一种桔梗花药愈伤组织的诱导方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种桔梗花药愈伤组织的诱导方法，属于生物领域。
【背景技术】
[0002]桔梗属桔梗科桔梗属多年生直立草本植物，别名铃铛花、包袱花、道拉基(朝鲜语)等。近代药理及临床医学研究表明，桔梗根有祛痰、镇咳、抗炎、降血压、降血糖、抗胆碱、抗过敏、抗肿瘤及提高免疫力等广泛的药理活性。
[0003]桔梗是两性花，在自然状态下自交结实率低，主要靠异花授粉。所以现在自然界中生长的桔梗群体的遗传基础是高度杂合的群体，这给桔梗的遗传研究和育种实践带来很多困难。通过花药培养或未授精的胚珠培养得到单倍体植株，再经染色体加倍得到纯系，已在很多植物中获得成功。单倍体植株经染色体加倍后，在一个世代中即可出现纯合的二倍体，从中选出的优良纯合系后代不分离，表现整齐一致，可缩短育种年限。
[0004]所以，诱导花药生成愈伤组织的培养基及分化成苗的分化培养基即成为关键。
[0005]本发明旨在提供一种桔梗花药愈伤组织的诱导方法，其利用多种独特中草药提取物，成本低廉，可以快速高效对桔梗花药愈伤组织进行诱导，而且诱导率高，诱导时间短，存活率也很高。
【发明内容】
[0006]基于【背景技术】存在的技术问题，本发明针对【背景技术】存在的问题，提供一种桔梗花药愈伤组织的诱导方法，其利用多种独特中草药提取物，成本低廉，可以快速高效对桔梗花药愈伤组织进行诱导，而且诱导率高，诱导时间短，存活率也很高。
[0007]本发明的目的通过以下技术方案实现:
一种桔梗花药愈伤组织的诱导方法，其特征在于，步骤如下:
(1)预处理:
取多年生“三成紫花”处于单核靠边期的花药；取花蕾放在5°C冰箱下处理30min，然后放在15°C下处理30min ；
(2)诱导培养:
接种前用流水冲洗3min，在无菌条件下取花蕾投入75%的酒精浸泡30s，再放入0.1%的汞中消毒15min，用无菌水冲洗6次，然后剥取花药，一分为二，接种于诱导愈伤组织的培养基上，置于24-26°C培养室进行暗培养，诱导阶段均为暗培养，时间为15d ;
所述诱导愈伤组织的培养基为以MS为基础培养基，蔗糖16.5g/L、琼脂3.5g/L，复方中药提取液 0.3 g/L、6_BA 1.0mg/L、pH6.5 ；
所述复方中药提取液的制备方法为:
如下所述均为质量份；
取8-10份黄芪，1-2份天山雪莲，2份党参，1份益母草，1份茯苓，0.8-1.0份山楂叶，上述药物按传统煎煮方法加300份煎煮至30份水时，将药液过滤，分装并3°C保存； (3 )分化培养:
分化培养基为:以MS为基础培养基，蔗糖12.8g/L、琼脂3.5g/L、6-BA 1.0mg/L,NAA0.6 mg/L为分化培养基，分化培养2周。
[0008]本发明首次将中草药萃取液用于桔梗花药愈伤组织的诱导，其效果好，成本低:诱导率高达99.8%以上，接种到分化培养基后，分化率为78.9-99.3%。
[0009]中草药的配伍既可选择单味药，也可选择多味药组成的复方，但不是一些药物的简单粗制组合，无“法”无“方”无“配伍”，在理论联系实践基础上，考虑到现代药物本身的性能有选择地将药物配伍起来使用，充分发挥药物的整体作用。
[0010]本发明在传统中草药理论的基础上，一种桔梗花药愈伤组织的诱导方法，其利用多种独特中草药提取物，成本低廉，可以快速高效对桔梗花药愈伤组织进行诱导，而且诱导率高，诱导时间短，存活率也很高。
[0011]本发明的有益之处在于:
(1)本发明利用多种独特中草药提取物，成本低廉，可以快速得到愈伤组织，且长势良好，分化率尚，具体而目是99.8%以上。
[0012](2)接种到分化培养基后，分化率为78.9-99.3%,然后炼苗、田间移栽、成活率达98%以上。
【具体实施方式】
[0013]实施例1:
桔梗花药愈伤组织的诱导方法，其特征在于，步骤如下:
(1)预处理:
取多年生“三成紫花”处于单核靠边期的花药；取花蕾放在5°C冰箱下处理30min，然后放在15°C下处理30min ；
(2)诱导培养:
接种前用流水冲洗3min，在无菌条件下取花蕾投入75%的酒精浸泡30s，再放入0.1%的汞中消毒15min，用无菌水冲洗6次，然后剥取花药，一分为二，接种于诱导愈伤组织的培养基上，置于24°C培养室进行暗培养，诱导阶段均为暗培养，时间为15d ;
所述诱导愈伤组织的培养基为以MS为基础培养基，蔗糖16.5g/L、琼脂3.5g/L，复方中药提取液 0.3 g/L、6_BA 1.0mg/L、pH6.5 ；
所述复方中药提取液的制备方法为:
如下所述均为质量份；
取10份黄芪，1份天山雪莲，2份党参，1份益母草，1份茯苓，1.0份山楂叶，上述药物按传统煎煮方法加300份煎煮至30份水时，将药液过滤，分装并3°C保存；
(3 )分化培养:
分化培养基为:以MS为基础培养基，蔗糖12.8g/L、琼脂3.5g/L、6-BA 1.0mg/L,NAA0.6 mg/L为分化培养基，分化培养2周。
[0014]结果:诱导率高达99.8%以上，接种到分化培养基后，分化率为78.9%，田间移栽、成活率达98%以上。
[0015]实施例2: 桔梗花药愈伤组织的诱导方法，其特征在于，步骤如下:
(1)预处理:
取多年生“三成紫花”处于单核靠边期的花药；取花蕾放在5°C冰箱下处理30min，然后放在15°C下处理30min ；
(2)诱导培养:
接种前用流水冲洗3min，在无菌条件下取花蕾投入75%的酒精浸泡30s，再放入0.1%的汞中消毒15min，用无菌水冲洗6次，然后剥取花药，一分为二，接种于诱导愈伤组织的培养基上，置于26°C培养室进行暗培养，诱导阶段均为暗培养，时间为15d ;
所述诱导愈伤组织的培养基为以MS为基础培养基，蔗糖16.5g/L、琼脂3.5g/L，复方中药提取液 0.3 g/L、6_BA 1.0mg/L、pH6.5 ；
所述复方中药提取液的制备方法为:
如下所述均为质量份；
取8份黄芪，2份天山雪莲，2份党参，1份益母草，1份茯苓，0.8份山楂叶，上述药物按传统煎煮方法加300份煎煮至30份水时，将药液过滤，分装并3°C保存；
(3 )分化培养:
分化培养基为:以MS为基础培养基，蔗糖12.8g/L、琼脂3.5g/L、6-BA 1.0mg/L,NAA0.6 mg/L为分化培养基，分化培养2周。
[0016]结果:诱导率高达99.8%以上，接种到分化培养基后，分化率为99.3%，田间移栽、成活率达98%以上。
[0017]实施例3:
桔梗花药愈伤组织的诱导方法，其特征在于，步骤如下:
(1)预处理:
取多年生“三成紫花”处于单核靠边期的花药；取花蕾放在5°C冰箱下处理30min，然后放在15°C下处