忍冬组培苗培养基及忍冬组培快繁方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物组织培养技术领域，尤其设及一种忍冬的组织培养技术。
【背景技术】
[0002] 忍冬又名金花、银花、金银花、双花、鸯鸯藤等，为忍冬科忍冬属多年生缠绕藤本。 常W其花、叶、茎入药，是我国常用的传统中药。金银花味甘、性寒，具有清热解毒，疏散风热 等功效，常用于痴肿疗疮，喉搏，丹毒，热毒血频，风热感冒，溫病发热。金银花主要含有机酸 类黄酬类及挥发油等成分，具有抗菌消炎、抗肿瘤、保肝、止血、降血脂、降血糖、抗生育、解 酒等作用。
[0003] 金银花用途广泛，一方面作为常用药材，在临床和制剂中使用，另一方面，金银花 也开始由单一的中药逐步向茶叶、饮料，食品和日用化工产品等方面发展，目前由金银花开 发出的商业产品有银花晶、银花酒、银花糖果、金银花茶、金银花露和金银花饮料等，夏秋服 用金银花茶，既能清热解毒、消暑生津、降脂减肥、养颜美容，又能清热解毒、缓解咽喉疼痛， 对辅助治疗糖尿病、眼科疾病、高血压、冠屯、病、慢性肝炎均有显著疗效，是保健养生和防疫 防病的佳品。
[0004] 忍冬为多年生常绿藤本灌木，其适应能力很强，具有很高的观赏价值。忍冬植株单 叶对生，叶形为披针形至卵状楠圆形，小巧可爱，凌冬不调；花朵呈长筒状别致花形，并蒂两 花，形如比翼鸟，其花期从春到秋，花期较长，金银相映交错成簇，花香不绝。枝条细而柔，可 根据人们的需要将其造型，盘扎各式各样的盆景造型，置于窗口或案头，芳香典雅。
[0005] 由此可见忍冬具有较多的药用价值、经济价值和观赏价值。正因为如此，使得忍冬 的市场需求量很大。然而，目前忍冬一般采用杆插、嫁接、分株或压条的繁殖方式，不仅受季 节限制，而且成活率较低，并不能满足忍冬种植业对种苗的需求。且随着繁殖代数的增加， 植株的优良特性和品质会不断降低。
[0006] 植物组织培养又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离 体的器官、组织或细胞W及原生质体，在无菌和适宜的人工培养基及溫度等条件下，诱导出 愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整植株的技术。具有占用空间小，不受地区、季节限 审IJ，培养周期短，不存在变异，可保持原母本的一切遗传特征，投资少，经济效益高等优点。
[0007] 因此，对忍冬组织培养技术加W研究，经过外植体消毒处理、诱导培养、生根培养 W及炼苗移栽等步骤，建立忍冬组织培养快繁技术体系，对于满足市场对忍冬种苗的大量 需求具有重要意义。并为在短期内实现大规模工厂化生产忍冬提供了理论依据和实践基 础。
【发明内容】
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[0008] 本发明的目的是提供一种忍冬组培苗诱导培养基、生根培养基及忍冬组培快繁的 方法。
[0009] 为解决上述问题，本发明提供如下技术方案：
[0010] 本发明公开了一种忍冬组培苗培养基，包括诱导培养基和生根培养基，所述诱 导培养基为：MS+6-BA0. 5-1.Omg/L+NAAO. 05-0. 2mg/L+ 薦糖 30g/L+ 琼脂 7g/l，抑值在 6. 08-6. 12之间；所述生根培养基为：1/2MS+IBA1.Omg/L+薦糖15g/L+琼脂7g/L+活性炭 0. 1-1.Og/L，抑值在 6. 08-6. 12 之间。
[00川优选的，所述诱导培养基中的6-BA为1.Omg/L，NAA为0.Img/L;所述生根培养基 中的活性炭为0. 5g/L。
[0012] 所述诱导培养基和生根培养基：IL培养液分装在15个200ml的瓶中，每瓶分装 60ml左右的培养液。
[0013] 本发明另外公开了一种忍冬组培快繁方法，W带蔽芽的忍冬茎为材料，进行忍冬 组织培养繁殖，其步骤如下：
[0014] (1)外植体消毒处理；
[0015] (2)诱导培养：将经过消毒处理的外植体接种到诱导培养基或上面所述的诱导培 养基中进行丛生芽诱导培养；
[0016] (3)生根培养：待步骤（2)诱导培养的丛生芽长至2-3cm时，从基部切取并分节转 入生根培养基或上面所述的生根培养基上进行生根培养；
[0017] (4)炼苗移栽。
[001引优选的，所述步骤（1)外植体消毒处理：采取当年生带蔽芽的嫩茎段为外植体，剪 去叶，留叶柄基部，将其剪成长度为2-3cm的带蔽芽的小段，淸水洗去表面附着物，在超净 工作台中用75%乙醇消毒20-30S后用无菌水洗2-3次，再用3%的次氯酸钢溶液（加2-3 滴吐溫）消毒l0-15min，用无菌水冲洗3-4次。
[0019] 优选的，所述步骤（2)诱导培养的条件为光照时间为每天14小时，光照强度为 20001X，培养溫度为24-26°C的条件下培养直至形成丛生芽。
[0020] 优选的，所述步骤（3)生根培养的条件为光照时间为每天12小时，光照强度为 20001X，培养溫度为22°C。
[0021] 优选的，所述步骤（4)炼苗移栽：将高约5-6cm的生根试管苗的不开盖炼苗1-2天 后，再打开瓶盖炼苗3-5天；然后轻轻将试管苗从培养瓶中取出，小屯、洗掉根部培养基，再 用1000倍的多菌灵浸泡根部15min，栽入由赔石和河砂按1:1配比混合成的基质中并定植 于大田中。进一步优选的，栽植株行距约为10X15cm，移栽后及时喷水，最后搭上小拱棚，诱 透水，盖上塑料薄膜，用遮荫网遮光，溫度控制在20-25°C，成活后随生长，尽早增加光照强 度。
[0022] 优选的，所述诱导培养基和生根培养基在使用前均需要灭菌，将配制好的培养基 装进灭菌器里，灭菌溫度为120°C，灭菌时间为30分钟，灭菌完后，迅速储存到无菌室。
[0023] 优选的，诱导培养和生根培养中，每瓶均接种1个外植体，W防交叉污染。
[0024]本发明另外公开一种忍冬试管苗炼苗移栽的方法，把生根好的试管苗拿到室溫 下，不开盖炼苗1-2天后，再打开瓶盖炼苗3-5天；然后轻轻将试管苗从培养瓶中取出，小屯、 洗掉根部培养基，再用1000倍的多菌灵浸泡根部15min，栽入由赔石和河砂按1:1配比混合 成的基质中并定植于大田中；栽植株行距约为l〇X15cm，移栽后及时喷水，最后搭上小拱 棚，诱透水，盖上塑料薄膜，用遮荫网遮光，溫度控制在20-25°C，成活后随生长，尽早增加光 照强度。
[00巧]本发明的有益效果在于：忍冬为忍冬科多年生半常绿缠绕木质藤本植物，具有抗 菌、抗病毒、解热、抗炎等多种药理活性。目前忍冬的主要繁殖方式为杆插繁殖，但成活率 低，繁殖系数小，无法满足规模化生产需求，本发明针对传统忍冬栽培模式存在生长周期 长，品质退化，生产成本相对过高等问题。本发明W带蔽芽的忍冬茎为材料对忍冬组织培养 技术加W研究，经过外植体灭菌处理、诱导培养、生根培养W及炼苗移栽等步骤建立了忍冬 组织培养快繁技术体系，对于满足市场对忍冬种苗的大量需求具有重要意义，并为在短期 内实现大规模工厂化生产忍冬提供了理论依据和实践基础。
[0026] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【具体实施方式】
[0027] W下结合具体实例，对本发明进行详细说明。
[0028] 实施例1
[0029] 忍冬最佳组培快繁方法，包括如下步骤：
[0030] 步骤一，几种MS培养基母液的配制。
[0031] MSlOO倍大量元素母液的配制，分别称取硝酸钟190g，硝酸锭165g，憐酸二氨钟 17邑，硫酸儀37g，氯化巧44g，分别加入5个1000 mL烧杯中，加入适量蒸馈水，揽拌溶解，定 容成1000 mL, 5种大量元素母液放置冰箱备用。
[0032] MSlOOO倍微量元素母液的配制，分别称取舰化钟0. 83g，棚酸6. 2g，硫酸儘16. 9邑， 硫酸锋8. 6g，钢酸钢0. 25g，硫酸铜0. 025g，氯化钻0. 025g，至1000血烧杯中，加入适量蒸 馈水，揽拌溶解，定容成1000 mU放置冰箱备用。
[0033] MSlOO倍有机母液的配制，称取肌醇lOg，甘氨酸0. 2g，盐酸硫胺素0.Olg,盐酸化 唉醇0. 05g，烟酸0. 05g。在蒸馈水中依次溶解，定容成1000 mU放置冰箱备用。
[0034] MSlOO倍铁盐的配制，分别称取乙二胺四乙酸二钢3. 73g，硫酸亚铁2. 78g，至 1000 mL烧杯中，加入适量蒸馈水，揽拌溶解，定容成1000 mU放置冰箱备用。
[0035] 步骤二，诱导培养基的配制，分别取MSlOOO倍微量元素母液ImL,MS大量、 MS有机、MS铁盐S种母液各10血，至1000血烧杯中加入适量蒸