一种壳寡糖银杏酚酸复合生物农药的制备方法
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及一种壳寡糖银杏酚酸复合生物农药的制备方法，属于农药制备领域。
【背景技术】
[0002]天然产物壳寡糖具有广谱抑菌活性，对人畜无毒，且能够诱导植物产生抗病性，因此可开发成为安全高效的新型生物农药。生物农药(指用生物活体、或生物代谢过程产生的具有生物活性的物质、或从生物体中提取的物质，用来防治农林作物病虫草鼠害，并可以制成商品上市流通的制剂，包括杀菌剂，生物杀虫剂，农用抗生素，生态农药等。
[0003]植物病原菌的感染是引起植物病害、造成作物减产的重要原因，而甲壳素酶对病原真菌具有抑制生长的作用，壳聚糖和壳寡糖在植物中是激活甲壳素酶的诱导物此外，壳聚糖和壳寡糖还能调节植物基因的关闭和开放，促进植物细胞的活化，刺激植物的生长。作为生物农药，壳寡糖在防病和抗病方面有着多种机制。
[0004]银杏外种皮中银杏酚酸对甜菜夜蛾的作用方式多种多样，包括胃毒、触杀、拒食、内吸等。胃毒和触杀试验处理随着时间的延长，杀虫效果增强，0.lg/L质量浓度下处理6天后，胃毒效果达96.7%，触杀效果达93.3%，胃毒作用略大于触杀作用。拒食试验表明，银杏酚酸的拒食作用在药后2天开始表现明显，且随着质量浓度的升高，效果增强，其机制可能是干扰试虫的正常蜕皮和影响成虫的羽化。从内吸试验看，银杏酚酸具有一定的内吸作用，随着质量浓度的升高，内吸作用增强，叶片比根部更易吸收传导银杏酚酸。田间试验表明，银杏综合来看，银杏酚酸是适于害虫防治的新型生物农药，对减少害虫防治中化学农药的使用以及促进无公害蔬菜的发展具有重要的现实意义。
【发明内容】
[0005]本发明主要解决的技术问题:针对目前传统农药大多是化学合成的剧毒成分，不易降解，使用后随雨水等散逸后，会严重污染周边环境，对鱼鸟以及人类都会产生危害，且长期使用后害虫会对其产生抗药性，致使杀虫效果减弱等缺陷，提供了一种从银杏外果皮中提取出银杏酚酸，与壳聚糖酶解后产生的壳寡糖进行混合复配，浓缩后制得壳寡糖银杏酚酸复合生物农药，用纯天然生物提取物代替化学合成的剧毒物质制成农药，避免了不易生物降解化学品对环境造成的污染，并且壳寡糖可有效诱导植物抗病性，持续时间长，超高效的优点，也解决了因害虫抗药性致使药效减弱的不足，是一种安全高效的新型生物农药。
[0006]为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是:
(1)称取10?20g壳聚糖粉末，装入500mL烧杯中，加入100?1501^蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀后静置溶胀25?35min后，加入120?130mL浓度为lmol/L的醋酸溶液，放置在磁力搅拌机上，以300?400r/min的转速搅拌I?2h，直至壳聚糖粉末充分溶解；
(2)将上述制得的壳聚糖溶液倒入500mL容量瓶中，加入pH为5?6，浓度为0.2mol/L的醋酸和醋酸钠缓冲溶液定容至500mL，制得壳聚糖胶体，将其转入陶瓷酶解罐中，加入3?5g壳聚糖酶移入水浴锅中，加热升温至50?60°C保温酶解10?12h，酶解结束后升温至90?100°C沸水浴10?15min，灭酶处理；
(3)待灭酶后冷却至室温，用浓度为0.3mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至8?9去除大分子壳聚糖，再将其放入卧式离心机中，以7000?8000r/min的转速离心10?15min分离得到上清液，放入旋转蒸发器中，升温至60?70°C，旋蒸浓缩至原体积的2/3，得到壳寡糖浓缩液，备用；
(4)称取100?200g晒干的银杏外种皮，放入气流粉碎机进行粉碎后装入带有搅拌器、温度计和冷凝回流装置的500mL三口烧瓶中，加入200?300mL浓度为0.5mol/L的氢氧化钾乙醇溶液，常温冷提12?14h后，油浴加热至80?90°C冷凝回流3?5h，收集冷凝液；
(5)取100?150mL冷凝液和50?60mL蒸馈水均勾混合后装入蒸馈装置中，于70?80°C下蒸馏去除乙醇后，用质量浓度为10%的盐酸溶液调节pH至2?3，再加入1?20g氯化钠，用100?200mL乙醚萃取2?3次，蒸馏回收乙醚后得银杏酚酸；
(6 )将50?I OOmL上述备用的壳寡糖溶液通过滴液漏斗分3?5次逐滴滴入银杏酚酸中，控制滴加速度使其20?30min内滴加完毕，放入超声分散仪中以200?300W的功率分散10?20min后移入浓缩罐，减压至900?100Pa浓缩至原体积的1/3后即得一种壳寡糖银杏酚酸复合生物农药。
[0007]本发明的具体应用方法:将本发明制得的壳寡糖银杏酚酸复合生物农药用蒸馏水稀释至100?120倍，混合均匀后装入农药喷雾器中，对农作物进行人工喷洒，喷洒量为50?80g/亩，经检测，施药7?8天后害虫死亡率达90?95%。
[0008]本发明的有益效果是:本发明制得的农药用纯天然生物提取物代替化学合成的剧毒物质制成农药，避免了不易生物降解化学品对环境造成的污染，并且壳寡糖可有效诱导植物抗病性，持续时间长，超高效的优点，也解决了因害虫抗药性致使药效减弱的不足。
【具体实施方式】
[0009]称取10?20g壳聚糖粉末，装入500mL烧杯中，加入100?150mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀后静置溶胀25?35min后，加入120?130mL浓度为lmol/L的醋酸溶液，放置在磁力搅拌机上，以300?400r/min的转速搅拌I?2h，直至壳聚糖粉末充分溶解;将上述制得的壳聚糖溶液倒入500mL容量瓶中，加入pH为5?6，浓度为0.2mol/L的醋酸和醋酸钠缓冲溶液定容至500mL，制得壳聚糖胶体，将其转入陶瓷酶解罐中，加入3?5g壳聚糖酶移入水浴锅中，加热升温至50?60°C保温酶解10?12h，酶解结束后升温至90?100°C沸水浴10?15min，灭酶处理;待灭酶后冷却至室温，用浓度为0.3mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至8?9去除大分子壳聚糖，再将其放入卧式离心机中，以7000?8000r/min的转速离心10?15min分离得到上清液，放入旋转蒸发器中，升温至60?70°C，旋蒸浓缩至原体积的2/3，得到壳寡糖浓缩液，备用；称取100?200g晒干的银杏外种皮，放入气流粉碎机进行粉碎后装入带有搅拌器、温度计和冷凝回流装置的500mL三口烧瓶中，加入200?300mL浓度为0.5mol/L的氢氧化钾乙醇溶液，常温冷提12?14h后，油浴加热至80?90°C冷凝回流3?5h，收集冷凝液；取100?150mL冷凝液和50?60mL蒸馈水均勾混合后装入蒸馈装置中，于70?80°C下蒸馈去除乙醇后，用质量浓度为10%的盐酸溶液调节pH至2?3，再加入10?20g氯化钠，用100?200mL乙醚萃取2?3次，蒸馏回收乙醚后得银杏酚酸;将50?10mL上述备用的壳寡糖溶液通过滴液漏斗分3?5次逐滴滴入银杏酚酸中，控制滴加速度使其20?30min内滴加完毕，放入超声分散仪中以200?300W的功率分散10?20min后移入浓缩罐，减压至900?100Pa浓缩至原体积的I/3后即得一种壳寡糖银杏酚酸复合生物农药。
[0010]实例I
称取1g壳聚糖粉末，装入500mL烧杯中，加入10mL蒸馏水，用玻璃棒搅拌均匀后静置溶胀25min后，加入120mL浓度为lmol/L的醋酸溶液，放置在磁力搅拌机上，以300r/min的转速搅拌Ih，直至壳聚糖粉末充分溶解;将上述制得的壳聚糖溶液倒入500mL容量瓶中，加入pH为5，浓度为0.2mol/L的醋酸和醋酸钠缓冲溶液定容至500mL，制得壳聚糖胶体，将其转入陶瓷酶解罐中，加入3g壳聚糖酶移入水浴锅中，加热升温至50°C保温酶解10h，酶解结束后升温至90°C沸水浴lOmin，灭酶处理;待灭酶后冷却至室温，用浓度为0.3mol/L的氢氧化钠溶液调节PH至8去除大分子壳聚糖，再将其放入卧式离心机中，以7000r/min的转速离心1min分离得到上清液，放入旋转蒸发器中，升温至60°C，旋蒸浓缩至原体积