一种猕猴桃增殖培养基及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001 ]本发明设及一种雜猴桃增殖培养基及其制备方法和应用，属于植物无性繁殖材料
技术领域。
【背景技术】
[0002] 雜猴桃属雜猴桃科(Actinidiaceae)雜猴桃属(Actinidia)多年生藤本植物，是20 世纪最早经人工驯化栽培的四大野生果树之一，其果实具有丰富的营养价值和良好的药用 价值，尤含大量Vc，享有"Vc之王"美称。红阳雜猴桃属于中华系列雜猴桃，是雜猴桃家族中 罕见的红屯、雜猴桃，是在四川称猴桃原产地苍溪发现的自然变异品种，营养价值极高，且果 肉细嫩，口感香甜，早果性、丰产性和抗逆性强，深受市场欢迎，具有极高的推广前景。
[0003] 红阳雜猴桃是雌雄异株，采用种子繁殖，周期长，且不易获得大批雌株群体。目前 红阳雜猴桃的常规育苗方法包括嫁接法和杆插法。但嫁接苗童期生长缓慢，育苗周期达两 年W上;杆插苗成活率和繁殖效率低。仅通过传统方式获得种苗已经不能满足日益扩大的 市场需求。因而采用组织培养技术繁殖雜猴桃成为重要的良种繁育途径。W往对红阳雜猴 桃的研究中，普遍WMS为基本培养基，得出丛生芽诱导率最高只有27.27%，褐化率高，而且 雜猴桃组培苗节间距离较短，极大地影响了雜猴桃快繁速度，制约了红阳雜猴桃的规模化 生产。
【发明内容】
[0004] 发明目的：为了克服现有技术中存在的不足，本发明提供一种降血糖燕麦膳食纤 维及其制备方法。
[0005] 技术方案:为实现上述目的，本发明提供了一种雜猴桃增殖培养基，其主要由改良 WPM培养基、6-节氨基腺嚷岭(6-BA)、糞乙酸(NAA)、赤霉素(GA)、薦糖、薦糖和琼脂所制成； 所述改良WPM培养基主要由大量元素、微量元素、铁盐和有机物所制成。
[0006] 作为优选，所述6-节氨基腺嚷岭的浓度为l-2mg/L所述糞乙酸的浓度为0.1-0.所述赤霉素的浓度为0.2-0.5mg/l;所述薦糖的浓度为30g/l;所述琼脂的浓度为 8g/L〇
[0007] 作为另一种优选，所述培养基的抑为5.6，所述雜猴桃为红阳雜猴桃。
[000引作为另一种优选，所述大量元素由硝酸锭、硝酸钟、二水氯化巧、四水硝酸巧、硫酸 儀、硫酸钟和憐酸二氨钟所提供;所述微量元素由硫酸儘、硫酸锋、硫酸铜、钢酸钢和棚酸所 提供;所述铁盐由乙二胺四乙酸二钢和硫酸亚铁所提供;所述有机物为烟酸、盐酸硫胺素、 盐酸邮唉醇、肌醇和甘氨酸。
[0009] 作为另一种优选，所述每一升改良WPM培养基中包括如下：
[0010] 412.5mg硝酸锭、400mg硝酸钟、96mg二水氯化巧、278mg四水硝酸巧、370mg硫酸儀、 900mg硫酸钟和340mg憐酸二氨钟，提供大量元素；
[0011] 22.3mg硫酸儘、8.6mg硫酸锋、0.025mg硫酸铜、0.25mg钢酸钢和6.2mg棚酸，提供微 量元素；
[001 ^ 37. an拓二胺四乙酸二钢和27.8mg硫酸亚铁，提供铁盐：；
[0013] 0.5mg烟酸、0.5mg盐酸硫胺素、0.5mg盐酸邮唉醇、lOOmg肌醇和2mg甘氨酸，提供有 机物；
[0014] 本发明还提供了所述雜猴桃增殖培养基的制备方法，包括W下步骤：
[0015] (1)配制改良WPM培养基：
[0016] ①50倍大量元素母液的配制：取硝酸锭、硝酸钟、硫酸儀和硫酸钟，用蒸馈水溶解 定容配成母液I;取二水氯化巧和四水合硝酸巧，用蒸馈水溶解定容配成母液Π ;取憐酸二 氨钟，用蒸馈水溶解定容配成母液m;
[0017] 使用时按用量分别取母液I，母液Π ，母液虹；
[0018] ②200倍的微量元素母液的配制：取硫酸儘，硫酸锋，硫酸铜，钢酸钢和棚酸，用蒸 馈水溶解定容配成母液IV，使用时按用量取母液IV;
[0019] ③100倍的邸TA-铁盐母液的配制：取乙二胺四乙酸二钢，加蒸馈水溶解，然后加入 硫酸亚铁，加热溶解，定容，配成母液V，使用时按用量取母液V ;
[0020] ④100倍的有机成分母液的配制：取烟酸，盐酸硫胺素，盐酸化唉醇，肌醇和甘氨 酸，用蒸馈水溶解定容，配成母液VI，使用时按用量取母液VI;
[0021 ]按照用量取各种母液混合，得未定容的改良WPM培养基；
[0022] (2)激素母液的配制:称取糞乙酸，先用体积浓度95%的酒精溶解，然后加水定容， 配成的糞乙酸母液，使用时按用量取糞乙酸母液;称取赤霉素，先用体积浓度95%的酒精溶 解，然后加水定容，配成赤霉素母液，使用时按用量取赤霉素母液;称取6-节氨基腺嚷岭，先 用化0田容解，然后加水定容，配成6-节氨基腺嚷岭母液，使用时按用量取6-节氨基腺嚷岭母 液；
[0023] (3)取步骤（1)所得未定容的改良WPM培养基，再加入琼脂，薦糖，6-节氨基腺嚷岭 母液，糞乙酸母液，加热溶解后定容至，调抑值至5.6，灭菌;待培养基溫度降至60-70°C时， 采用过滤灭菌法按照用量添加步骤(2)中配制的赤霉素母液，分装，即得。
[0024] 作为优选，所述雜猴桃增殖培养基的制备方法包括W下步骤
[0025] (1)配制改良WPM培养基：
[00%]①50倍大量元素母液的配制:分别称取20.625g硝酸锭、20g硝酸钟、18.5g硫酸儀、 45g硫酸钟，然后用蒸馈水溶解后定容至1000ml，配成母液I;
[0027]称取4.8g二水氯化巧、13.9g四水合硝酸巧，用蒸馈水溶解后定容至1000ml，配成 母液Π ;
[00%]称取17g憐酸二氨钟，用蒸馈水溶解后定容至1000ml，配成母液虹；
[0029] 使用时配制每升增殖培养基取母液I，母液Π ，母液虹各20ml;
[0030] ②200倍的微量元素母液的配制:称取4.46g硫酸儘，1.72g硫酸锋，0.005g硫酸铜， 0.05g钢酸钢，1.24g棚酸，用蒸馈水溶解后定容至1000ml，配成母液IV，使用时配制每升增 殖培养基取5ml母液IV;
[0031] ③100倍的抓TA-铁盐母液的配制：称取3.7：3g乙二胺四乙酸二钢，加200ml蒸馈水 进行溶解，再称取2.7?硫酸亚铁加入溶解，溶解时需要用电热炉加热，当溶液呈浅栋色透 明液体时，停止加热，加蒸馈水定容至lOOOmL，配成母液V，使用时配制每升增殖培养基取 10ml母液V;
[0032] ④100倍的有机成分母液的配制:称取0.05g烟酸，0.05g盐酸硫胺素，0.05g盐酸化 唉醇，lOg肌醇，0.地甘氨酸，用蒸馈水溶解后混合定容至1000ml，配成母液VI，使用时配制 每升增殖培养基取10ml母液VI;
[0033] 按上述每升用量取各种母液混合，得未定容的改良WPM培养基；
[0034] (2)激素母液的配制:称取50mg NAA，先用5ml体积浓度95%的酒精溶解，然后加水 定容至100ml，配成0.5mg ·血-1的NAA母液，使用时配制每升增殖培养基取0.2-0.4mLNAA母 液；
[0(X3日]称取50mg赤霉素 GA3,先用5ml体积浓度95%的酒精溶解，然后加水定容至100ml， 配成0.5mg · mL-i的GA3母液，使用时配制每升增殖培养基取0.4-lmL赤霉素 GA3母液；
[0036] 称取50mg 6-BA，先用5ml O.lmol · L-1化0H溶解，然后加水定容至lOOmL，配成 0.5mg · mL-i的6-BA母液，使用时配制每升增殖培养基取2-4mL6-BA母液；
[0037] (3)取步骤（1)所得未定容的改良WPM培养基，再加入琼脂8g，薦糖30g，6-BA母液2-4mL，NAA母液0.2-0.4mL，加热溶解后定容至1L，用0 . Imol · L-1盐酸或氨氧化钢调pH值至 5.6,灭菌;待培养基溫度降至60-70°C时，在接种台上采用过滤灭菌法添加步骤(2)中配制 的GA3母液，每升增殖培养基加0.4-lmL，然后在接种台上分装培养基。
[0038] 本发明最后提供了所述雜猴桃增殖培养基的应用，即利用所述培养基培养雜猴桃 的方法，包括W下步骤:将雜猴桃无菌苗接种至配制好的灭菌的增殖培养基上，在光照强度 3000LUX的条件下培养，培养条件为:溫度25-27°C，每日光照时间为16小时。
[0039] 有益效果:相对于现有技术，本发明所得雜猴桃增殖培养基，能够克服雜猴桃节间 距离较短，繁殖系数较低的问题，显著提高雜猴桃增殖系数及萌芽质量，同时能够有效降低 褐化率和污染率，从而满足继代增殖的需要，促进快繁体系的建立。
【具体实施方式】
[0040] 下面结合实施例对本发明作更进一步的说明。
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