丹参组培苗培养基及丹参组培快繁方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物组织培养技术领域，尤其涉及一种丹参的组织培养技术。
【背景技术】
[0002] 丹参又名赤参、逐乌、郁蝉草、奔马草等，为唇形科植物丹参（Salvia miltiorrhizaBunge)的干燥根及根莖，味苦，微寒。归心，肝经，具有活血通络、祛齡止痛、 凉血消痈、清心除烦等功效，对心血管和血液系统作用显著。在临床上多用于治疗胸痹心 痛，脘腹胁痛，癥瘕积聚，热痹疼痛，心烦不眠，月经不调，痛经经闭，疮痈肿痛等。随着对其 主要化学成分及药理作用研究的深入，加大了丹参资源的开发和利用，使得丹参市场需求 量不断扩大。但是，丹参野生资源相对较少，而传统的栽培模式，又面临着生长周期长，品质 退化、生产成本相对过高等问题。
[0003] 植物组织培养在广义上讲是指在人工的操纵下，把植物体的一个器官、组织，单个 细胞或原生质体从植物体取出后放在玻璃容器里并在供给丰富营养成分和合适的外界培 养条件下，使它们得以继续生存或发展，最终形成完整植株的一种培养方法。组织培养具有 较多优点，如：生长周期短，繁殖率高，变异少，培养条件可以人为控制，操作简单，利于工厂 化生产和自动化控制，等等。
【发明内容】
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[0004] 本发明的目的是提供一种丹参组培苗诱导培养基、生根培养基及丹参组培快繁的 方法。
[0005] 为解决上述问题，本发明提供如下技术方案：
[0006] 本发明公开了一种丹参组培苗培养基，包括诱导培养基和生根培养基，所述诱 导培养基为：MS+6-BA0. 5-2.Omg/L+NAAO. 1-0. 5mg/L+ 蔗糖 30g/L+ 琼脂 7g/L，pH值在 6· 08-6. 12 之间；所述生根培养基为：1/2MS+IBA1.Omg/L+KTl. 0mg/L+蔗糖 15g/L+琼脂 7g/ L+活性炭 0· 05-0. 15%，pH值在 6· 08-6. 12 之间。
[0007] 优选的，所述诱导培养基中的6-ΒΑ为1.Omg/L，ΝΑΑ为0. 5mg/L，所述生根培养基 中的活性炭为0.05%。
[0008] 其中，1/2MS即MS基础配方的大量元素减半，其它不变。
[0009] 所述诱导培养基和生根培养基：1L培养液分装在15个200ml的瓶中，每瓶分装 60ml左右的培养液。
[0010] 本发明另外公开了一种丹参组培快繁方法，以带腋芽的丹参茎为材料，进行丹参 组织培养繁殖，其步骤如下：
[0011] (1)外植体消毒处理；
[0012] (2)诱导分化培养：将经过消毒处理的外植体接种到所述的诱导培养基中进行丛 生芽诱导培养；
[0013] (3)将步骤（2)培养得到丹参小苗的茎切成带节的小段，并转入所述的生根培养 基上进行继代培养；
[0014] (4)炼苗移栽。
[0015] 优选的，所述步骤（1)外植体消毒处理：采取当年生带腋芽的嫩茎段为外植体，剪 去叶，留叶柄基部，用淸水不断摇晃洗去表面附着物，在超净工作台中用1.5%次氯酸钠的 溶液（加2-3滴吐温）消毒15-20min，用无菌水冲洗2-3次，再用75%乙醇消毒2次，每次 30-60s，用无菌水洗2-3次。
[0016] 优选的，所述步骤（2)诱导分化培养的条件为：光照时间为每天14小时，光照强度 为20001x，置于培养温度为24-26Γ的条件下培养直至形成丛生芽。
[0017] 优选的，所述步骤（3)生根培养的条件为：光照时间为每天12小时，光照强度为 20001x，培养温度为22°C;
[0018] 优选的，所述步骤（4)炼苗移栽：将高约5-6cm的生根试管苗的培养瓶盖半开炼苗 2-3天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗5-7天，将试管苗从培养瓶中 取出，洗掉根部培养基，栽入由蛭石和珍珠岩按1:1配比混合成的基质中并定植于大田中。
[0019] 优选的，所述诱导培养基和生根培养基在使用前均需要灭菌，将配制好的培养基 装进灭菌器里，灭菌温度为120°c，灭菌时间为30分钟，灭菌完后，迅速储存到无菌室。
[0020] 优选的，诱导培养和生根培养中，每瓶均接种1个外植体，以防交叉污染。
[0021] 优选的，移栽中，栽植株行距约为10X15cm，移栽后及时喷水，最后搭上小拱棚，浇 透水，盖上塑料薄膜，用遮荫网遮光，温度控制在20-25Γ，成活后随生长，尽早增加光照强 度。
[0022] 本发明另外公开了一种丹参试管苗炼苗移栽的方法，将高约5_6cm的生根试管苗 的培养瓶盖半开炼苗2-3天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗5-7天， 将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由蛭石和珍珠岩按1:1配比混合成的基 质中并定植于大田中。栽植株行距约为l〇X15cm，移栽后及时喷水，最后搭上小拱棚，浇透 水，盖上塑料薄膜，用遮荫网遮光，温度控制在20-25Γ，成活后随生长，尽早增加光照强度。
[0023] 本发明的有益效果在于：本发明针对传统丹参栽培模式存在生长周期长，品质退 化，生产成本相对过高等问题。本发明以带腋芽的丹参茎为材料，经过外植体灭菌处理、诱 导和分化培养、生根培养以及炼苗移栽等步骤建立了丹参组织培养快繁技术体系，找到了 最佳的丹参组培快繁条件，可用于大批量生产丹参优质种苗。其有益效果是生长周期短， 繁殖率高，变异少，培养条件可以人为控制，操作简单，生产量大，为在短期内实现大规模工 厂化生产丹参种苗提供了理论依据和实践基础，并为丹参的遗传转化和品种改良等奠定基 础。
[0024] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【具体实施方式】
[0025] 以下结合具体实例，对本发明进行详细说明。
[0026] 实施例1
[0027] 丹参组培快繁方法，包括如下步骤：
[0028]步骤一，几种MS培养基母液的配制。
[0029] MS100倍大量元素母液的配制，分别称取硝酸钾190g，硝酸铵165g，磷酸二氢钾 17g，硫酸镁37g，氯化|丐44g，分别加入5个1000mL烧杯中，加入适量蒸馏水，搅拌溶解，定 容成1000mL，5种大量元素母液放置冰箱备用。
[0030] MS1000倍微量元素母液的配制，分别称取碘化钾0. 83g，硼酸6. 2g，硫酸锰16. 9g， 硫酸锌8. 6g，钼酸钠0. 25g，硫酸铜0. 025g，氯化钴0. 025g，至1000mL烧杯中，加入适量蒸 馏水，搅拌溶解，定容成l〇〇〇mL，放置冰箱备用。
[0031] MS100倍有机母液的配制，称取肌醇10g，甘氨酸0. 2g，盐酸硫胺素0. 01g，盐酸吡 哆醇0. 05g，烟酸0. 05g。在蒸馏水中依次溶解，定容成1000mL，放置冰箱备用。
[0032] MS100倍铁盐的配制，分别称取乙二胺四乙酸二钠3. 73g，硫酸亚铁2. 78g，至 1000mL烧杯中，加入适量蒸馏水，搅拌溶解，定容成1000mL，放置冰箱备用。
[0033] 步骤二，诱导培养基的配制，取MS1000倍微量元素母液lmL，MS大量、MS有机、MS 铁盐三种母液各10mL，至1000mL烧杯中加入适量蒸馏水，加入30g鹿糖和1000μLI.Omg/ mL6-BA，1000μL0. 5mg/mLNAA，搅拌溶解，调节PH为6. 10左右，定容成1000mL混合液。称 取琼脂粉7g，加入1000mL混合液，加热煮沸，分装至15个200mL培养瓶中。
[0034] 步骤三，生根培养基的配制，分别取MS1000倍微量元素母液lmL，MS100倍大量元 素母液5mL，MS有机、MS铁盐母液各10mL，至1000mL烧杯中加入适量蒸馏水，加入15g蔗糖 和100(^1^1.01