征基本一致，初步判断菌株 YN2010-KC属于芽抱杆菌度acillusspp.)。
[0038] 2. 2、生理生化鉴定
[0039] 菌株革兰氏染色、芽抱染色、淀粉水解、葡萄糖利用、巧樣酸盐利用、V-P反应、接触 酶反应、硝酸盐还原、明胶液化等均呈阳性。
[0040] 3、解淀粉芽抱杆菌YN2010-KC的保藏
[0041] 经上述鉴定表明所分离获得的菌株为解淀粉芽抱杆菌度acillus amyloliquefaciens)，其代号为YN2010-KC，所述的解淀粉芽抱杆菌Bacillus amyloliquefaciensYN2010-KC于2012年1月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员 会普通微生物中屯、（简称：CGMCC)，保藏号为CGMCCNo. 5722,并于2012年1月12日检测 为存活。该普通微生物中屯、地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101。
[0042] 实施例2本发明微生物诱捕剂的制备方法，包括W下步骤：
[0043] (1)将-80°C保存的解淀粉芽抱杆菌度acillusamyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCCNo. 5722接种在液体LB培养基上，35 °C培养24h，得活化的解淀粉芽抱杆菌 度acillusamyloliquefaciens)YN2010-KCCGMCCNo. 5722,按 10%接种量，将活化的所述 解淀粉芽抱杆菌度acillusamyloliquefaciens)YN2010-KCCGMCCNo. 5722接种到种子培 养基，在培养溫度35°C、转速12化pm/min条件下，摇床培养36h，得到一级种子液，所述种子 培养基为液体LB培养基，pH7. 0~7. 2 ; W44] 似按10%接种量，将一级种子液转接到种子罐内的二级种子培养基，在35。转 速10化pm/min，通气量为lOOOL/h，罐压保持在0. 02~0. 03MPa条件下培养36~4她，得 到二级种子液；得到二级种子液；所述二级种子培养基由W下质量分数的W下成分组成： 玉米粉0.5%，黄豆粉1%，薦糖0.5%，蛋白腺0.3%，鱼粉0. 1%，Μ拆〇4. 7&0 0.02%， CaC〇3 0. 4%，（NH4)2S04 0 . 03%，余量为水，pH7. 0~7. 2 ;所述二级种子培养基于121°C灭 菌30min，待降溫至30°C，接入一级种子液； W45] 做按10%接种量，将二级种子液接种到发酵罐内的发酵培养基，在35。转速 100巧m/min，通气量为100(K)LA、罐压保持在0. 02~0. 03MPa条件下培养48~72h，培养 后的发酵液中解淀粉芽抱杆菌度acillusamyloliquefaciens)YN2010-KCCGMCCNo. 5722 的有效活菌数^ 3X109c化/ml时，将发酵液用医用塑料瓶包装，即为所述微生物诱捕剂，所 述发酵培养基与步骤（2)所述二级种子培养基相同。
[0046] 本发明微生物诱捕剂通过实施例2所述的微生物诱捕剂的制备方法制备得到。
[0047] 实施例3本发明微生物诱捕剂与其它诱剂对相橘小实蛹诱捕的对比试验
[0048] 在云南省元江县相橘园内进行诱捕效果试验，同时与"果瑞特"果蛹引诱剂，（属蛋 白巧剂，市售）、甲基下香酪（属性诱剂，市售）和水（空白对照）进行对比。本发明微生物 诱捕剂用量50ml/瓶，果瑞特果蛹引诱剂用量50ml/瓶，甲基下香酪用量3ml/瓶。
[0049] 每个塑料瓶装上述一种引诱剂，旋紧瓶盖，在距离瓶内液面2cm的瓶壁上均布4个 孔，所述各孔的孔径为5mm。于2015年5月16日中午进行田间释放，将塑料瓶悬挂于离相 橘地0.5-1. 5米处。两天后诱到相橘小实蛹数量（头）见表1。可见，本发明微生物诱捕剂 诱虫数量均高于果瑞特果蛹引诱剂和甲基下香酪，且雌虫率高达51. 67%。本发明微生物诱 捕剂诱虫数量比果瑞特果蛹引诱剂增加23. 71%，比甲基下香酪增加18. 81%。本发明微生 物诱捕剂比果瑞特果蛹引诱剂诱到的雌虫增加37. 78%，比甲基下香酪诱到的雌虫增加30 倍。
[0050] 表1本发明微生物诱捕剂对相橘小实蛹引诱试验
[0051]
[0052] 实施例4本发明微生物诱捕剂对相橘果实蛹诱捕试验
[0053] 在云南省河口县南溪农场进行果实蛹诱捕试验，试验试剂：本发明微生物诱捕剂。 装试剂的塑料瓶及操作与实施例3相同，本发明微生物诱捕剂用量50ml/瓶，于2014年7 月5日中午装有试剂的塑料瓶悬挂于离相橘地0. 5-1. 5米处，自投料后1天、2天和3天调 查各瓶中虫量见表2,可见，本发明诱捕剂发酵产生挥发性蛋白质类等化合物引诱果实蛹食 用，效果显著，且雌雄同诱。
[0054] 表2本发明微生物诱捕剂诱捕果实蛹（相橘大实蛹、小实蛹、番石恼实蛹、瓜实蛹 等）的效果 阳化引
[0056] 实施例5本发明微生物诱捕剂对相橘大实蛹防治效果的对比试验
[0057] 在云南省蒙自县相橘园内进行诱捕相橘大实蛹试验，同时与甲基下香酪进行对 比。本发明微生物诱捕剂用量50ml/瓶，甲基下香酪用量50ml/瓶。
[0058] 装各试剂的塑料瓶及操作与实施例3相同，于2014年12月4日中午将装有试剂 的塑料瓶悬挂于离相橘地0. 5-1. 5米处，自投料后1天、2天和3天调查各瓶中虫量见表3， 可见，用本发明微生物诱捕剂发酵产生挥发性蛋白质类等化合物引诱相橘大实蛹食用，除 第一天诱虫量低于性诱剂甲基下香酪外，其它时间内诱捕大实蛹的效果均优于性诱剂甲基 下香酪，且雌雄同诱。Ξ天内，本发明微生物诱捕剂诱捕相橘大实蛹数量比甲基下香酪增加 64. 43%，诱捕的相橘大实蛹雌虫数量比甲基下香酪增加33. 25倍。
[0059] 表3本发明微生物诱捕剂诱捕相橘大实蛹的效果 [00601
[0061] 实施例6本发明微生物诱捕剂与黄板田间诱虫对比试验
[0062] 在云南省蒙自县番茄蔬菜基地上进行诱捕效果试验，同田与30X30cm黄板进行 了对比。每个黄色塑料瓶装50ml本发明微生物诱捕剂，旋紧瓶盖，在距离瓶内液面2cm处 的瓶壁上均布4个孔，所述各孔的孔径为5mm。于2015年6月16日中午进行田间释放，将 塑料瓶悬挂于距地面0. 5~0. 8米高，每亩悬挂塑料瓶8个，相邻的塑料瓶间隔5~10m; 在同田，将黄板悬挂于距地面0. 5-0. 8米高，每亩悬挂黄板8个，相邻的黄板间隔5~10m。 每两天后诱到美洲斑潜蛹数量（头）见表4。可见，本发明微生物诱捕剂平均每天诱虫数量 均高于黄板，8天内，本发明微生物诱捕剂诱虫1988头，黄板诱虫379头，是黄板诱虫量的 5. 2 倍。
[0063] 表4本发明微生物诱捕剂和黄板对美洲斑潜蛹引诱的对比试验
[0064]
阳〇化]实施7本发明微生物诱捕剂对美洲斑潜蛹雌雄数量诱捕试验
[0066] 在云南省江川县牛魔村蔬菜基地进行班豆美洲斑潜蛹诱捕试验，将50ml本发明 微生物诱捕剂直接加入外壁贴有黄色胶带塑料瓶中，旋紧瓶盖，在距离瓶内液面2cm处的 瓶壁上均布4个孔，所述各孔的孔径为5mm。于2015年2月3日中午悬挂于距离地面0. 5~ 0. 8米高，自投料后1天、2天和3天调查各瓶中虫量见表5,可见，用本发明微生物诱捕剂发 酵产生的挥发性蛋白质类等化合物引诱美洲斑潜蛹食用，效果显著，且雌雄同诱，雌虫率达 55 ~60%。
[0067] 表5本发明微生物诱捕剂捕雌雄美洲斑潜蛹统计
[0068]
【主权项】
1. 一种微生物诱捕剂，其特征在于：其活性成分为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus 已11^1〇119脱^1(^6118)￥吧010-1((：〇61〇：吣.5722 的发酵液。2. 根据权利要求1所述的一种微生物诱捕剂，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No. 5722 的发酵液通过以下方法制备得 到： (1) 按5~10 %接种量，将活化的所述解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KCCGMCCNo. 5722接种到种子培养基，在培养温度35°C、转速 120rpm/min条件下，摇床培养36~48h，得到一级种子液，所述种子培养基为液体LB培养 基，pH7. 0 ~7. 2 ; (2) 按10~12 %接种量，将一级种子液转接到种子罐内的二级种子培养基，在28~ 37°C，转速100rpm/min，通气量为1000L/h，罐压保持在0. 02~0. 03MPa条件下培养36~ 48h，得到二级种子液；所述二级种子培养基由以下质量分数的以下成分组成：玉米粉 0· 3~0· 5%，黄豆粉1~1. 5%，蔗糖0· 2~0· 5%，蛋白胨0· 1~0· 3%，鱼粉0· 1~0· 3%， MgS04 · 7H20 0· 02 ~0· 04%，CaC03 0· 4 ~0· 8%，（NH4)2S040 . 03 ~0· 06%，余量为水，pH 7. 0 ~7. 2 ; (3) 按10~12%接种量，将二级种子液接种到发酵罐内的发酵培养基，在28~37°C， 转速100rpm/min，通气量为10000L/h、罐压保持在0. 02~0. 03MPa条件下培养48~72h， 培养后的发酵液中解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens)YN2010-KCCGMCC No. 5722的有效活菌数3 3X109cfu/ml时，该发酵液即为所述解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KCCGMCCNo. 5722的发酵液，所述发酵培养基与步骤（2)所述 二级种子培养基相同。3. 权利要求1或2所述的微生物诱捕剂在防治实蝇类害虫的应用。4. 权利要求1或2所述的微生物诱捕剂在防治美洲斑潜蝇的应用。5. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的应用是将所述微生物诱捕剂装入 塑料瓶内，每瓶的装入量为50~100mL，旋紧瓶盖，在距离瓶内液面1~3cm的瓶壁上均布 4个孔，所述各孔的孔径为4~6mm;将塑料瓶悬挂于离地面0. 5~1. 5米处，每亩悬挂塑料 瓶8~10个，相邻的塑料瓶间隔5~7m;每隔20~30天向塑料瓶内添加一次所述微生物 诱捕剂25~50mL。
【专利摘要】本发明公开一种微生物诱捕剂及应用。该诱捕剂的活性成分为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus？amyloliquefaciens)YN2010-KC？CGMCC？No.5722发酵液，有效活菌数含量≧3×109cfu/ml。该诱捕剂散发出的特殊气味能引诱实蝇、果蝇和美洲斑潜蝇取食，雌雄同捕，作用周期长，成本低，不含有任何化学有毒药剂，不杀死和不杀伤任何其他非靶标生物，属环境友好型生物诱捕剂。对柑橘小实蝇的诱捕：比对照增加18.81～23.71％，比对照诱到的雌虫增加37.78％～30倍。对柑橘大实蝇的诱捕：比对照增加64.43％，诱捕雌虫数增加33.25倍。对美洲斑潜蝇的诱捕：雌虫率占55～60％。CGMCC No.572220120112
【IPC分类】A01N63/02, C12N1/20, C12R1/07, A01P19/00
【公开号】CN105410032
【申请号】CN201510958305
【发明人】何月秋, 吴毅歆, 何鹏搏, 谢兰芬, 杨发祥
【申请人】云南省微生物发酵工程研究中心有限公司
【公开日】2016年3月23日
【申请日】2015年12月21日