一种热带普通野生稻幼穗诱导愈伤组织培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及稻种资源学科野生稻种组织培养技术领域，特别是一种热带普通野生 稻幼穗诱导愈伤组织培养基。
【背景技术】
[0002] 普通野生稻是我们国家仅有的三种野生稻资源之一。它具有许多优良的农艺性 状，如抗寒、抗虫害、抗纹枯病和白叶枯病等特性，是一种十分宝贵的遗传资源，在栽培稻的 育种中有着十分广阔的应用前景
[0003] 随着现代育种工作和生物技术的发展，人们开展了对野生稻体细胞遗传的研究。 不同产地的普通野生稻已在花药、幼穗和种子诱导培养的研究中获得再生植株，但愈伤组 织的诱导率和绿苗分化率较低。不利于在单个细胞、组织和器官水平上的遗传操作和种质 保存。
[0004] 广西地处祖国南方位于北亚热带地区，采集来自热带地区的普通野生稻，因其耐 冷性能比亚热带地区的普通野生稻差，经常出现田间越冬死亡的现象，极其容易造成种质 资源丢失。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种热带普通野生稻幼穗诱导愈伤组织培养基，以解决普 通野生稻田间越冬死亡的问题。
[0006] 为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明公开了一种热带普通野生稻幼 穗诱导愈伤组织培养基，培养基按照以下组分及含量配制而成：
[0007] (1)大量元素：硝酸钾1900±60mg/L、硝酸铵1450±50mg/L、七水硫酸镁 350±20mg/L、磷酸二氢钾 400±30mg/L、氯化钙 200±20mg/L ;
[0008] (2)微量元素：一水硫酸锰22. 3±5mg/L、七水硫酸锌4. 3±2mg/L、硼酸 1. 6±0· 5mg/L、二水钼酸钠 (λ 025±0· 005mg/L、五水硫酸铜(λ 025±0· 005mg/L、六水氯化 钴(λ 025±0· 005mg/L、七水硫酸亚铁 86. 2±1L 5mg/L、碘化钾(λ 8±0· lmg/L ;
[0009] (3)有机物：甘氨酸2. 0±0. 5mg/L、谷氨酸2. 0±0. 5mg/L、盐酸硫胺素 0· 5±0· 05mg/L、盐酸吡哆醇 0· 5±0· 05mg/L、烟酸 0· 5±0· 05mg/L、肌醇 100. 0±20mg/L、水 解乳蛋白 650±40mg/L、酵母浸提物 1000±50mg/L、蔗糖 60±10mg/L、琼脂 9±lmg/L ;
[0010] (4)植物生长调节剂：2. 4-D 4· 0±0· 5mg/L、吲哚乙酸 1. 0±0· 05mg/L ;
[0011] 余量为蒸馏水，调节pH为5. 8。
[0012] 优选的，还包括了野生稻幼穗细胞裂解液25. 0±5ml/L，野生稻幼穗细胞裂解液制 备方法为25g野生稻幼穗新芽液氮研磨或超声破碎后，滤去残渣，灭菌，稀释到1L无菌水。
[0013] 本发明具有以下有益效果：
[0014] 1.本发明通过优化传统愈伤组织培养基，通过对培养基中各组分含量进行合理调 整，可以满足野生稻幼穗愈伤组织生长需求为后期野生稻幼穗越冬御寒奠定基础。
[0015] 2.在经过合理的培养基中添加了野生稻幼穗新芽细胞裂解液，细胞裂解液不仅可 以提供愈伤组织初期生长所需的各种生长因子，而且提供了类似细胞生长所需生理环境， 使愈伤组织更好的生长。
【具体实施方式】
[0016] 为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明 进行进一步详细说明。
[0017] 实施例1
[0018] -种热带普通野生稻幼穗诱导愈伤组织培养基，培养基按照以下组分及含量配制 而成：
[0019] (1)大量元素：硝酸钾1840mg/L、硝酸铵1400mg/L、七水硫酸镁330mg/L、磷酸二氢 钾 370mg/L、氯化钙 180mg/L ;
[0020] (2)微量元素：一水硫酸锰17. 3mg/L、七水硫酸锌2. 3mg/L、硼酸1. lmg/L、二水钼 酸钠0. 02mg/L、五水硫酸铜0. 02mg/L、六水氯化钴0. 02mg/L、七水硫酸亚铁74. 7mg/L、碘化 钾 0· 7mg/L ;
[0021] (3)有机物：甘氨酸1. 5mg/L、谷氨酸1. 5mg/L、盐酸硫胺素0. 45±mg/L、盐酸P比咳 醇0· 45mg/L、烟酸0· 45mg/L、肌醇80.0 mg/L、水解乳蛋白610mg/L、酵母浸提物950mg/L、鹿 糖 50mg/L、琼脂 8mg/L ;
[0022] (4)植物生长调节剂：2. 4-D 3. 5mg/L、吲哚乙酸0· 95mg/L ;
[0023] (5)野生稻幼穗细胞裂解液20ml/L ;
[0024] 余量为蒸馏水，调节pH为5. 8。
[0025] 诱导培养幼穗324枚培养结果：
[0027] 实施例2
[0028] 一种热带普通野生稻幼穗诱导愈伤组织培养基，培养基按照以下组分及含量配制 而成：
[0029] (1)大量元素：硝酸钾1900mg/L、硝酸铵1450mg/L、七水硫酸镁350mg/L、磷酸二氢 钾 400mg/L、氯化|丐 200mg/L ;
[0030] (2)微量元素：一水硫酸锰22. 3mg/L、七水硫酸锌4. 3mg/L、硼酸1. 6mg/L、二水钼 酸钠0· 025mg/L、五水硫酸铜(λ 025mg/L、六水氯化钴(λ 025mg/L、七水硫酸亚铁86. 2mg/L、 碘化钾〇· 8mg/L ;
[0031] (3)有机物：甘氨酸2. Omg/L、谷氨酸2. Omg/L、盐酸硫胺素0. 5mg/L、盐酸吡哆醇 0· 5mg/L、烟酸0· 5mg/L、肌醇100.0 mg/L、水解乳蛋白650mg/L、酵母浸提物1000mg/L、鹿糖 60mg/L、琼脂 9mg/L ;
[0032] (4)植物生长调节剂：2. 4-D 4. Omg/L、吲噪乙酸1. Omg/L ;
[0033] (5)野生稻幼穗细胞裂解液25ml/L ;
[0034] 余量为蒸馏水，调节pH为5. 8。
[0035] 诱导培养幼穗347枚培养结果：
[0037] 实施例3
[0038] 一种热带普通野生稻幼穗诱导愈伤组织培养基，培养基按照以下组分及含量配制 而成：
[0039] (1)大量元素：硝酸钾1960mg/L、硝酸铵1500mg/L、七水硫酸镁370mg/L、磷酸二氢 钾 430mg/L、氯化钙 220mg/L ;
[0040] (2)微量元素：一水硫酸锰27. 3mg/L、七水硫酸锌6. 3mg/L、硼酸2. lmg/L、二水钼 酸钠0. 03mg/L、五水硫酸铜0. 03mg/L、六水氯化钴0. 03mg/L、七水硫酸亚铁97. 7mg/L、碘化 钾 0· 9mg/L ;
[0041] (3)有机物：甘氨酸2. 5mg/L、谷氨酸2. 5mg/L、盐酸硫胺素0· 55mg/L、盐酸R比咳醇 0· 55mg/L、烟酸0· 55mg/L、肌醇120mg/L、水解乳蛋白690mg/L、酵母浸提物1050mg/L、鹿糖 70mg/L、琼脂 10mg/L ;
[0042] (4)植物生长调节剂：2. 4-D 4. 5mg/L、吲哚乙酸1. 05mg/L ;
[0043] (5)野生稻幼穗细胞裂解液30ml/L ;
[0044] 余量为蒸馏水，调节pH为5. 8。
[0045] 诱导培养幼穗322枚培养结果：
[0048] 以上所述，仅为本发明较佳的【具体实施方式】，但本发明的保护范围并不局限于此， 任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换， 都应涵盖在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种热带普通野生稻幼穗诱导愈伤组织培养基，其特征在于，所述的培养基按照以 下组分及含量配制而成： ⑴大量元素：硝酸钾1900±60mg/L、硝酸铵1450±50mg/L、七水硫酸镁 350±20mg/L、磷酸二氢钾 400±30mg/L、氯化钙 200±20mg/L; ⑵微量元素：一水硫酸锰22. 3±5mg/L、七水硫酸锌4. 3±2mg/L、硼酸 1. 6±0· 5mg/L、二水钼酸钠（λ 025±0· 005mg/L、五水硫酸铜（λ 025±0· 005mg/L、六水氯化 钴 0· 025±(X 005mg/L、七水硫酸亚铁 86. 2±1L 5mg/L、碘化钾（λ 8±0· lmg/L ; ⑶有机物：甘氨酸2· 0±0· 5mg/L、谷氨酸2· 0±0· 5mg/L、盐酸硫胺素 0.5±0.05mg/L、盐酸吡哆醇 0.5±0.05mg/L、烟酸 0.5±0.05mg/L、肌醇 100.0±20mg/L、 水解乳蛋白650±40mg/L、酵母浸提物1000±50mg/L、蔗糖60±10mg/L、琼脂9±lmg/ L； (4)植物生长调节剂：2. 4-D 4· 0±0· 5mg/L、吲哚乙酸L 0±0· 05mg/L ; 余量为蒸馏水，调节pH为5. 8。2. 如权利要求1所述的一种热带普通野生稻幼穗诱导愈伤组织培养基，其特征在于， 还包括了野生稻幼穗细胞裂解液25. 0±5ml/L，所述的野生稻幼穗细胞裂解液制备方法为 25g野生稻幼穗新芽液氮研磨或超声破碎后，滤去残渣，灭菌，稀释到1L无菌水。
【专利摘要】本发明涉及稻种资源学科野生稻种组织培养技术领域，公开了一种热带普通野生稻幼穗诱导愈伤组织培养基，包括了大量元素、微量元素、有机物、植物生长调节剂、蒸馏水，通过对上述生长所需元素进行合理配置，调配出适合野生稻幼穗诱导愈伤组织所需要的培养基，并且通过增加了野生稻幼穗新芽细胞裂解液，不仅可以提供愈伤组织初期生长所需的各种生长因子，而且提供了类似细胞生长所需生理环境，使愈伤组织更好的生长，克服了传统培养基诱导率低下的缺点。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105284614
【申请号】CN201510685971
【发明人】梁云涛, 陈成斌, 赖群珍, 张烨, 潘英华
【申请人】广西壮族自治区农业科学院水稻研究所
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年10月22日