一种生物复合种衣剂及应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及种子处理技术领域，尤其设及W解淀粉芽抱杆菌为有效成份，另加低 毒杀虫剂、杀菌剂W及相关助剂复配加工而成的一种生物复合型种衣剂，适用于玉米、水 稻、小麦等禾本科作物的种子处理。
【背景技术】
[0002] 种衣剂是采用杀虫剂、杀菌剂、除草剂、复合肥料、植物生长调节剂、微量元素与微 生物等作为活性成份，W成膜剂、悬浮剂、抗冻剂、防腐剂和稳定剂等为辅助成份，经过特殊 加工工艺制成的，可直接或经稀释后包裹于种子表面，形成具有一定强度和通透性保护膜 的农药制剂。
[0003] 20世纪30年代，英国在禾谷类作物上首次研制出种衣剂。中国于20世纪80年代开 始对种衣剂与良种包衣技术进行研究，目前已有系列产品大面积推广应用于粮、棉、油各类 农作物的种子。经过包衣的种子，可W防治病虫害，为种子在不良环境条件下提供保护作 用，调控作物生长，提高田间出苗率，增强幼苗长势，从而达到增产的效果。
[0004] 从种衣剂的类型来看，W薄膜型、现配现用型为主，丸化种衣剂较少。国外主要是 研制针对某一问题如杀虫、杀菌、除草等特定种衣剂(单元型种衣剂）。我国则多W复合、多 功能种衣剂为主，即通过包衣，将种子表面作为一个小药库、小肥库来处理，从而提高种衣 剂的功能性，减少种子处理程序，通过一次性地简单、集中处理实现防病、杀虫、施肥等效 果。我国在药肥复合种衣剂方面一直处于国际领先地位。化学种衣剂常用的杀虫剂成份主 要包括克百威、下硫克百威、化虫嘟、氣虫腊、氯氯菊醋、嚷虫嗦等，常用杀菌剂成份主要有 福美双、戊挫醇、締挫醇、=挫酬、克菌丹、多菌灵、咯菌腊等。
[0005] 近几年来，国内才开始生物复合型种衣剂研究。但至今没有任何研究者或生产企 业做过活体生物复合型种衣剂的登记和大面积示范推广。其中主要原因是我国一直追求多 功能、复合型、预制型的种衣剂，生物复合型种衣剂的活体与种衣剂中的杀虫剂、杀菌剂、助 剂等不相容，真菌型的生防功能菌不能与高浓度的杀菌剂相混合，细菌型的生防菌也不能 长时间地与杀真菌剂及助剂相混。长期W来，研究者未找到一种理想的防病、促生长、解憐 的微生物菌株及其与化学种衣剂相容的办法。目前，还尚未见W解淀粉芽抱杆菌与化学农 药制成生物复合种衣剂的报道。
【发明内容】
[0006] 针对现有技术的需要，本发明的目的是提供一种解淀粉芽抱杆菌与化学种衣剂复 合而成的新型种衣剂，具有防病、防虫、耐旱、促生长和增产的特点，适用于玉米、水稻、小麦 等禾本科作物的种子处理。
[0007] 为实现上述发明目的，本发明采取的技术方案如下：
[000引1. 一种生物复合种衣剂，所述生物复合种衣剂由W质量分数计的如下原料组成： 解淀粉芽抱杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No. 5722发酵液25~ 40%，杀虫剂I~5%，杀菌剂I~2%，分散剂2~3%，成膜剂0.5~2%，余量为水。
[0009] 2 .根据技术方案1所述的生物复合种衣剂，其特征在于：所述解淀粉芽抱杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No.5722发酵液由W下方法制备得到：
[0010] (1)将解淀粉芽抱杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No . 57 2 2活化后，按5~10 %接种量，将活化的所述解淀粉芽抱杆菌（Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC齡.5722接种到种子培养基，在培养溫度35°(3、转速 120rpm/min条件下，摇床培养36~48h，得到一级种子液，所述种子培养基为液体LB培养基， pH 7.0~7.2;
[0011] (2)按10~12 %接种量，将一级种子液转接到种子罐内的二级种子培养基，在28~ 37°C，转速100巧m/min，通气量为lOOOL/h，罐压保持在0.02~0.03MPa条件下培养36~48h， 得到二级种子液;所述二级种子培养基由W质量分数计的W下成分组成:淀粉1.5~3%，教 皮粉1~2%，酵母膏0.05~0.3%，蛋白腺0.5~1%，憐矿粉1~2%，MgS〇4 ? 7出0 0.01~ 0.05%，CaCl20.1~0.4%，（NH4)2S040.01~0.04%，余量为水，pH7.0~7.2;
[0012] (3)按10~12%接种量，将二级种子液接种到发酵罐内的发酵培养基，在28~37 °C，转速100巧m/min，通气量为lOOOOL/h、罐压保持在0.02~0.03MPa条件下培养48~72h， 培养后的发酵液中解淀粉芽抱杆菌（BaciIlus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No. 5722的有效活菌数含IX IO8C化/ml时，该发酵液即为所述解淀粉芽抱杆菌(Bacillus 日11171〇11911日'日(31日113化肥010-1(0〔61〇：齡.5722发酵液;所述发酵培养基与步骤(2)所述二 级种子培养基相同。
[0013] 3.根据技术方案1或2所述的生物复合种衣剂，所述杀虫剂为化虫嘟原药、克百威 原药中的一种或两种，所述杀虫剂为化虫嘟原药和克百威原药两种时，化虫嘟原药:克百威 原药的重量比为1:1;
[0014] 所述杀菌剂为福美双原药、戊挫醇原药的一种或两种，所述杀菌剂为福美双原药 和戊挫醇原药时，福美双原药:戊挫醇原药的重量比为1:1;
[0015] 所述分散剂为农乳602、顺0的一种或两种，分散剂为农乳602和顺0时，农乳602 : NNO的重量比为1:1;
[0016] 所述成膜剂是黄原胶、簇甲基纤维素钢、壳聚糖、淀粉的一种或任意两种W上，成 膜剂为黄原胶、簇甲基纤维素钢、壳聚糖、淀粉中任意两种W上时，各原料为等量。
[0017] 4.技术方案域2或3所述的生物复合种衣剂的制备方法，按所述复合种衣剂中各 原料计量分别称取各原料，先将水加热至50°C，将成膜剂揽拌加入水中，完全溶解成成膜溶 剂后，再加入杀虫剂、杀菌剂和分散剂混合均匀，于砂磨机中娠磨4h制备成悬浮剂，最后加 入解淀粉芽抱杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)YN2010-KC CGMCC No.5722发酵液，混 匀即为生物复合种衣剂。
[0018] 5.技术方案1或2或3所述的生物复合种衣剂在玉米种子包衣上的应用。
[0019] 6.根据技术方案5所述的生物复合种衣剂在玉米种子包衣上的应用，其特征在于： 所述生物复合种衣剂与玉米种子的重量比为1:70~1:85。
[0020] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0021] 1、本发明生物复合种衣剂具有防病、防虫、耐旱、促生长和增产多功能。
[0022] 2、本发明生物复合种衣剂能减轻由传统化学种衣剂带来的病原菌抗药性和环境 污染问题。
[0023] 3、本发明生物复合种衣剂可提高传统生物种衣剂的防效和在逆境条件下的稳定 性。
[0024] 4、本发明生物复合种衣剂悬浮性、分散性好、不沉淀，包衣均匀、不脱落;可随加工 随包装，不必惊晒，易于操作;毒性低、对操作人员和环境均很安全。
[00巧]本发明所述的解淀粉芽抱杆菌Bacillus am}doliquefaciens YN2010-KC于2012 年1月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、（简称:CGMCC)，保藏号 为CGMCC No. 5722，并于2012年1月12日检测为存活。该普通微生物中屯、地址：中国北京市朝 阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101。
【具体实施方式】
[0026] 下面结合实施例对本发明提供的一种复合种衣剂进行详细说明。W下实施例并不 对本发明构成限制，本领域技术人员在此基础上改进工艺参数，改变具体的辅料类型等替 换和改动，依旧属于本发明的保护范围。W下实施例无特殊说明为常规方法。
[0027] 实施例1解淀粉芽抱杆菌(BaciIlus amyIoliquefaciens)YN20IO-KC的获得、鉴定 和保臧
[00巧]1、本发明解淀粉芽抱杆菌YN2010-KC的获得
[0029] 1.1 材料
[0030] 采自云南农业大学后山农场玉米根际周围的±壤。
[00川 1.2培养基制备
[0032] 将LB固体培养基和PSA培养基（马铃馨薦糖琼脂培养基)融化，分别倒入灭菌培养 皿，冷却，制成LB和PSA平板。
[0033] 1.3分离培养
[0034] 采用稀释平皿分离法和平板划线分离，将分离纯化所得的一菌株命名为YN2010-KC。
[0(X3日]2、解淀粉芽抱杆菌YN2010-KC的鉴定
[0036] 2.1、形态学鉴定
[0037] 取菌株YN20IO-KC在LB培养基上培养，37°C培养36小时，进行形态观察鉴定，菌体 为杆状、端圆，周生鞭毛、具运动性，产生楠圆形芽抱;在LB和PSA平板上菌落圆形、淡茶褐 色、菌落中央颜色略深、隆起、表面干燥有權皱。与《常见细菌系统鉴定手册》（东秀珠等编 著，科学出版社，2001年）中描述的芽抱杆菌属形态特征基本一致，判断菌株YN2010-KC属于 芽抱杆菌(BaciIlus spp.)。
[0038] 2.2、生理生化鉴定
[0039] 菌株革兰氏染色、芽抱染色、淀粉水解、葡萄糖利用、巧樣酸盐利用、V-P反应、接触 酶反应、硝酸盐还原、明胶液化等均呈阳性。
[0040] 3、解淀粉芽抱杆菌YN2010-KC的保藏
[004。 经上述鉴定表明所分离获得的菌株为解淀粉芽抱杆菌（B a C i 1 1 U S amyloliquefaciens)，其代号为YN2010-KC，所述的解淀粉芽抱杆菌Bacillus amyloliquefaciensYN2010-KC于2012年1月12日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中屯、（简称:CGMCC)，保藏号为CGMCC No. 5722，并于2012年I月12日检测为存活。该 普通微生物中屯、地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院