多花指甲兰组织培养快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种多花指甲兰组织培养的繁殖方法。更具体地说，本发明涉及一种多花指甲兰组织培养快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002]多花指甲兰(Aerides rosea Lodd.ex Lindl.et Paxt.)为兰科的附生兰，其总状花序-30cm密生许多花，花白色而带紫色斑点十分艳丽，是园艺上重点观赏植物。自然条件下只有老死时才能从中下部长出1-2个小苗，种子繁殖由于胚发育不完全，自然条件不很难萌发。加之人工采挖的压力，生存环境的恶化，野生资源日益减少，多花指甲兰以被列入国家重点保护野生植物。
【发明内容】
[0003]本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
[0004]本发明还有一个目的是提供一种多花指甲兰组织培养快繁方法，能够快速有效地提高多花指甲兰种苗的繁殖速度和质量，实现多花指甲兰优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。
[0005]为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤:
[0006](1)培育无菌试管苗
[0007]将经过预处理的多花指甲果实切开，取出种子接种到第一 MS培养基中，培养温度23-27°C，光照强度1300-16001ux，光照时间8_10小时/天，培养时间55-65天，得无菌试管苗，其中，第一 MS培养基的初始pH值为5.5-6.0，其包含:MS、0.4-0.6mg/L的6-苄基腺嘌呤、1.8-2.2mg/L的萘乙酸、1.8-2.2g/L的活性炭、25_35g/L的蔗糖以及4_6g/L的琼脂；
[0008](2)无菌试管苗快速繁殖培养
[0009]将步骤(1)中得到的无菌试管苗置于第二 MS培养基中，培养温度23-27°C，光照强度1400-16001ux，光照时间为8-10小时/天，培养时间55-65天，得试管苗丛生芽，其中第二 MS培养基的初始pH值为5.8，其包含:MS、0.5-2.0mg/L的噻苯隆、0.2-1.5mg/L的2.4二氯苯氧乙酸、1.8-2.2mg/L的聚乙烯吡咯烷酮、25_35g/L的蔗糖和4_6g/L的琼脂。
[0010]优选的是，所述的多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，所述步骤(1)中的预处理包括:选取多花指甲果实，用体积分数为1-3%的洗洁精水溶液浸泡4-6min，并用流水冲洗15-30min，再用氯化萊消毒10_15min，无菌水冲洗3_5次，除去表面水分，得到处理后的多花指甲果实，其中每100ml氯化汞加入2-3滴吐温-20。
[0011]优选的是，所述的多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，所述预处理中，除去表面水分，具体为采用消毒滤纸除去表面水分。
[0012]优选的是，所述的多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，所述活性炭为AC活性炭。
[0013]优选的是，所述的多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。
[0014]优选的是，所述的多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，所述预处理中，在除去表面水分后，还包括:将除去水分后的多花指甲果实用波长为200nm的紫外线照射处理lOmin。
[0015]优选的是，所述的多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，萘乙酸的浓度为2.0mg/L。
[0016]优选的是，所述的多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，所述步骤(1)中，取出种子接种到第一 MS培养基中，具体为:
[0017]步骤A、向组培瓶底部由下至上依次铺设厚度为1_的火山泥层、厚度为2_的海底泥层以及厚度为1_的火山泥层形成的层状结构，在所述海底泥层表面覆盖一层防水透气膜，再向组培瓶中投入第一 MS培养基，此处的组培瓶为圆柱状的口径较大的组培瓶；
[0018]步骤B、在所述第一 MS培养基表面放置水平设置的网板，按压所述网板至接触所述火山泥层，所述网板的网格均为边长为8_的正方形，所述网板表面均匀涂覆厚度为1_的聚丙烯酰胺层，并在聚丙烯酰胺层表面覆盖一层滤布，所述网板高度略低于所述第一 MS培养基的深度，以使得所述网板淹没在所述第一 MS培养基内；
[0019]步骤C、在所述网板的每个网格靠近中间的位置，竖直设置一个直径为2mm的管体，使其卡设在所述层状结构上，其中，所述管体的高度高于所述第一 MS培养基的深度，所述管体位于所述第一 MS培养基的部分均匀间隔开设多个直径为0.8mm的通孔；
[0020]步骤D、向所述第一 MS培养基中均匀投放种子。
[0021]本发明至少包括以下有益效果:
[0022](1)采用生物技术对多花指甲兰进行组织培养快速繁殖，能够在短时间内培育出大量适合栽培种植的多花指甲兰幼苗，保障多花指甲兰种苗的增殖系数和种苗质量，实现规模化生产，满足生产上的需要。
[0023](2)采用本发明所述的培养方法得到的多花指甲兰丛生芽增殖系数达到8-10倍，丛生芽健壮，接种到生根培养基后容易生根。
[0024](3)本发明所采用的培养基选用新型高效的细胞分裂素-噻苯隆，其可以高效促进细胞分裂，用于组织培养，可以更好的促进植物的芽分化，对人畜低毒；而且培养基中还添加了 2，4-二氯苯氧乙酸，其作为一种生长素类似物，具有很好的调节植物生长的作用。
[0025](4)本发明在培养基中架设网板，并在网板上涂覆聚丙烯酰胺层，聚丙烯酰胺具有很好的保水作用，刚开始可以吸收培养基的水分进行保存，随着培养的进行，培养基中的水分逐渐减少，聚丙烯酰胺将释放其之前吸收的水分，为后期种子的发育提供更好的条件，而且在网格中间卡设一管体，管体开设多个通孔，每隔一段时间，可以往管体内输送空气，即为培养基内输送空气，提高培养基内的含氧量，为种子发芽的提高条件；并在组培瓶底部铺设海底泥和火山泥，其中含有大量的矿物元素，亦有利于种子发芽。
[0026]本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
【具体实施方式】
[0027]下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0028]应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
[0029]<实施例1>
[0030]一种多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤:
[0031](1)培育无菌试管苗
[0032]将经过预处理的多花指甲果实切开，取出种子接种到第一 MS培养基中，培养温度23°C，光照强度13001ux，光照时间8小时/天，培养时间55天，得无菌试管苗，其中，第一MS培养基的初始pH值为5.5，其包含:MS、0.4mg/L的6-苄基腺嘌呤、1.8mg/L的萘乙酸、
1.8g/L的活性炭、25g/L的蔗糖以及4g/L的琼脂；
[0033](2)无菌试管苗快速繁殖培养
[0034]将步骤(1)中得到的无菌试管苗置于第二MS培养基中，培养温度23-27°C，光照强度14001ux，光照时间为8小时/天，培养时间55天，得试管苗丛生芽，其中第二 MS培养基的初始pH值为5.8，其包含:MS、0.5mg/L的噻苯隆、0.2mg/L的2.4 二氯苯氧乙酸、1.8mg/L的聚乙烯吡咯烷酮、25-35g/L的蔗糖和4-6g/L的琼脂。
[0035]所述的多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，所述步骤(1)中的预处理包括:选取多花指甲果实，用体积分数为1%的洗洁精水溶液浸泡4min，并用流水冲洗15min，再用氯化汞消毒lOmin，无菌水冲洗3次，除去表面水分，得到处理后的多花指甲果实，其中每100ml氯化汞加入2滴吐温-20。
[0036]所述的多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，所述预处理中，除去表面水分，具体为采用消毒滤纸除去表面水分。
[0037]所述的多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，所述活性炭为AC活性炭。
[0038]所述的多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，所述无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。
[0039]所述的多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，所述预处理中，在除去表面水分后，还包括:将除去水分后的多花指甲果实用波长为200nm的紫外线照射处理lOmin。
[0040]所述的多花指甲兰组织培养快速繁殖方法，所述步骤(1)中，取出种子接种到第一 MS培养基中，具体为:
[0041]步骤A、向组培瓶底部由下至上依次铺设厚度为1_的火山泥层、厚度为2_的海底泥层以及厚度为1_的火山泥层形成的层状结构，在所述海底泥层表面覆盖一层防水透气膜，再向组培瓶中投入第一 MS培养基；
[0042]步骤B、在所述第一 MS培养基表面放置水平设