带和亚热带地区，致使农作物减产80%W上。
[0003] 根结线虫属于专性寄生，二龄幼虫（J2)为根结线虫的侵染龄。通常由植物的根尖 侵入，W口针刺伤寄主，分泌有毒物质，运些物质含有多种消化酶，诱发寄主组织发生各种 病理变化，破坏寄主细胞的正常代谢功能，最典型的症状是形成大小形状不同的瘤状根结， 根结内有多个雌虫。
[0004] 根结线虫寄主范围较广，大多数是经病±、病苗及灌概传播，且卵块在±壤中能存 活很久，因此治理比较困难。目前主要有W下几种方法：（1)农业防治：包括水旱轮作、嫁 接、改良±壤、调节播种期、种植抗病品种等。（2)物理防治：主要有夏季进行±壤热处理和 种子汰选，另外还包括水淹两周W上、射线或超声波处理等。（3)化学防治：施用杀线虫剂 仍然是目前防治根结线虫病的主要方法，其中漠甲烧±壤消毒在我国占有较大比例，对蔬 菜根结线虫病防治效果优异。但漠甲烧对大气臭氧层具有破坏作用，目前一些发达国家已 经禁止使用漠甲烧。（4)生物防治：生物防治是近年来发展较迅速的一种防治方法。根结 线虫的天敌主要有真菌、细菌、病毒、立克氏体、放线菌、捕食性线虫、满虫和原生动物等，其 中对细菌和真菌的生物防治作用研究较多。
[0005]本发明所述环二肤（cyclicdipeptides)，又名2, 5-二氧赃嗦 (2, 5-dioxopiperazines)或 2, 5-二酬赃嗦（2, 5-d;Lketopiperazines)，由两个氨基酸通过 肤键环合形成，是自然界中最小的环肤。自然界中存在的环二肤一般由a-氨基酸（常为 k氨基酸）形成相对稳定的六元环。由于环二肤形成一个稳定的六元环结构，具有一定的 构象约束作用，有两个氨键给体和两个氨键受体，氨键是药物与受体相互作用的主要方式 之一，因而环二肤在药物化学中是一个重要的药效团。
[0006] 随着人们对环二肤的深入研究，发现该类化合物具有多种生物活性。其稳定的六 元环骨架结构使其在药物化学中成为一个重要的药效团，表现出了抗细菌、抗真菌、抗病 毒、抗肿瘤、免疫抑制、神经保护、抗追疾、抗航病毒、抗高血糖等多种显著的生物活性和药 理活性，还可作为植物生长调节剂、免疫抑制剂和免疫增强剂。已报道的cyclo(Leu-Pro) 和cyclo(化e-Pro)对粪肠球菌具有较强的抑制作用。环二肤还具有抗癌和抗肿瘤作用， Merwe等发现切cloa>r-切S)对癌细胞HT-29、HeLa和MCF-7均有显著的抑制活性。从冬 虫夏草内生真菌化icoccumnigrum的发酵液中分离得到3种环二肤类化合物可抑制HIV-1 在C8166细胞中的复制。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的在于提供一种环二肤切clo-化-Ile-L-Pro)在制备线虫杀虫剂中 的应用。特别是秀丽隐杆线虫杀虫剂和/或根结线虫杀虫剂中的应用。所述的环二肤 切clo-化-Ile-L-Pro)分子式为。孔抓〇2，[M+田 + 为m/z211. 1449,分子量为 210. 1449。 该环二肤具备杀线虫活性，其化学式如下：
[0008]
[0009] 为了达到W上目的，本发明采用W下技术措施：
[0010] 一种环二肤切clo-化-Ile-L-Pro)在制备线虫杀虫剂中的应用，应用过程包括W 环二肤切clo-化-Ile-L-Pro)为主效成分或为有效成分之一制备成线虫杀虫剂。
[0011] 与现有技术相比，本发明具有W下特点：
[001引 1.本发明首次报道了切Clo-化-Ile-L-Pro)其杀线虫活性，为新型的根结线虫生 防制剂的制备提供了新的选择性。
【附图说明】
[0013] 图1为一种杀线虫环二肤的高效液相色谱图。
[0014] 图2为一种杀线虫环二肤的质谱图。
[0015] 图3为一种杀线虫环二肤的核磁共振一维图谱。
[0016] 图4为一种杀线虫环二肤的化学结构示意图。
【具体实施方式】
[0017] 下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为报道的微生物学常规操作方法。 [001引 实施例1 :
[0019] 杀线虫环二肤的化学合成及结构验证
[0020] 1.环二肤类物质（切clo-a-Ile-L-Pro))购自天津药明康德新药开发有限公司。
[0021] 5.高效液相色谱（HPLC)
[0022] W20%乙腊/水溶液（v/v)作为流动相，检测波长为220nm，确定化学合成的环二 肤物质（切clo-a-Ile-L-Pro))的纯度，实验进行3次重复。
[002引 6.液相-质谱联用（LC/M巧
[0024] 采用Agilent6540液质联用系统对化学合成的环二肤物质 (切clo-化-Ile-L-Pro))进行初步鉴定。液相条件如下：流动相：5% -90%乙腊/水溶液 (v/v)梯度洗脱；流速：0. 3mL/min;进样量：3yL;检测波长210nm;质谱条件：负离子源 ESI。质谱数据：[M+田+为m/z211. 1449,分子量为210. 1449,分子式为。孔邮02。
[00幼 7.核磁共振（NMR)
[0026] 核磁共振检测化学合成的环二肤物质（切clo-化-Ile-L-Pro))结构：W重水 值20)为溶剂，分别测定碳谱（13CNMR)W及服QCX0SYW及HMBC等二维谱。根据数据分 析，该环二肤为切clo-化-Ile-L-Pro)。表1为核磁共振数据。
[0027] 表1切clo-化-Ile-L-Pro)核磁共振二维谱数据
[0028]
[0029]
[0030] 实施例2 :
[0031] 环二肤物质（切clo-lX-Ile-L-Pro))的杀线虫活性测定
[0032] 1.杀线虫活性测定方法
[0033] (1)用96孔板进行生物活性测定实验；
[0034] 似每孔加入200ul过滤除菌后浓度为800yg/血的环二肤溶液和30头左右根结 线虫；
[0035] (3)每组实验设置S个重复，并用样品溶剂设置2组空白对照，记为CK;
[0036] (4)20°C溫箱培育，每隔24h观察并统计死亡率；
[0037] 2.环二肤对秀丽隐杆线虫和根结线虫的触杀活性测定
[0038] 按照上述的方法，将样品加入96孔板，每个浓度的样品设置3个重复，W无菌水作 为阴性对照。分别在48h、7化和9化在倒置显微镜下观察，线虫死活判断W针触之不动判 定为死亡。死亡率计算公式：
[0039]
[0040]
[0041] 3.环二肤杀线虫活性测定结果
[0042] 表2环二肤对秀丽隐杆线虫活性测定
[0043]
[0044] 表3环二肤切clo-化-Ile-L-Pro)对南方根结线虫活性测定
[0045]
[0046]
[0047] 注：表中数值均为3次重复实验的平均值；对照组为无菌水 [004引实施例3 :
[0049] 环二肤物质（切clo-化-Ile-L-Pro))的抑制病原性细菌、真菌生长活性测定
[0050] 1.抑制病原性细菌生长活性测定
[0051] (1)用平板对時实验进行活性验证；
[0052] 似每孔加入30ul过滤除菌后浓度为100yg/血的环二肤溶液；
[0053] (3)每组实验设置S个重复，并用样品溶剂设置3组空白对照，记为CK;
[0054] (4) 37°C溫箱培育，24h后观察抑菌结果。
[0055] 2.抑制病原性细菌生长活性测定
[0056] (1)用平板对時实验进行活性验证；
[0057] 似每孔加入30ul过滤除菌后浓度为100yg/mL的环二肤溶液；
[0058] (3)每组实验设置S个重复，并用样品溶剂设置3组空白对照，记为CK ;
[0059] (4) 28°C溫箱培育，待真菌生长延伸至整个平板时，统计实验结果。
[0060] 3.环二肤抑制病原性细菌、真菌生长活性测定结果
[0061] 表4环二肤切clo-化-Ile-L-Pro)抑制细菌生长活性测定
[0062]
[0063] 注：肥(noeffect)表示没有效果
[0064] 表5环二肤切clo-化-Ile-L-Pro)抑制真菌生长活性测定
[0065]
[0067]注：肥(noeffect)表示没有效果。
【主权项】
1. 一种环二肽Cyclo-(L-Ile-L-Pro)在制备线虫杀虫剂中的应用。2. 根据权利要求1所述的应用，所述的环二肽作为主效成分在制备线虫杀虫剂中的应 用。3. 根据权利要求1所述的应用，所述的环二肽作为唯一有效成分在制备线虫杀虫剂中 的应用。4. 根据权利要求1所述的应用所述的线虫杀虫剂为南方根结线虫杀虫剂或秀丽隐杆 线虫杀虫剂。5. -种环二肽Cyclo-(L-Ile-L-Pro)在制备同时杀灭南方根结线虫和秀丽隐杆线虫 杀虫剂中的应用。
【专利摘要】本发明提供了一种环二肽Cyclo-(L-Ile-L-Pro)的应用，该应用具体为环二肽Cyclo-(L-Ile-L-Pro)在制备线虫杀虫剂中的应用，通过南方根结线虫和秀丽隐杆线虫致死率的测定，发现环二肽Cyclo-(L-Ile-L-Pro)对线虫有较好的杀灭效果，为新型的根结线虫生防制剂的制备提供了新的选择性。
【IPC分类】A01P5/00, A01N43/90
【公开号】CN105211083
【申请号】CN201510755741
【发明人】张吉斌, 邵宗泽, 景雪萍, 李光玉, 唐佳频, 孙风芹, 张智涛, 翟义乐, 郑龙玉, 喻子牛
【申请人】华中农业大学, 国家海洋局第三海洋研究所, 中国大洋矿产资源开发研究协会
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年11月9日