一种诱导分蘖洋葱多倍体植株的方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及一种诱导分蘖洋葱多倍体植株的方法。
【背景技术】
[0002]分蘖洋葱(Alliumcepa L.var.mult ip leans Bailey)是洋葱的一个变种，为百合科葱属草本植物。分蘖洋葱具有极高的营养价值和药用价值。它不仅能够改善食物的风味，而且具有杀菌、抗肿瘤、降血压、抗血栓及动脉硬化等生理功能。分蘖洋葱的主要繁殖方式是营养繁殖，以分生鳞茎作为繁殖器官，因此它的遗传变异范围狭窄，种质资源的创新殊为不易。
[0003]分蘖洋葱的耐寒性极强，适应范围极广，在无法满足普通洋葱生育积温的寒地以及夏季炎热而只能在冬季进行葱蒜作物生产的热带地区，分蘖洋葱作为普通洋葱的替代产品具有极为广阔的市场前景。但分蘖洋葱有性繁殖困难，植株较难抽薹开花，致使种质资源仓撕受到了较大限制。多倍体具有相对“巨大性”、部分营养成分含量高、适应性和抗逆性强等特点，因此，通过多倍体诱导可以增强作物的抗逆性、改善作物产品品质、提高作物产量，是创造作物新种质的重要途径。植物多倍体植株具有产量高、抗逆性强的特点，其获得方法常采用秋水仙碱进行多倍体植株的诱导，但秋水仙碱对细胞常具有一定的毒害作用，且在不同作物上诱导效果差别很大。因此，若能找到一种高效的诱导剂，从而获得稳定、高产、抗逆的分蘖洋葱多倍体材料，将有效地丰富分蘖洋葱的种质资源，提高分蘖洋葱的产量，拓宽分蘖洋葱市场。
【发明内容】
:
[0004]本发明为了解决分蘖洋葱遗传资源狭窄、分蘖洋葱多倍体植株的诱导困难以及现有技术中诱导剂成本高且具有毒性的问题，而提出一种分蘖洋葱多倍体植株的诱导方法。
[0005]本发明所述诱导分蘖洋葱多倍体植株的方法按照以下步骤进行:
[0006]一、获得茎尖外植体
[0007]剥除分蘖洋葱鳞茎外皮并用自来水冲洗去皮后的分蘖洋葱鳞茎，切除分蘖洋葱鳞茎顶部2/3后将分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分置于70°C保温箱中加热lOmin，然后对分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分进行杀菌消毒，再用无菌水冲洗3?4次并用无菌滤纸吸干表面水分，最后在无菌条件下用消毒的镊子和解剖针剥离获得0.15mm?0.3mm茎尖外植体；
[0008]所述的对分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分进行杀菌消毒方法是用10%次氯酸钠溶液浸泡10?15min;
[0009]所述的对分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分进行杀菌消毒方法是用质量分数为0.1%的氯化汞水溶液对分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分进行杀菌消毒5?lOmin;
[0010]二、混培法处理茎尖外植体
[0011]在无菌条件下，将步骤一获得的茎尖外植体接入到含0.1?0.2mg/L的2-1P、0.1?
0.2mg/L的NAA和10?40ymo 1 /L的二甲戊灵诱导剂的MS培养基中，在温度25 ± 1°C，光照强度为20001x下，每天光照13h，培养6?8天，然后转移到含0.1?0.2mg/L的2-ΙΡ、0.1?0.2mg/L的NAA的MS培养基中，在温度25 土 1°C，光照强度为20001x下，每天光照13h，培养40天，即完成分蘖洋葱多倍体植株的诱导。
[0012]本发明具备以下有益效果:
[0013]1、本发明方法具有高效率，以本方明方法进行操作，其多倍体植株的诱导率在48.33%，且在诱导过程中无组织死亡；
[0014]2、本发明所采用的诱导剂价格低廉且对人畜低毒，多倍体诱导常用的试剂为秋水仙素，但其价格为330元/克，二甲戊灵的价格为100元/克，折合成使用终浓度，最终成本为100ml秋水仙素6?8元，二甲戊灵0.06?0.10元，相差近百倍；
[0015]3、分蘖洋葱以营养繁殖为主，极少抽薹开花，而分蘖洋葱的多倍体诱导此前尚无人关注，因此，其种质资源创新困难;本发明的诱导方法成功、高效且较为方便即获得分蘖洋葱倍性变化植株，创新分蘖洋葱种质资源。
【具体实施方式】
[0016]本发明技术方案不局限于以下所列举【具体实施方式】，还包括各【具体实施方式】间的任意合理组合。
[0017]【具体实施方式】一:本实施方式诱导分蘖洋葱多倍体植株的方法按以下步骤进行:
[0018]一、获得茎尖外植体
[0019]剥除分蘖洋葱鳞茎外皮并用自来水冲洗去皮后的分蘖洋葱鳞茎，切除分蘖洋葱鳞茎顶部2/3后将分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分置于70°C保温箱中加热lOmin，然后对分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分进行杀菌消毒，再用无菌水冲洗3?4次并用无菌滤纸吸干表面水分，最后在无菌条件下用消毒的镊子和解剖针剥离获得0.15mm?0.3mm茎尖外植体；
[0020]二、混培法处理茎尖外植体
[0021]在无菌条件下，将步骤一获得的茎尖外植体接入到含0.1?0.2mg/L的2-1P、0.1?
0.2mg/L的NAA和10?40ymo 1 /L的二甲戊灵诱导剂的MS培养基中，在温度25 ± 1°C，光照强度为20001x下，每天光照13h，培养6?8天，然后转移到含0.1?0.2mg/L的2-ΙΡ、0.1?0.2mg/L的NAA的MS培养基中，在温度25 土 1°C，光照强度为20001x下，每天光照13h，培养40天，即完成分蘖洋葱多倍体植株的诱导。
[0022]本实施方式具备以下有益效果:
[0023]1、本实施方式方法具有高效率，以本方明方法进行操作，其多倍体植株的诱导率在48.33%，且在诱导过程中无组织死亡；
[0024]2、本实施方式所采用的诱导剂价格低廉且对人畜低毒，多倍体诱导常用的试剂为秋水仙素，但其价格为330元/克，二甲戊灵的价格为100元/克，折合成使用终浓度，最终成本为100ml秋水仙素6?8元，二甲戊灵0.06?0.10元，相差近百倍；
[0025]3、分蘖洋葱以营养繁殖为主，极少抽薹开花，而分蘖洋葱的多倍体诱导此前尚无人关注，因此，其种质资源创新困难。本实施方式的诱导方法成功、高效且较为方便即获得分蘖洋葱倍性变化植株，创新分蘖洋葱种质资源。
[0026]【具体实施方式】二:本实施方式与【具体实施方式】一不同的是:步骤一所述的对分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分进行杀菌消毒方法是用10%次氯酸钠溶液浸泡0?15min。其他步骤和参数与【具体实施方式】一相同。
[0027]【具体实施方式】三:本实施方式与【具体实施方式】一或二不同的是:步骤一所述的对分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分进行杀菌消毒方法是质量分数为0.1 %的氯化汞水溶液对分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分进行杀菌消毒5?lOmin。其他步骤和参数与【具体实施方式】一或二相同。
[0028]【具体实施方式】四:本实施方式与【具体实施方式】一至三之一不同的是:步骤二所述的在温度25±1°C，光照强度为20001x下，每天光照13h，培养6天。其他步骤和参数与【具体实施方式】一至三之一相同。
[0029]【具体实施方式】五:本实施方式与【具体实施方式】一至四之一不同的是:步骤二所述的将步骤一获得的茎尖外植体接入到含0.lmg/L的2-1P、0.lmg/L的NAA和40ymol/L的二甲戊灵诱导剂的MS培养基中。其他步骤和参数与【具体实施方式】一至四之一相同。
[0030]通过以下实施例验证本发明方法效果:
[0031]实施例1:本实施例一种诱导分蘖洋葱多倍体植株的方法按以下步骤进行:
[0032]一、获得茎尖外植体
[0033]剥除分蘖洋葱鳞茎外皮并用自来水冲洗去皮后的分蘖洋葱鳞茎，切除分蘖洋葱鳞茎顶部2/3后将分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分置于70°C保温箱中加热lOmin，然后对分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分进行杀菌消毒，再用无菌水冲洗4次并用无菌滤纸吸干表面水分，最后在无菌条件下用消毒的镊子和解剖针剥离获得0.3mm茎尖外植体;所述的对分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分进行杀菌消毒方法是用10%次氯酸钠溶液浸泡lOmin;
[0034]二、混培法处理茎尖外植体
[0035]在无菌条件下，将步骤一获得的茎尖外植体接入到含0.lmg/1的2-1P、0.lmg/L的NAA和40ymol/L的二甲戊灵诱导剂的MS培养基中，在温度25±1°C，光照强度为20001x下，每天光照13h，培养6天，然后转移到含0.lmg/L的2-1P、0.lmg/L的NAA的MS培养基中，在温度25±1°C，光照强度为20001x下，每天光照13h，培养40天，即完成分蘖洋葱多倍体植株的诱导。
[0036]本实施例具备以下有益效果:
[0037]1、本实施例方法具有高效率，以本方明方法进行操作，其多倍体植株的诱导率在48.33%，且在诱导过程中无组织死亡；
[0038]2、本实施例所采用的诱导剂价格低廉且对人畜低毒，多倍体诱导常用的试剂为秋水仙素，但其价格为330元/克，二甲戊灵的价格为100元/克，折合成使用终浓度，最终成本为100ml秋水仙素6?8元，二甲戊灵0.06?0.10元，相差近百倍；
[0039]3、分蘖洋葱以营养繁殖为主，极少抽薹开花，而分蘖洋葱的多倍体诱导此前尚无人关注，因此，其种质资源创新困难。本实施例的诱导方法成功、高效且较为方便即获得分蘖洋葱倍性变化植株，创新分蘖洋葱种质资源。
【主权项】
1.一种诱导分蘖洋葱多倍体植株的方法，其特征在于该方法按以下步骤实现: 一、获得茎尖外植体 剥除分蘖洋葱鳞茎外皮并用自来水冲洗去皮后的分蘖洋葱鳞茎，切除分蘖洋葱鳞茎顶部2/3后将分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分置于70°C保温箱中加热lOmin，然后对分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分进行杀菌消毒，再用无菌水冲洗3?4次并用无菌滤纸吸干表面水分，最后在无菌条件下用消毒的镊子和解剖针剥离获得0.15mm?0.3mm茎尖外植体； 二、混培法处理茎尖外植体 在无菌条件下，将步骤一获得的茎尖外植体接入到含0.1?0.2mg/L的2-1P、0.1?0.2mg/L的NAA和10?40ymo 1 /L的二甲戊灵诱导剂的MS培养基中，在温度25 ± 1°C，光照强度为20001x下，每天光照13h，培养6?8天，然后转移到含0.1?0.2mg/L的2-ΙΡ、0.1?0.2mg/L的NAA的MS培养基中，在温度25 土 1°C，光照强度为20001x下，每天光照13h，培养40天，即完成分蘖洋葱多倍体植株的诱导。2.根据权利要求1所述的一种诱导分蘖洋葱多倍体植株的方法，其特征在于步骤一所述的对分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分进行杀菌消毒方法是用10%次氯酸钠溶液浸泡10?15min03.根据权利要求1所述的一种诱导分蘖洋葱多倍体植株的方法，其特征在于步骤一所述的对分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分进行杀菌消毒方法是用质量分数为0.1 %的氯化汞水溶液对分蘖洋葱鳞茎顶部剩余部分进行杀菌消毒5?lOmin。4.根据权利要求1所述的一种诱导分蘖洋葱多倍体植株的方法，其特征在于步骤二所述的在温度25± 1°C，光照强度为20001x下，每天光照13h，培养6天。5.根据权利要求1所述的一种诱导分蘖洋葱多倍体植株的方法，其特征在于步骤二所述的将步骤一获得的茎尖外植体接入到含0.lmg/L的2-1P、0.lmg/L的NAA和40ymol/L的二甲戊灵诱导剂的MS培养基中。
【专利摘要】一种诱导分蘖洋葱多倍体植株的方法，涉及一种分蘖洋葱多倍体植株的诱导方法。本发明的目的是为了解决分蘖洋葱遗传资源狭窄、分蘖洋葱多倍体植株的诱导困难以及现有技术中诱导剂成本高且具有毒性的问题。本发明方法：步骤一：获得茎尖外植体；步骤二：混培法处理茎尖外植体。本发明方法创新分蘖洋葱种质资源，具有高效率，诱导率在48.33％，且在诱导过程中无组织死亡，采用的诱导剂价格低廉且对人畜低毒。本发明用于分蘖洋葱多倍体植株的诱导。
【IPC分类】A01H4/00, A01H1/08
【公开号】CN105409765
【申请号】CN201610048449
【发明人】王勇, 陈典, 宋策, 颜井贵, 曲春秋
【申请人】东北农业大学
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2016年1月25日