2-乙酰氨基-1,5,-脱水-2-脱氧-d-葡萄糖醇在制备抗水稻白叶枯病菌活性药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于农业微生物学技术领域，具体设及2-乙酷氨基-1，5，-脱水-2-脱氧-D-葡萄糖醇在制备抗水稻白叶枯病菌活性药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 水稻白叶枯病病害由细菌性病害水稻白叶枯病菌（Xanthomonas oryzae pv.ο巧zae)引起，该病最早于1884年在日本福岗地区发现，后随种植调运，病区不断扩大。 上世界50年代W来，该病范围扩大，发病范围已遍及世界各地水稻产区，而W中国、日本和 印度发生比较严重。我国常年发生水稻白叶枯病病害面积在1000万亩W上，一般减产10%-20%，严重者减产达50 %-80 %，甚至绝收。
[0003] 水稻白叶枯病的防治方法包括抗病种质资源防治、农业防治、化学防治和生物防 治。（1)抗病种质资源防治:植物在漫长的进化过程中，不断与各种病害做斗争，逐渐获得了 一系列的防御机制来保护自己。近年来，随着抗病基因的克隆转化成功，通过作物遗传改良 获得抗病转基因植物来防治病害的研究受到越来越多的关注。（2)农业防治:根据农业生态 系统中各因素的相互作用关系，选择有利于作物生长而抑制病害发生的环境条件。主要包 括种植制度、±地翻耕、播种和田间管理几个环节。（3)化学防治：也称为农药防治，是防治 植物病害最常用的方法。农药具有高效、方便、价位低廉等优点深受人们喜爱，但是其高残 留、高毒性的特点对生态系统的危害也是最大的。（4)生物防治:生物防治既能有效控制病 害而且对环境友好，是目前水稻白叶枯病病害控制研究最多的方向。
[0004] 嚷枯挫和链霉素是我国防治水稻白叶枯病菌最主要的两种药剂，运两种药剂在我 过的使用历史均在Ξ十年W上。田间白叶枯病菌对嚷枯挫的抗药性监视表明我国长期使用 嚷枯挫的地区已出现抗药性(沈光斌，2001)。链霉素被用于田间防治后，抗药性也很快出现 (向平安，2003;李梅云，2007)。鉴于水稻白叶枯病菌对嚷枯挫的抗药性非常容易出现(徐 颖，2010)，且防治水稻白叶枯病菌仍未出现新型有效的药剂，因此水稻白叶枯病病害防治 新型农业抗生素的开发和利用受到越来越多的关注，2006年Velusamy等发现2,4-二乙酷基 间苯Ξ酪(2,4-DAPG)对白叶枯病病害具有防治效果。2015年Li等人发现2-琉基-5取代-1， 3,4-恶二挫/嚷二挫衍生物对白叶枯病原菌具有抗菌活性。2015年Xu等人发现吩嗦-1-簇酸 也对水稻白叶枯病菌具有抑制效果。Diffcidin和Bacilysin对水稻白叶枯病菌的防治活性 也得到研究(Wu et al.，2015)。同时，具有水稻白叶枯病菌防治效果的肤类化e，2006)，脂 肤(Mageshwaran，2012)等活性蛋白也受到了人们的广泛关注。
[0005] 2-Acetamid〇-l, 5-anhy化o-2-deo巧-D-glucitol在 1956年作为一种化学反应中 间产物被H〇ugh，L.首次报道，YASIFUMI OKA邸和Masahiro Kang等人在1988年和1991年先 后发现2-Acetamido-l ,5-anhy化o-2-deoxy-D-glucitol具有抑制小鼠摄食行为的作用。目 前为止，还未见有报道利用2-乙酷氨基-1,5，-脱水-2-脱氧-D-葡萄糖醇（2-Acetamido-l， 5-anhy化o-2-deo:xy-D-glucitol，也称为l-deoxy-N-acetパglucosamine)进行生物防治工 作，作为一种具有特异性抗菌活性的氨基糖巧类类似物，2-Acetamido-l，5-anhyd;r〇-2-deo巧-D-glucitol很有可能成为一种新型的农用抗生素
【发明内容】
[0006] 本发明的一个目的是提供了2-乙酷氨基-1,5，-脱水-2-脱氧-D-葡萄糖醇在制备 抗水稻白叶枯病菌活性药物中的应用，2-乙酷氨基-1，5，-脱水-2-脱氧-D-葡萄糖醇具有专 一抗水稻白叶枯病菌活性，对多种常见病原细菌和病原真菌均没有抗菌活性，为白叶枯病 生物制剂的制备提供了选择性。
[0007] 为了达到W上目的，本发明采用W下技术措施：
[000引本发明所述的2-乙酷氨基-1,5，-脱水-2-脱氧-D-葡萄糖醇（2-Acetamid0-l，5-anhy化o-2-deo巧-D-gluci tol)没有紫外吸收，强极性，分子量为205，分子式为C8H15N05， 化学式如下：
[0009]
[0010] 2-乙酷氨基-1,5，-脱水-2-脱氧-D-葡萄糖醇制备抗水稻白叶枯病菌活性药物中 的应用，包括W2-乙酷氨基-1,5，-脱水-2-脱氧-D-葡萄糖醇作为唯一有效成分或作为有效 成分之一用于制备抗水稻白叶枯病菌活性药物。
[0011] 与现有技术相比，本发明具有W下优点：
[0012] 第一:本发明首次发现其具有抗水稻白叶枯病菌活性；
[0013] 第二:该化合物对多种常见病原细菌和病原真菌均没有抑制活性，对水稻白叶枯 病菌抗菌活性专一；
[0014] 第Ξ:该化合物对水稻白叶枯病菌括抗能力强，其最小抑菌浓度只有23.9化g/ml; 为新型水稻白叶枯病生防制剂的制备提供了新的选择性。
【附图说明】
[0015] 图1为抗水稻白叶枯病菌化合物的抑菌图。
【具体实施方式】
[0016] 下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为报道的微生物学常规操作方法。本 发明实施例所用的2-乙酷氨基-1,5,-脱水-2-脱氧-D-葡萄糖醇（2-Acetamid〇-l ,5-anhy化o-2-deo巧-D-glucitol)按已公开的常规方式合成，其化学式如下：
[0017]
[001引实施例1:
[0019] 管碟法测定2-Acetamid〇-l, 5-anhy化o-2-deoxy-D-glucitol抗水稻白叶枯病菌 最小抑菌浓度
[0020] 原理:根据扩散定律推导，抗生素总量的对数值与抑菌直径的平方成线性关系。当 抗生素浓度达到或高于MIC值时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的抑菌圈。
[0021] Lo巧= kX2+b(Y为浓度，X为抑菌圈直径）
[0022] 1)水稻白叶枯病菌PX099A划线活化得到单菌落，挑取单菌落接种PSA培养基28°C， 18化pm培养至对数生长期。
[0023] 2)配制浓度25,50,100，200yg/mL的2-Acetamid〇-l, 5-anhyd;r〇-2-deoxy-D-glucitol，W水作为阴性对照。
[0024] 3)将1%病原菌加入融化的固体培养基(摇瓶不烫手时加入），在倒好的平板中放 置牛津杯并加入lOOul待测液，28°C溫箱培养，观察结果。最小抑菌浓度为23.9化g/ml。
[0025] 实验例2:
[00%] 管碟法测定2-Acetamid〇-l, 5-anhy化o-2-deo巧-D-glucitol抗常见病原细菌活 性：
[0027] 1)病原细菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙口氏菌活化，挑取单菌落接种LB培养 基37°C，180rpm培养至对数生长期。病原细菌青枯假单胞菌和下香假单胞菌活化，挑取单菌 落接种LB培养基28°C，ISOrpm培养至对数生长期。
[00巧]2)配制浓度lOOyg/mL的2-Acetamid〇-l, 5-anhy化o-2-deoxy-D-glucitol，W水作 为阴性对照。
[0029] 3)将1%病原菌加入融化的固体培养基(摇瓶不烫手时加入），在倒好的平板中放 置牛津杯并加入lOOul待测液，3个重复，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙口氏菌置于37°C培 养，青枯假单胞菌和下香假单胞菌置于28°C培养，结果如表1所示。
[0030] 表1:2-Acetamid〇-l, 5-anhy化〇-2-deox;y-D-glucitol抗细菌谱
[0031]
[0032] +:表示有效果，-:表示无效果
[0033] 实验例3:
[0034] 打孔法测定2-Acetamid〇-l, 5-anhy化〇-2-deo巧-D-glucitol抗常见病原真菌活 性
[0035] 1)病原真菌小麦立枯丝核菌，水稻立枯丝核菌，棉花立枯丝核菌，黑曲霉，油菜灰 霉，小麦赤霉，辣椒灰霉，意大利青霉，油菜核盘菌，香蕉尖胞镶刀菌活化，挑取菌丝接种PDA 培养基28°C培养。
[0036] 2)配制浓度lOOyg/mL的2-Acetamid〇-l ,5-anhy化o-2-deo巧-D-glucitol，W水作 为阴性对照。
[0037] 3)挑取菌块于PDA固体培养基平板中屯、，用打孔器等距离打6个孔，加入20μ1待测 液，3个重复，置于28°C培养，观察结果如表2所示。
[0038] 表2:2-Acetamid〇-l, 5-anhy化o-2-deo巧-D-glucitol抗真菌谱
[0039]
[0040]
[0041 ] +:表示有效果，表示无效果。
【主权项】
1.2- 乙酰氨基-1，5，_脱水-2-脱氧-D-葡萄糖醇在制备抗水稻白叶枯病菌活性药物中 的应用。 2.2- 乙酰氨基-1，5，-脱水-2-脱氧-D-葡萄糖醇作为唯一有效成分在制备抗水稻白叶 枯病菌活性药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了2-乙酰氨基-1,5,-脱水-2-脱氧-D-葡萄糖醇在制备抗水稻白叶枯病菌活性药物中的应用，本发明首次发现2-乙酰氨基-1,5,-脱水-2-脱氧-D-葡萄糖醇具有抗水稻白叶枯病菌活性；将其制备为抗菌药物后，发现其，对水稻白叶枯病菌抗菌活性专一，拮抗能力强，其最小抑菌浓度只有23.90μg/ml，而对多种常见病原细菌和病原真菌均没有抑制活性，因此本发明提供的技术方案为新型水稻白叶枯病生防制剂的制备提供了新的选择性。
【IPC分类】A01N43/16, A01P3/00
【公开号】CN105454235
【申请号】CN201510945749
【发明人】张吉斌, 邵宗泽, 郑龙玉, 李光玉, 蔡珉敏, 孙风芹, 喻子牛, 黄典, 张少博, 陈莉
【申请人】华中农业大学, 国家海洋局第三海洋研究所, 中国大洋矿产资源研究开发协会
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年12月17日