蛹虫草的复壮培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体设及一种蛹虫草的复壮培养方法。
【背景技术】
[0002] 蛹虫草是W蚕蛹为宿主的真菌，与冬虫夏草同科同属，化学成分基本一致，其抗肿 瘤成分虫草素含量高于冬虫夏草，且是卫生部批准的新资源食品，具有抗肿瘤、抗病毒、抗 菌、抗炎症、延缓衰老、提高免疫力等多种功效，适用人群广泛。近年来蛹虫草的人工栽培与 开发迅速发展，然而蛹虫草的菌种经过几代培养会出现菌丝体生长慢，转色慢，生活力下 降，出草率下降，出草慢等菌种衰退现象。
【发明内容】
[0003] 针对W上现有问题，本发明提供一种蛹虫草的复壮培养方法，该方法可有效提高 蛹虫草人工栽培的出草率，提高蛹虫草产量，解决菌种退化等问题。
[0004] 本发明所采用的技术方案为：
[0005] -种蛹虫草的复壮培养方法，该方法包括W下步骤：
[0006] (1)配制蛹虫草菌种培养基：
[0007] 菌种培养基W水为溶剂，由如下浓度的成分构成： 蛋白腺 10~20狂心、 酵母粉 3~5g/L 黄豆粉 3~5g/L、 玉米浆 5~i0g/L、 葡萄糖 15~30g/L、
[000引 磯酸二氨钟 I.2~-1.5g/'L、 氯化钢 0.8~L2&'L、 硫酸漢 1~!.2g/L、 生物素 3~5g/L、 20/。卵黄 1.-3 g/L.
[0009] (2)蛹虫草菌种的活化：
[0010] 按1:100的体积比接种蛹虫草菌种，然后在22°C条件下避光静置培养18-3化，再在 22°C、170巧m下继续振荡培养60-7化，使菌液浓度达到每毫升3-5个菌球；
[0011] (3)活化菌种的培养。
[0012] 作为优选配方，所述步骤(1)中菌种培养基由如下浓度的成分构成： 蛋白腺 15g/L、 酵母粉 5 g/U 黄豆粉 3 g化、 玉米浆 6 g化、 葡萄糖 15 g/L、
[0013] 憐酸二氨钟1.2g/L、 氯化钢 1.2 g/L、 硫酸儀 1.2 g/L、 生物素 4g/L、 2%卵黄 1.5 g/L..'
[0014] 作为再优选，上述蛹虫草菌种培养基还可W包括:水解酪蛋白0.5-lg/L、!^-氨基酸 0.1-〇.5g/L〇
[0015] 所述步骤(1)中菌种培养基的制备如下:按重量配方称取各成分，W纯净水将各组 分溶解并充分混匀，定容至1L，然后分装入培养瓶，密封，灭菌，冷却。所述灭菌的条件为： 121°C、1. IMpa灭菌20~45min。
[0016] 所述步骤(2)中蛹虫草菌种为已经明显退化的Cordyceps militaris化化ink。
[0017] 所述步骤(3)中活化菌种的培养具体包括W下步骤：
[0018] (a)按1:50的体积比接种活化的蛹虫草菌体至固体培养基；
[0019] (b)在溫度18°C、湿度75~85 %条件下避光培养4~6天；
[0020] (C)第5~25天：白天12小时日光灯光照，溫度15~18°C(最好为18°C)、湿度80~ 85%，光照强度100~15化X;晚上12小时闭光，溫度13~15°C(最好15°C)、湿度75~85%; [0021 ] (d)第26~45天：白天12小时自然光加日光灯照射，溫度15~18°C(最好为18°C)、 湿度75 %~85 %，光照强度1000~1200LX;晚上12小时闭光，溫度13~15°C (最好15°C)、湿 度75~85%;
[0022] (e)收获长出的子实体，清理干燥。
[0023] 所述步骤(a)中固体培养基的配方为:干蚕蛹粉25~35g/L、大米粉110~130g/L、 玉米粉45~55g/L、憐酸二氨钟1.0~1.5g/L、憐酸二氨钢0.8~1.2g/L、牛肉膏1~1.5g/L。 麦教煮汁5~lOg/L、硫酸儀1~1.2g/L、维生素 B12-3片，pH 6-6.3。
[0024] 本发明蛹虫草菌种培养基配方合理，营养全面均衡，各成分间协同作用良好。使用 本发明方法培养已经明显退化的蛹虫草菌种，可有效改变菌丝体生长慢、转色慢、出草慢， 活力低，出草率低等现象，获得的虫草子实体产量稳定，可有效降低或减缓蛹虫草菌种的退 化现象。
【具体实施方式】
[0025] W下结合实施例对本发明作进一步具体描述，W使本领域的技术人员可W更好地 理解本发明并能予W实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
[0026] 实施例1:
[0027] -、蛹虫草菌种培养基的配制：
[00%]本实施例蛹虫草菌种培养基W水为溶液，由如下浓度的成分构成： 蛋白胳 15 g化、 酵母粉 5 g/L、 黄豆粉 3 g/L、 玉米浆 6 g/L、 葡荀糖 15 g化、
[0029] 磯酸二氨钟1.2 g/L、 氯化纳 1.2 g/L、 硫酸摸 1.2 g/L、 生物素 4 g/L、 2〇/〇卵黄 1.5 g/L。
[0030] 制备如下：按W上重量配方称取各成分，加纯净水充分溶解和混匀，定容至1L，然 后分装入S角培养瓶，每瓶装200ml，121°C、1. IMpa灭菌30~40min，待其自然冷却后备用。
[0031] 二、蛹虫草菌种的活化
[0032] 1、在超净台中使用上述配制的菌种培养基接种已经明显退化的虫草菌体(菌种为 Cordyceps mili1:a;ris(L)Link)，接种比例为1:100。
[0033] 2、在溫度22°〇条件下避光静置培养2411，然后溫度22°〇、170巧111下继续培养60-72h，使菌液浓度达到每毫升3-5个菌球。
[0034] S、蛹虫草的培养
[0035] 采用W下方法进行蛹虫草的无菌培养、收获W及干燥。具体如下：
[0036] 1、在超净台中，每瓶50ml固体培养基接种ImL活化菌液。固体培养基配方如下:干 蚕蛹粉30g/L、大米粉120g/L、玉米粉50g/L、憐酸二氨钟1.2g/L、憐酸二氨钢0.8g/L、硫酸儀 1 g/L、牛肉膏1 g/L、麦教煮汁1 Og/L、维生素 B12片，P册-6.3。
[0037] 2、在溫度18°C、湿度75~85%条件下避光培养4~6天，使虫草菌丝长满培养基表 面，防止其他杂菌在培养基表面生长。
[003引 3、第5~25天光照培养，白天12小时日光灯光照，溫度15~18°C(最好为18°C)、湿 度80~85 %，光照强度控制在100~15化X;晚上12小时闭光，溫度13~15°C(最好15°C )、湿 度75~85 %。每天通风2次，早晚各一次，气溫相对低的时候进行每次20~30分钟。白天晚上 溫差有利于原基的分化形成。
[0039] 4、第26~45天白天12小时光照（自然光加日光灯），溫度15~18°C(最好为18°C)、 湿度75%~85%，光照强度控制在1000~1200LX;晚上12小时闭光，溫度13~15°C(最好15 °C)、湿度75~85%。此时间为子实体生长时期，强光对子实体的生长有利，使其呈棒状生长 并不断成熟、健壮、色泽变为鲜艳的澄黄色，在此生长阶段每天通风2次，早晚各一次，气溫 相对低的时候进行每次20~30分钟。
[0040] 5、收获及再培养，旋开培养瓶盖，綴子用75%酒精消毒后，将子实体取出（只取出 培养基上面的部分），将取出的子实体置于干净的不诱钢盘中，挑选色泽均匀、粗壮、完整的 子实体，去除残存的培养基后置于新的不诱钢盘中称重备用;培养瓶中剩余部分按第26~ 45天的培养条件及方法继续培养，再次收获。
[0041 ] 实施例2:
[0042] 本实施例蛹虫草菌种培养基W水为溶液，由如下浓度的成分构成： 蛋白胳 12g/!_.、- 酵母粉 3;g化、 黄豆粉 3:g化、 玉米浆 5g化、
[0043] 葡萄糖 20g也、 憐酸二氨钟I..2;g/L、 氯化钢 0.8. g/L.、. 硫酸摸 Ig心 生物素 3 gZL,
[0044] 2〇/〇卵黄 1公L。
[0045] 制备如下：按W上重量配方称取各成分，加纯净水充分溶解和混匀，定容至1L，然 后分装入S角培养瓶，每瓶装200ml，121°C、1. IMpa灭菌3