含枯草芽孢杆菌和菌核净的组合物及应用
【技术领域】
[0001 ]本发明属于农药领域，具体是设及一种含从南极分离的枯草芽抱杆菌(Baci 1 Ius SP. )Pc3和菌核净的组合物及其在防治油菜菌核病上的应用。
【背景技术】
[0002] 由核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum)引起的油菜菌核病是油菜生产中的重要 病害之一，常年病株率为10%~30%，严重的可达80% W上，病株一般减产10%~70%。油 菜是产油效率最高的油料作物之一，目前油菜菌核病的主要防治措施是化学防治、农业防 治和生物防治。但至今为止，未发现高效的抗菌核病品种，因此目前对该病害防治主要还是 采用化学防治方法，其中使用最多的是苯并咪挫类杀菌剂。随着化学药剂的常年使用，油菜 菌核病菌对杀菌剂产生了明显的抗药性，从而使化学药剂的防治效果下降，甚至防治失败。 并且随着人们对环境保护、生态平衡、食品安全的重视，传统的化学防治方法已无法满足人 们的需求，因此开拓W高效、无公害微生物复配农药为主的综合防治油菜菌核病的技术体 系迫在眉睫。
[0003] 枯草芽抱杆菌属细菌，属生物杀菌剂，是内生芽抱的革兰氏阳性细菌，通过成功定 殖至植物根际、体表或体内，同病原菌竞争植物周围的营养，分泌抗菌物质抑制病原菌生 长，同时诱导植物防御系统抵御病原菌入侵，从而达到生防的目的。枯草芽抱杆菌杀菌剂克 服了传统化学农药污染环境、危害人畜、易产生抗性等缺点，具有选择性强、安全、原料简单 等优点，在微生物杀菌剂市场中崭露头角。
[0004] 本申请人在中国专利化201310637219.8公开一种枯草芽抱杆菌化3及其在制备防 治植物致病真菌发酵上清液中的应用，所述枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)Pc3的保藏 编号为CCTCC N0:M2013470。枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)Pc3在制备防治植物致病 真菌发酵上清液中的应用，防治的植物致病真菌包括:香蕉炭痘菌、宛氏拟青霉、核盘菌、长 柄链格抱、绿色木霉、立枯丝核菌和镶刀菌等。在油菜菌核病菌防治的盆栽试验中有较好的 生物防治效果，防效可^达到95.6%。枯草芽抱杆菌(8日別11118 3油*1113冲[3发酵上清液 的制备工艺简单，抑真菌谱广，生防效果好。
[0005] 枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)化3,从南极分离得到，抑菌谱较广，对多种病 原真菌尤其是油菜菌核病菌有很强的抑制作用;生长速度快，适应环境能力强，易于在植物 表面定殖，并形成优势种群;能诱导寄主产生抗病性;可分泌多种抗菌物质;对油菜菌核的 防治效果较好。该菌株于2013年10月14日保藏于中国典型培养物保藏中屯、，保藏编号为 CCTCC NO: M2013470，中国典型培养物保藏中屯、的地址为中国，武汉，武汉大学。
[0006] 菌核净(Dirnethachlon)是一种二甲献亚胺类杀菌剂，它的有效成分是(N-3,5-二 氯苯基)下二酸亚胺(NDPS)。具有直接杀菌、内渗治疗、抗雄激素作用、残效期长、杀菌谱广、 防治效果显著等特点，已被广泛应用于多个类群植物病原真菌，如葡萄抱属、青霉属、核盘 菌属、链格抱属、长蠕抱属、丝核菌属、茎点霉属等引起的作物、果树病害防治。对于油菜菌 核病、烟草赤腥病、水稻纹枯病、麦类赤霉病、白粉病W及工业防腐具有良好的防效。
【发明内容】
[0007] 本发明的第一目的在于针对目前生产上大量使用化学农药防治油菜菌核病、环境 污染严重、农药残留超标、油菜品质下降、病原菌抗药性增强，导致防效下降，甚至防治失败 的问题，提供一种对油菜菌核病害有较好防治作用和增效作用，不仅能发挥枯草芽抱杆菌 Pc3有效控制油菜菌核病的作用，还能降低现有病原菌对菌核净潜在抗药性风险的含枯草 芽抱杆菌和菌核净的组合物及应用。
[0008] 本发明的第二目的在于提供所述含枯草芽抱杆菌和菌核净的组合物在制备防治 油菜菌核病的农药中应用。
[0009] 所述含枯草芽抱杆菌化3和菌核净的组合物，W枯草芽抱杆菌化3和菌核净为活性 成分，枯草芽抱杆菌化3与菌核净的质量比为1000:1~1:1000;枯草芽抱杆菌化3与菌核净 的质量比可为500:1~1:500，优选为100:1~1:100，可进一步优选为50:1~1:50，最好为10 :1 ~1:10。
[0010] 所述枯草芽抱杆菌Pc3中活抱子数可为0.1~1000亿/g,优选为0.5~500亿/g,进 一步优选为1~250亿/g，最好为1~100亿/g。
[0011] 在枯草芽抱杆菌化3和菌核净的组合物中加入农药助剂后即可配得可湿性粉剂、 悬乳剂或水乳剂。如向活性成分枯草芽抱杆菌化3和菌核净中加入农药助剂并调节pH值为5 ~7后，配成可湿性粉剂。菌核净可采用原药，枯草芽抱杆菌采用原粉。农药助剂可选自湿润 剂、分散剂、填料、粘结剂、崩解剂等中的至少一种。
[0012] 所述含枯草芽抱杆菌和菌核净的组合物可在制备防治油菜菌核病的农药中应用。
[0013] 本发明的组合物降低了油菜菌核病病原菌对菌核净的潜在抗药性风险，将枯草芽 抱杆菌化3与菌核净组合后，二者之间具有明显的增效作用，同时大大减少了化学农药使用 量，从而使该组合物可W有效应用于油菜菌核病的防治，尤其在制备防治油菜菌核病的农 药中应用。
【具体实施方式】
[0014] 实施例1:枯草芽抱杆菌化3菌株芽抱制剂的制备
[0015] 制备过程:首先将化3接入营养琼脂培养基中振荡培养(200r/min，28°C) 4化，80°C 水浴处理15min，8000;r/min离屯、15min，去上清液获得细菌沉淀，加入10血过滤除菌的MgS〇4 溶液(O.lmol/L)和ImL无菌甘油，振荡混匀后再加入ImL浓度为1.5% (w/v)海藻酸钢溶液， 然后将上述混合液与50g滑石粉及4g化-Iignosulphate充分混合，无菌条件下室溫保存。 经稀释涂板法测定统计，枯草芽抱杆菌化3芽抱制剂活芽抱数为lO^c化/邑。
[0016] 实施例2: 20%可湿性粉剂的配制(各组分为质量份） 枯草芽抱杆菌化3 (I日日亿活抱子/克） 1沿 菌核净 10
[0017] 十二烷基硫酸钢 吾 滲透剂JFC 4 白炭黑 补足至100 (调pH值5~7)
[0018] 实施例3:20%可湿性粉剂对盆栽油菜菌核病的防效（％ )
[0019] 将油菜菌核病菌接种到PDA平板的中央，置于25°C培养箱中培养3d，备用。
[0020] 将枯草芽抱杆菌化3(100亿活抱子/克）与菌核净1:1(质量比）的比例配成20%可 湿性粉剂，单独将枯草芽抱杆菌化3和菌核净配成上述可湿性粉剂作对比，喷雾，于2地后将 准备好的油菜菌核病菌打成直径为0.5cm的菌碟接种油菜叶片的中部，每株接4张叶片，接 10株油菜，菌丝块上加脱脂棉保湿，接种5d后调查发病指数，统计防治效果，20%枯草芽抱 杆菌化3 ?菌核净可湿性粉剂对盆栽油菜菌核病的防效结果见表1。
[0021] 表1
[0023] 盆栽试验结果(表1)表明：20%枯草芽抱杆菌化3 ?菌核净可湿性粉剂对盆栽油菜 菌核病的增效比率为28.84%，该复配组合表现出对抑制油菜菌核病菌的生长有增效作用。
[0024] 实施例4: 20%可湿性粉剂对油菜菌核病田间小区实验的防效（％ )
[0025] 实验油菜品种:浙油18
[00%]将枯草芽抱杆菌化3(100亿活抱子/克）与菌核净按1:1(质量比）的比例配成20% 可湿性粉剂，单独将枯草芽抱杆菌化3和菌核净配成上述可湿性粉剂作对比，于油菜盛花期 喷雾，7d后进行第二次防治，用于防治油菜菌核病菌，单独将枯草芽抱杆菌化3和菌核净配 成上述可湿性粉剂作对比，二次施药后15d调查各个小区发病指数，计算防治效果。20%可 湿性粉剂对油菜菌核病田间小区实验的防效结果见表2。
[0027]表 2 [002引
[0029]田间小区试验结果(表2)表明：20%枯草芽抱杆菌化3 ?菌核净可湿性粉剂对油菜 菌核病的防治增效比率为23.57%，该复配组合表现出对抑制油菜菌核病病原菌的生长有 明显的增效作用，与盆栽实验结果一致。
【主权项】
1. 含枯草芽孢杆菌和菌核净的组合物，其特征在于以枯草芽孢杆菌Pc3和菌核净为活 性成分，枯草芽孢杆菌Pc3与菌核净的质量比为1000:1~1:1000。2. 如权利要求1所述含枯草芽孢杆菌和菌核净的组合物，其特征在于所述枯草芽孢杆 菌Pc3与菌核净的质量比为500:1~1:500，所述枯草芽孢杆菌Pc3中活孢子数为0.1~1000 亿/g。3. 如权利要求2所述含枯草芽孢杆菌和菌核净的组合物，其特征在于所述枯草芽孢杆 菌Pc3与菌核净的质量比为100 :1~1:100，所述枯草芽孢杆菌Pc3中活孢子数为0.5~500 亿/g。4. 如权利要求3所述含枯草芽孢杆菌和菌核净的组合物，其特征在于所述枯草芽孢杆 菌Pc3与菌核净的质量比为50:1~1:50,所述枯草芽孢杆菌Pc3中活孢子数为1~250亿/g。5. 如权利要求4所述含枯草芽孢杆菌和菌核净的组合物，其特征在于所述枯草芽孢杆 菌Pc3与菌核净的质量比为10:1~1:10,所述枯草芽孢杆菌Pc3中活孢子数为1~100亿/g。6. 如权利要求1所述含枯草芽孢杆菌和菌核净的组合物，其特征在于在枯草芽孢杆菌 Pc3和菌核净的组合物中加入农药助剂，配得可湿性粉剂、悬乳剂或水乳剂。7. 如权利要求6所述含枯草芽孢杆菌和菌核净的组合物，其特征在于所述在枯草芽孢 杆菌Pc3和菌核净的组合物中加入农药助剂并调节pH值为5~7。8. 如权利要求6所述含枯草芽孢杆菌和菌核净的组合物，其特征在于所述菌核净采用 原药，枯草芽孢杆菌采用原粉。9. 如权利要求6所述含枯草芽孢杆菌和菌核净的组合物，其特征在于所述农药助剂选 自湿润剂、分散剂、填料、粘结剂、崩解剂中的至少一种。10. 如权利要求1所述含枯草芽孢杆菌和菌核净的组合物在制备防治油菜菌核病的农 药中应用。
【专利摘要】含枯草芽孢杆菌和菌核净的组合物及应用，属于农药领域。所述含枯草芽孢杆菌Pc3和菌核净的组合物，以枯草芽孢杆菌Pc3和菌核净为活性成分，枯草芽孢杆菌Pc3与菌核净的质量比为1000∶1～1∶1000。所述枯草芽孢杆菌Pc3中活孢子数可为0.1～1000亿/g。在枯草芽孢杆菌Pc3和菌核净的组合物中加入农药助剂后即可配得可湿性粉剂、悬乳剂或水乳剂。如向活性成分枯草芽孢杆菌Pc3和菌核净中加入农药助剂并调节pH值为5～7后，配成可湿性粉剂。菌核净可采用原药，枯草芽孢杆菌采用原粉。所述含枯草芽孢杆菌和菌核净的组合物可在制备防治油菜菌核病的农药中应用。CCTCC NO：M201347020131014
【IPC分类】A01N63/00, A01P3/00, A01N37/32
【公开号】CN105475360
【申请号】CN201510997259
【发明人】陈新华, 陈雨, 郭文斌
【申请人】国家海洋局第三海洋研究所, 安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2015年12月28日