铁皮石斛组培繁育及仿野生栽培方法
【技术领域】
[0001]本发明属于一种采用组织培养繁殖植物种苗的技术领域，具体涉及的是铁皮石斛组培繁育及仿野生栽培方法。
【背景技术】
[0002]石斛为兰科石斛属植物，主要药用石斛品种有环草石斛、马鞭石斛、黄草石斛、铁皮石斛和金钗石斛。尤以铁皮石斛药用价值最高，药用石斛主要用于滋阴清热，可以治疗具有阴虚症的急性及慢性咽喉炎、急性支气管炎、结核病、甲状腺机能亢进、糖尿病、慢性萎缩性胃炎和免疫功能低下等症，并对中老年人群具有增强肌体免疫力、抗衰老的保健功效。
[0003]铁皮石斛自然野生环境特殊，均生长在几十米高的悬崖峭壁之上，自然繁殖系数极低，再由于人为过度采收，已属濒危物种。近些年人们想通过人工栽培方法来繁衍铁皮石斛，虽有些进展，但一直无法解决成活率低，生产成本高和不能大规模生产等问题。中国专利。申请号2004100173806公开了 “一种铁皮石斛的培育方法”，该技术在组培苗光照强度采用2000?30001X光照，其优点是可以缩短光照时间和组培苗培养周期，但存在叶片因光照强度大而发生紫红色，叶绿素含量低，不利于组培苗健壮生长；中国专利申请号2004100844961还公开了一种“铁皮石斛的人工大面积栽培方法”，该方法在组培苗来源上采用铁皮石斛种子进行组培繁育，然后采用两段式将组培苗移栽，先是经过4?5个月的炼苗移栽，然后再将炼苗后的石斛苗移栽到大田生产。这种方法优点是种子繁殖量大，易形成原球茎，并能提高移栽成活率，其不足在于种子繁殖易发生性状分离变异，群体种性不稳定，种苗繁育生产周期长，生产成本高。
【发明内容】
[0004]根据现有铁皮石斛组培繁育及人工栽培技术中存在的不足，本发明提出一种采用铁皮石斛茎杆切片及专用组培配方进行组培繁育及仿野生栽培的方法，采用该方法有利于实现石斛人工规模化生产栽培。
[0005]实现上述目的的技术方案是:
[0006]一、种苗的组培繁育
[0007](1)将铁皮石斛幼嫩茎杆切成1?2mm厚的切片接种到MS+BA4?5的培养基上，控制温度在22?24°C、光照在1000?1500Lx条件下培养40?60天，诱导愈伤组织生长，形成原球茎:
[0008](2)将以形成的原球茎接种到灭菌后的MS+BA1.0?2.0+ΝΑΑ0.2?0.5增殖培养基上，温度在22?24°C、光照1000?1500Lx条件下培养40?60天，使原球茎增殖生长。
[0009](3)将增殖的原球茎接种到MS+BA0.2?0.5+NAA0.05?0.1发芽培养基上，温度在24°C、光照1000?1500Lx条件下培养60天，使之长出2?3cm长的生根铁皮石斛苗；
[0010](4)将发芽苗移入MS+NAA0.05?0.1+酪蛋白40mg/L的发芽苗培养基上，在温度22?24°C、光照1000?1500Lx条件下培养60?80天，使之生长成5?8cm的铁皮石斛苗；
[0011](5)将铁皮石斛种苗培养瓶移出培养室，去掉瓶盖，在常温下炼苗3?5天，将培养苗用镊子轻轻取出，洗净培养基，进行移栽。
[0012]上述光照时间为每天12小时，每隔1小时光照间歇开启一次。
[0013]上述种苗的组培繁育步骤(1)?(4)为无菌式培育。
[0014]二、仿野生栽培
[0015](1)人工仿野生栽培地选择
[0016]人工栽培铁皮石斛选择海拔高度为450?1000米之间的平地，建成高度为3?5米的大棚做栽培场地，大棚顶部覆盖75%左右的遮阳网；
[0017](2)栽培床的制作；在大棚内制作栽培苗床，苗床高60公分，宽180公分，长度按大棚长度为准，下层为较粗的松树皮，厚度5?8公分，上层是粉碎后的细松树皮，厚3?4公分；
[0018]⑶栽培
[0019]按12X8公分的行、株距将铁皮石斛苗栽培到床面上，每丛4?5株，移栽后用水浇透。
[0020](4)管理
[0021 ] 大棚内温度控制在20?28 °C范围内，棚内湿度控制在60?70 %，遮阴度达到70?80%，棚内高度3?5米，要求大棚四周通风良好，排水方便。每1?2月进行一次病虫害防治，病害采用农用青霉素、链霉素防治，用药浓度为1000ml水加40万单位一支，两种药交替使用。虫害可用生物农药防治，或用挥发性农药喷施在地面及过道上，放下四周薄膜，半小时后既可杀死害虫，每年春季在栽培床表而追施腐熟、粉碎后的有机肥1.5?2.5斤/m2，追肥采用叶面喷施多微磷酸二氢钾或营养液。
[0022](5)采收
[0023]人工栽培的铁皮石斛3?4年即可采收，采收时间为立冬至清明前植株尚未萌芽前，用剪刀从铁皮石斛基部将老植株剪下，留下嫩株继续生长。
[0024]本发明的技术特点在于:
[0025](1)组培用材料选取的是优良石斛幼嫩茎杆切片作为外植体培养材料，其品种性状稳定，不易发生分离变异。
[0026](2)组培光照强度控制为1000-15001x，采取间隙性光照时间，生成的组培苗叶片深绿，生长健壮，能极大提尚移栽成活率。
[0027](3)组培苗移栽采取先开瓶盖炼苗3?5天后再移栽。直接移栽到大田苗床，无需穴盘练苗，降低了生产周期好生产成本，移栽后一周内保持80%以上的湿度，每日下午6?7时喷水，以增加叶面湿度(此方法适合汉中栽培，与南方管理方式正好相反)。
[0028](4)大田管理因北方湿度低。原则上不打药防止病虫害，只用石灰粉撒施地面，防虫防病效果很好，没有农药残留。
[0029](5)汉中的石斛生长速度较南方慢，但品质佳。多糖含量达到45.7%，超过药典规定的20%超过一倍多(附汉中药检所检验报告)。
[0030]具体实施方法
[0031]下面结合实例对本发明作进一步说明。
[0032]实施例:
[0033]—、铁皮石斛种苗的组培繁育
[0034]1、诱导愈伤组织:采用MS+BA1.0?2.0+4.0的培养基配方，将培养基配制
[0035]后分装到培养瓶，在012MPa下灭菌30分钟后，在超净工作台上将铁皮石斛幼嫩茎杆材料切成1?2mm厚的切片，接种到培养基上，在温度22?24°C、光照1000?1500Lx条件下培40?60天即可生长出癔伤组织，进而形成原球茎。
[0036]2、原球茎增殖:采用MS+BA1.0?2.0+ΝΑΑ0.2?0.5增殖配方，灭菌后将已形成的原球茎接种到原球茎增殖培养基上进行增殖培养，在温度22?24°C、光照1000?1500Lx条件下，培养40?60天后可继续转接进行增殖培养。
[0037]3、原球茎生根发芽培养:采用MS+BA0.2?0.5+N