伯克霍尔德氏菌属的分离细菌菌株及其农药代谢物的制作方法
【专利说明】
[0001] 本申请是申请日为2011年2月24日、申请号为201180011161. 5、发明名称为"伯 克霍尔德氏菌属的分离细菌菌株及其农药代谢物"的发明专利申请的分案申请。
技术领域
[0002] 本发明提供一种伯克霍尔德氏菌(Burkholderia sp)的物种,其对脊椎动物如哺 乳动物、鱼类和鸟类无已知的致病性,但对植物、昆虫、真菌和线虫具有农药活性。本发明还 提供源自所述物种的培养物的天然产物,以及利用所述天然产物来控制双子叶、单子叶和 苔草杂草的萌发和生长,调节真菌的生长以及控制诸如昆虫和线虫的有害生物(pest)的 方法。
【背景技术】
[0003] 天然产物为微生物、植物或其他生物体产生的物质。微生物天然产物提供了丰 富的化学多样性来源,而且将天然产物用于药用目的历史悠久。一种这样的化合物为 FR901228,其分离自色杆菌属(Chromobacterium),并且据发现可以用作抗菌剂和抗肿瘤剂 (参见,例如Ueda et al.,美国专利第7, 396, 665号)。
[0004] 但微生物产生的次生代谢物据发现也可成功用于农业上的杂草和有害生物控制 (参见,例如 Nakajima et al. 1991 ;Duke et al.,2000 ;Lydon&Duke, 1999 ;Gerwick et al.,美国专利第7,393,812号)。微生物天然产物已成功开发为农业杀虫剂(参见,例如 Salama et al. 1981 !Thompson et al·,2000 ;Krieg et al. 1983)。有时候,这样的天然产 物与化学农药组合使用(参见,例如Gottlieb,美国专利第4, 808,207号)。
[0005] 伯克霍尔德氏菌
[0006] 伯克霍尔德氏菌属是蛋白菌(proteobacteria)的β -分支,包括生存于多种生态 位的多于40种物种(Compant et al.,2008)。伯克霍尔德氏菌属的细菌物种是广泛分布 于土壤和根际的生物体(Coenye and Vandamme, 2003 ;Parke and Gurian-Sherman, 2001) 〇 传统上,它们已知为植物病原体。洋葱伯克霍尔德氏菌(B. c印acia)是第一种发现并鉴 定导致洋葱疾病的病原体(Burkholder, 1950)。一些伯克霍尔德氏菌物种已经发展与 其植物宿主有益的相互作用(参见,例如Cabballero-Mellado et al·,2004, Chen et al.,2007)。还发现一些伯克霍尔德氏菌物种是可能的人病原体(参见,例如Cheng and Currie, 2005和Nierman et al.,2004)。此外,还发现一些伯克霍尔德氏菌物种具有 作为生物控制产品的潜力(参见,例如Burkhead et al·,1994 ;Knudsen et al·,1987; Jansiewicz et al·,1988 ;Gouge et al·,美国专利申请第 2003/0082147 号;Parke et al·,美国专利第 6, 077, 505 号;Casida et al·,美国专利第 6, 689, 357 号;Jeddeloh et al.,W02001055398 ;Zhang et al.,美国专利第7, 141,407号)。该属的一些物种有效地用 于生物修复以净化污染的土壤或地下水(参见,例如Leahy et al. 1996)。此外,还发现一 些伯克霍尔德氏菌物种分泌各种具有蛋白水解、脂质分解和溶血活性的胞外酶以及毒素、 抗生素和铁载体(参见,例如 Ludovic et al.,2007 ;Nagamatsu, 2001)。
[0007] 噁唑、噻唑和吲哚
[0008] 噁唑、噻唑和吲哚广泛分布于植物、藻类、海绵和微生物中。大量的天然产物包含 一个或多个五元噁唑、噻唑和吲哚核心/部分。这些天然产物表现出广谱的可证实的治疗 价值的生物活性。例如,博来霉素 A(Tomohisa et al.)是广泛使用抗癌药物,其引起DNA的 氧化降解,并且使用二噻唑部分以结合其靶DNA序列(Vanderwall et al.,1997)。枯草菌 肽(Ming et al.,2002)是含噻唑啉的肽抗生素,通过与C55-细菌萜醇焦磷酸酯的复合来 抑制细菌细胞壁新生物合成。Thiangazole (Kunze et al.,1993)包含一个噁唑和三个噻唑 啉的串联排列,并且表现出抗病毒活性(Jansen et al.,1992)。不过,其他含噁唑/噻唑的 天然产物如硫链丝菌肽(Anderson et al.,1970)和 GE2270A (Selva et al.,1997)抑制细 菌蛋白合成的翻译步骤。已经报导了多于1000种的来自微生物的具有吲哚骨架的生物碱。 三分之一的这些化合物是肽,质量超过500Da,其中吲哚是色氨酸衍生的。其余三分之二的 结构多样性更高,并且其生物活性似乎涵盖更大的范围,包括抗微生物、抗病毒、细胞毒性、 杀虫、抗血栓形成或酶抑制活性。
【发明内容】
[0009] 本文提供一种非洋葱伯克霍尔德氏菌(non-Burkholderia cepacia)、非植物伯克 霍尔德氏菌(non-Burkholderia plantari)、非唐菖蒲伯克霍尔德氏菌(non-Burkholderia gladioli)、伯克霍尔德氏菌的分离菌株,其具有以下特征:
[0010] a.具有16S rRNA基因序列,其包含正向序列和反向序列,所述正向序列与SEQ ID N0:8、ll和12所示的序列具有至少99. 0%的相同性,所述反向序列与SEQ ID N0:9、10、 13-15所示的序列具有至少99. 0%的相同性;
[0011] b.具有农药活性,尤其是除草、杀虫、杀真菌和杀线虫活性;
[0012] c.产生至少一种选自以下的化合物:
[0013] ⑴化合物,所述化合物具有以下性质:(a)通过液相色谱/质谱(LC/MS)测定的 分子量为约 525-555 ; (b) 1H NMR 值为 6. 22, 5. 81,5. 69, 5. 66, 5. 65, 4. 64, 4. 31,3. 93, 3. 22, 3. 21,3. 15, 3. 10, 2. 69, 2. 62, 2. 26, 2. 23. 1. 74, 1. 15, 1. 12, 1. 05, 1. 02 ; (c) 13C NMR 值为 172 .99, 172. 93, 169. 57, 169. 23, 167. 59, 130. 74, 130. 12, 129. 93, 128. 32, 73. 49, 62. 95, 59. 42 ,57. 73, 38. 39, 38. 00, 35. 49, 30. 90, 30. 36, 29. 26, 18. 59, 18. 38, 18. 09, 17. 93, 12. 51 ;并且 (c)利用水:乙腈(CH3CN)梯度,在反相C-18HPLC柱上进行的高压液相色谱(HPLC)的保留 时间为约10-15分钟;
[0014] (ii)化合物,所述化合物具有噁唑基-吲哚结构,其包含至少1个吲哚部分、至少 1个噁唑部分、至少1个取代的烷基和至少1个羧酸酯基团;至少17个碳以及至少3个氧 和2个氮;
[0015] (iii)化合物,所述化合物具有嚼唑基-苄基结构,其包含至少1个苄基部分、至 少1个噁唑部分、至少1个取代的烷基和至少1个酰胺基团;至少15个碳以及至少2个氧 和2个氮;
[0016] (iv)化合物,所述化合物具有至少1个酯、至少1个酰胺、至少3个亚甲基、至少1 个四氢吡喃糖部分和至少3个烯烃双键、至少6个甲基、至少3个羟基、至少25个碳以及至 少8个氧和1个氮;
[0017] 以及
[0018] d.对脊椎动物动物如哺乳动物、鸟类和鱼类是非致病性(非感染性)的;
[0019] e.对卡那霉素、氯霉素、环丙沙星、哌拉西林、伊米配能以及磺胺甲基异噁唑与甲 氧苄氨嘧啶的组合是易感的;以及
[0020] f.包含脂肪酸 16:0, cyclo 17:0, 16:03-0? 14:0, cyclo 19:0c〇8c,18:0。
[0021] 在具体实施方案中,所述菌株具有与伯克霍尔德氏菌A396菌株(NRRL登录号 B-5O3I9)相同(identifying)的特征。
[0022] 本文公开分离的化合物,其任选地可获得自或源自伯克霍尔德氏菌物种,或者能 够产生这些化合物的生物体,所述化合物可以用来控制各种有害生物,尤其是导致植物病 的有害生物,其实例包括但不限于昆虫、线虫、细菌、真菌。这些化合物也可以用作除草剂。
[0023] 特别地,分离的农药化合物可以包括但不限于:
[0024] (A)化合物,所述化合物具有以下性质:(i)通过液相色谱/质谱(LC/MS)测定 的分子量为约 525-555 ; (ii) 1H NMR δ 值为6.22,5.81,5.69,5.66,5.65,4.64,4.31,3· 93, 3. 22, 3. 21, 3. 15, 3. 10, 2. 69, 2. 62, 2. 26, 2. 23. 1. 74, 1. 15, 1. 12, 1. 05, 1. 02 ; (iii) 13C NMR δ 值为 172. 99, 172. 93, 169. 57, 169. 23, 167. 59, 130. 74, 130. 12, 129. 93, 128. 32, 73. 4 9, 62. 95, 59. 42, 57. 73, 38. 39, 38. 00, 35. 49, 30. 90, 30. 36, 29. 26, 18. 59, 18. 38, 18. 09, 17 .93, 12. 51,并且(iv)利用水:乙腈(CH3CN)梯度,在反相C-18HPLC柱上进行的高压液相色 谱(HPLC)的保留时间为约10-15分钟;
[0025] (B)化合物,所述化合物具有噁唑基-吲哚结构,其包含至少1个吲哚部分、至少1 个噁唑部分、至少1个取代的烷基和至少1个羧酸酯基团;至少17个碳以及至少3个氧和 2个氮;
[0026] (C)化合物,所述化合物具有噁唑基-苄基结构,其包含至少1个苄基部分、至少1 个噁唑部分、至少1个取代的烷基和至少1个酰胺基团;至少15个碳以及至少2个氧和2 个氮;
[0027] (D)化合物,所述化合物具有至少1个酯、至少1个酰胺、至少3个亚甲基、至少1 个四氢吡喃糖部分和至少3个烯烃双键、至少6个甲基、至少3个羟基、至少25个碳以及至 少8个氧和1个氮;以及
[0028] (E)化合物,所述化合物具有至少1个酯、至少1个酰胺、环氧亚甲基(epoxide methylene)、至少1个四氢P比喃糖部分、至少3个稀经双键、至少6个甲基、至少3个羟基、 至少25个碳、至少8个氧和至少1个氮。
[0029] 在一具体实施方案中,分离的化合物可以包括但不限于:
[0030] ㈧化合物,所述化合物具有噁唑基-吲哚结构,其包含至少1个吲哚部分、至少 1个噁唑部分、至少1个取代的烷基、至少1个羧酸酯基团、至少17个碳、至少3个氧和至 少2个氮;并且所述化合物具有以下特性中的至少一种:(i)分子量为约275-435 ; (U)1H NMR δ 值为 8. 44, 8. 74, 8. 19, 7. 47, 7. 31,3. 98, 2. 82, 2. 33, 1. 08 ; (iii) 13C NMR δ 值为 δ 16 3. 7, 161. 2, 154. 8, 136. 1, 129. 4, 125. 4, 123. 5, 123. 3, 121. 8, 121. 5, 111. 8, 104. 7, 52. 2, 37 ? 3, 28. 1,22. 7, 22. 7 ; (iv)利用水:乙腈(CH3CN)梯度溶剂系统和210nm的UV检测,在反相 C-18HPLC柱上进行的高压液相色谱(HPLC)的保留时间为约10-20分钟;(V)UV吸收带为约 226、275、327nm ;
[0031] (B)化合物,所述化合物具有噁唑基-苄基结构,其包含至少1个苄基部分、至少 1个噁唑部分、至少1个取代的烷基和至少1个酰胺基团;至少15个碳和至少2个氧、至少 2个氮;并且所述化合物具有以下特性中的至少一种:(i)通过液相色谱/质谱(LC/MS)测 定的分子量为约 240-290 ; (ii) 1H NMR δ 值为约 L 08, 7. 06, 6. 75, 3. 75, 2. 56, 2. 15, 0· 93, 0 ? 93 ; (iii) 13C NMR δ 值为 158. 2, 156. 3, 155. 5, 132. 6, 129. 5, 129. 5, 127. 3, 121. 8, 115. 2, 1 15. 2, 41. 2, 35. 3, 26. 7, 21. 5, 21. 5 ; (iv)利用水:乙腈(CH3CN)梯度,在反相 C-18HPLC 柱上 进行的高压液相色谱(HPLC)的保留时间为约6-15分钟;以及(V)UV吸收带为约230、285、 323nm ;
[0032] (C)非环氧化合物,所述化合物包含至少1个酯、至少1个酰胺、至少3个亚甲基、 至少1个四氢吡喃糖部分和至少3个烯烃双键、至少6个甲基、至少3个羟基、至少25个碳、 至少8个氧和1个氮;并且所述化合物具有以下特性中的至少一种:(i)通过液相色谱/质 谱(LC/MS)测定的分子量为约 530-580 ; (ii) 1H NMR δ 值为 6. 40, 6. 39, 6. 00, 5. 97, 5. 67, 5. 54, 4. 33, 3. 77, 3. 73, 3. 70, 3. 59, 3. 47, 3. 41, 2. 44, 2. 35, 2. 26, 1. 97, 1. 81, 1. 76, 1. 42, 1. 37 ,1. 16, 1. 12, 1. 04 ; (iii) 13C NMR δ 值为 173. 92, 166. 06, 145. 06, 138. 76, 135. 71,129. 99, 12 6. 20, 123. 35, 99. 75, 82. 20, 78. 22, 76. 69, 71. 23, 70. 79, 70. 48, 69. 84, 60. 98, 48. 84, 36. 89 ,33. 09, 30. 63, 28. 55, 25. 88, 20. 37, 18. 11, 14. 90, 12. 81, 9. 41 ; (iv)利用水:乙腈(CH3CN) 梯度溶剂系统和210nm的UV检测,在反相C-18HPLC柱上进行的高压液相色谱(HPLC)的保 留时间为约7-12分钟;(V)通过ES頂S和NMR数据分析的解读确定的分子式为C 28H45NOiq; (vi)UV 吸收带为约 210-450nm ;
[0033] (D)化合物,所述化合物包含⑴至少1个酯、至少1个酰胺、环氧亚甲基、至少1 个四氢吡喃糖部分和至少3个烯烃双键、至少6个甲基、至少3个羟基、至少25个碳、至少8 个氧和至少 1 个氮;(ii) 13C NMR δ 值为 174. 03, 166. 12, 143. 63, 137. 50, 134. 39, 128. 70, 1 26. 68, 124. 41,98. 09, 80. 75, 76. 84, 75. 23, 69. 87, 69. 08, 68. 69, 68. 60, 48. 83, 41. 07, 35. 4 5, 31. 67, 29. 19, 27. 12, 24. 55, 19. 20, 18. 95, 13. 48, 11. 39, 8. 04 ; (iii)分子式为 C28H43NO9; 并且所述化合物具有以下特性中的至少一种:(D 1H NMR δ值为约6. 41,6. 40, 6. 01,5. 97, 5. 67, 5. 55, 4. 33, 3. 77, 3. 75, 3. 72, 3. 64, 3. 59, 3. 54, 3. 52, 2. 44, 2. 34, 2. 25, 1. 96, 1. 81, 1. 76, 1. 42, 1. 38, 1. 17, 1. 12, 1. 04 ; (ii)利用水:乙腈(CH3CN)梯度,在反相 C-18HPLC 柱上进 行高压液相色谱(HPLC)的保留时间为约6-15分钟;(iii)UV吸收带为约210-450nm,最具 体为约234nm。
[0034] 在更具体的实施方案中,本文提供的化合物包括但不限于:
[0035] (A)具有结构##STR001##的化合物或其农药可接受的盐或立体异构体
[0036]
[0037] 其中M为1、2、3或4 ;N为0、1、2或3 ;p和q独立地为1或2 ;X为0、NH或NR ; RU R2和R3相同或不同,并且独立地为氨基酸侧链部分或氨基酸侧链衍生物,并且R为低 级(lower)链烷基、芳基或芳基烷基部分;
[0038] (B)具有结构##STR002##的化合物
[0040] 其中X、Y和Z各自独立地为一0、一叫或一S,其中R % -H或C。烷基;R i、 私和m各自独立地为一H、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取 代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环基、取代的杂环基、环烷基、取代的环烷基、烷氧基、 取代的烷氧基、硫代烷基、取代的硫代烷基、羟基、卤素、氨基、酰氨基、羧基、一C (0) H、酰基、 氧酰基(oxyacyl)、氨基甲酸酯、磺酰基、磺酰胺或砜基,并且"m"可以位于噁唑环上的任何 位置;
[0041] (C)具有结构##STR002a##的化合物
[0043] 其中&为一H或C「Q。烷基;R 2为烷基酯;
[0044] (D)具有结构##STR003##的化合物
[0046] 其中X和Y各自独立地为一0H、一叫或一S,其中R # -H或C。烷基;R η R2 和m为噁唑环上的取代基,各自独立地为一H、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、 取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环基、取代的杂环基、环烷基、取 代的环烷基、烷氧基、取代的烷氧基、硫代烷基、取代的硫代烷基、羟基、卤素、氣基、醜氣基、 羧基、一C (0) H、酰基、氧酰基、氨基甲酸酯、磺酰基、磺酰胺或砜基;
[0047] (E)具有结构##STR003a##的化合物
[0049] 其中R1为一H或C。烷基;
[0050] (F)具有结构##STR004a##的化合物
[0052] 其中父、¥和2各自独立地为-0、-冊或_3,其中1?为!1或(:1-(: 1。烷基;1?1、1?2為、1?4、 R5、R6、R7、Rs、R9、R 1Q、Rn、R12和R 13各自独立地为H、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔 基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环基、取代的杂环基、环烷基、 取代的环烷基、烷氧基、取代的烷氧基、硫代烷基、取代的硫代烷基、羟基、卤素、氣基、醜氣 基、羧基、-C (0) H、酰基、氧酰基、氨基甲酸酯、磺酰基、磺酰胺或砜基;
[0053] (G)具有结构##STR004b##的化合物
[0054]
[0055] 其中 R2、R3、R4、R5、R6、R 7、Rs、R9、R1Q、Rn、R 12和 R 13各自独立地为 H、烷基、取代的 烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环 基、取代的杂环基、环烷基、取代的环烷基、烷氧基、取代的烷氧基、硫代烷基、取代的硫代烧 基、羟基、卤素、氨基、酰氨基、羧基、-C (0) H、酰基、氧酰基、氨基甲酸酯、磺酰基、磺酰胺或砜 基;
[0056] (H)具有结构##STR004c##的化合物
[0058] 其中&、R2、R3、R4、R 5、R6、R7、Rs、R11各自独立地为H、烷基、取代的烷基、烯基、取代 的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环基、取代的杂环 基、环烷基、取代的环烷基、烷氧基、取代的烷氧基、硫代烷基、取代的硫代烷基、羟基、卤素、 氨基、酰氨基、羧基、-C (0) H、酰基、氧酰基、氨基甲酸酯、磺酰基、磺酰胺或砜基;
[0059] (I)具有结构##STR005##的化合物
[0061] 其中X和Y各自独立地为一0H、一NR1S--S,其中R2各自独立地为一H、烷 基(如C 1-C1。烷基)、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、 杂芳基、取代的杂芳基、杂环基、取代的杂环基、环烷基、取代的环烷基、烷氧基、取代的烷氧 基、硫代烷基、取代的硫代烷基、羟基、卤素、氨基、酰氨基、羧基、--C (0) H、酰基、氧酰基、氨 基甲酸酯、磺酰基、磺酰胺或砜基;
[0062] (J)具有结构##STR006a##的化合物
[0064] 其中X、Y和Z各自独立地为-0、-NR或-S,其中R为H或C1-Ciq烷基;R η R2、R3、 R4、R5、R6、R7、Rs、R n、R12和R 13各自独立地为H、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、 取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环基、取代的杂环基、环烷基、取 代的环烷基、烷氧基、取代的烷氧基、硫代烷基、取代的硫代烷基、羟基、卤素、氣基、醜氣基、 羧基、-C (O) H、酰基、氧酰基、氨基甲酸酯、磺酰基、磺酰胺或砜基。
[0065] 在最具体的实施方案中,所述化合物可以包括但不限于:
[0066] (i) templazole A ;
[0067] (ii) templazole B ;
[0068] (iii) templamide A;
[0069] (iv) templamide B ;
[0070] (v)FR90128 ;
[0076] (XL) FR901465
[0077] 本文还提供获得上述化合物的方法。特别地,所述方法包括培养本文公开的伯克 霍尔德氏菌菌株并产生所述化合物。本文还提供通过分离伯克霍尔德氏菌菌株产生的化合 物来分离这些化合物的方法,所述方法包括从所述伯克霍尔德氏菌菌株的培养物的上清分 离产生的化合物。
[0078] 本文还提供一种组合,其包含:
[0079] (a)选自以下组中的第一物质:(i)源自上文所述的伯克霍尔德氏菌菌株的纯培 养物、细胞部分(fraction)或上清或其提取物,其任选地用作农药;(ii) 一种或多种上文 所述的化合物;
[0080] (b)任选存在的第二物质,其中所述第二物质为化学或生物农药;以及
[0081] (c)任选存在的载体、稀释剂、表面活性剂、辅助剂(adjuvant)或农药中的至少一 种。
[0082] 在一具体实施方案中,所述组合为组合物。在相关的方面,本文提供用所述组合物 包衣的种子。
[0083] 在相关的方面,本文公开一种调节植物中的有害生物侵害的方法,所述方法包括 向所述植物和/或其种子和/或用于使所述植物生长的基质施用一定量的以下物质;和/ 或公开一种调节单子叶苔草或双子叶杂草的出苗和/或生长的方法,所述方法包括向所述 杂草或土壤施用一定量的以下物质:
[0084] (I) (a)上文所述的分离的化合物,和(b)任选存在的其他物质,其中所述物质为 农药(如杀线虫剂、除草剂、杀真菌剂、杀虫剂);或者
[0085] (II)上文所述的组合物或组合;
[0086] 所述量有效地调节有害生物侵害和/或单子叶苔草或双子叶杂草的出苗或生长。
[0087] 在另一相关方面,本文提供上文所述的菌株、培养物、提取物、上清、组合、化合物 用于调节植物中的有害生物侵害的用途,其包括向所述植物和/或其种子和/或用于使所 述植物生长的基质施用;和/或提供一种调节单子叶苔草或双子叶杂草的出苗和/或生长 的方法。
【附图说明】
[0088] 图1显示伯克霍尔德氏菌A396与多噬伯克霍尔德氏菌(Burkholderia multivorans)ATCC 17616的生长速率的比较。
[0089] 图2显示伯克霍尔德氏菌A396提取物对旋花的影响。
[0090] 图3显示伯克霍尔德氏菌A396提取物对藜草(pigweed)的影响。
[0091] 图4显示伯克霍尔德氏菌A396提取物对粉纹夜蛾(Tricoplusia ni)的影响。
[0092] 图5显示伯克霍尔德氏菌A396培养液对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)的影响。
[0093] 图6显不伯克霍尔德氏菌A396培养液对幼年根结线虫(Meloidogyne incognita) 的活动力的影响。
[0094] 图7是为获得templazole和templamide化合物的纯化方案的示意图。
[0095] 图8显示测试FR90128对灰霉菌(Botrytis cinerea)(左)和根腐菌 (Phytophtora sp.)(右)的杀真菌效果的体外测定的结果。
[0096] 图9显示伯克霍尔德氏菌A396培养液在接种和施用14天后对用3000个根结线 虫(Meloidogyne sp.)的卵接种的黄瓜根cv. Toschka的平均虫癭(gall)指数的影响(% 控制)。
[0097] 图10为伯克霍尔德氏菌A396培养液在接种和施用14天后对用3000个根结线虫 的卵接种的黄瓜根CV. Toschka的平均虫癭指数的影响。
【具体实施方式】
[0098] 虽然上述组合物和方法容易进行各种修改和存在替代形式,但是本文会详细说明 示例性实施方案。但是应当了解,并不意图将本发明限于公开的特定形式,相反的是,本发 明意图涵盖落在所附权利要求限定的本发明精神和范围内的所有修改、等同和替代物。 [0099] 当提供数值范围时,应当理解为,在该范围的上限与下限以及该指定范围中任何 其他确定值或中间值之间的,除非上下文另有明确规定,至下限的单位的十分之一的中间 值均包括在其中。也包括较小的范围。其中还包括这些较小的范围的上下限,受指定范围 中任何具体排除的限制。
[0100] 除非另有说