一种植物组培抗菌培养基及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及植物组培的技术领域，具体涉及一种植物组培抗菌培养基及其制备方法。
【背景技术】
[0002]植物组培技术作为一种植物快速繁殖的技术已经被广泛运用到植物幼苗的扩繁中。植物组织培养过程，关键环节在于植物组织培养的污染率，其次在于组织培养过程中的生芽率和生根率。长期以来，为了降低植物组织培养过程中的污染率，通常采用外植体灭菌，提高人为操作过程中的严格程度来控制污染率。然而此种方法不仅耗时、耗力，而且不能有效降低组培苗的污染率。因此，建立一种有效的植物组培苗抗菌培养基，对于降低植物组培过程中的污染率具有重要的意义，本案由此产生。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种植物组培抗菌培养基及其制备方法。在植物组织培养过程中添加抗菌剂，降低植物组织培养过程中的污染率，提高组织培养中新芽的增长率和生根率，有效提高经济植物组培的经济效益。
[0004]为了达成上述目的，本发明采用的主要技术方案如下:
一种植物组培抗菌培养基，由初代培养基和增殖继代培养基组成;其中，初代培养基含有以下按质量百分数计的组分:羧化壳聚糖0.2%?0.4%、抗生素0.002%?0.004%、恶霉灵0.005%?0.015%、乌洛托品0.02%?0.04%、霜霉威盐酸盐0.06%?0.08%、MS+6_BA(6-苄基嘌呤)0.3%?0.4%、萘乙酸0.06%?0.08%、生长素0.05%?0.07 %;增殖继代培养基含有以下按质量百分数计的组分:羧化壳聚糖0.2%?0.4%、抗生素0.002%?0.004%、恶霉灵0.005%?0.015%、乌洛托品0.02%?0.04%、霜霉威盐酸盐0.06%?0.08%、MS+6_BA 0.08%?0.1%、萘乙酸0.05%?0.07%、矮壮素 0.3%?0.4 %。
[0005]更进一步的，一种植物组培抗菌培养基，由初代培养基和增殖继代培养基组成;初代培养基由以下质量百分数的组分组成:蔗糖2%?3%、琼脂0.8%?1.0%、羧化壳聚糖0.2%?0.4%、抗生素0.002%?0.004%、恶霉灵0.005%?0.015%、乌洛托品0.02%?0.04%、霜霉威盐酸盐0.06%?0.08%、MS+6-BA(6-苄基嘌呤)0.3%?0.4%、萘乙酸(NAA)0.06%?0.08%、生长素(IAA) 0.05%?0.07 %、氯化锌0.01%?0.02%、维生素B1 0.05%?0.10%、维生素B6 0.06%?0.08%，余量为蒸馏水；以上各原料质量百分数之和为100%;增殖继代培养基由以下质量百分数的组分组成:蔗糖2%?3%、琼脂0.8%?I.0%、羧化壳聚糖0.2%?0.4%、抗生素0.002%?0.004%、恶霉灵0.005%?0.015%、乌洛托品0.02%?0.04%、霜霉威盐酸盐0.06%?0.08%、MS+6-BA 0.08%?0.1%、萘乙酸(ΝΑΑ)0.05%?0.07%、矮壮素(CCC) 0.3%?0.4 %、维生素Bi0.04% ?0.06%、维生素 Β2 0.04%?0.06%、维生素B6 0.02%?0.04%、维生素B9 0.01% ?0.02%，余量为蒸馏水；以上各原料质量百分数之和为100%。
[0006]所述的抗生素为两性霉素B和青霉素按质量比1:1组成的混合物。
[0007]—种植物组培抗菌培养基的制备方法:
1)初代培养基的配制方法为:
将蔗糖、琼脂加入蒸馏水中搅拌灭菌，灭菌后待其冷却至50_60°C，在无菌条件下，将羧化壳聚糖、抗生素、恶霉灵、乌洛托品、霜霉威盐酸盐加入并充分混匀，在无菌条件下，再将MS+6-BA、萘乙酸、生长素、氯化锌、维生素B1、维生素B6加入并充分混匀，制得初代培养基；
2)增殖继代培养基的制备方法为:
将蔗糖、琼脂加入蒸馏水中搅拌灭菌，灭菌后待其冷却至50-60°C，在无菌条件下，将羧化壳聚糖、抗生素、恶霉灵、乌洛托品、霜霉威盐酸盐加入并充分混匀，在无菌条件下，再将MS+6-BA、萘乙酸、矮壮素、维生素B1、维生素B2、维生素B6和维生素B9加入并充分混匀，制得增殖继代培养基。
[0008]一种植物组培抗菌培养基的使用方法为:
选择健壮的植物组织外植体，将外植体在无菌条件下接种至初代培养基中，按照常规植物组培的培养条件进行培养，培养30天后，将形成的大量愈伤组织和芽在无菌条件下转移至增殖继代培养基中，按照常规植物组培的培养条件进行培养，培养45天后，即可获得大量的健壮芽苗。
[0009]本发明的有益效果在于:
(1)本发明在初代培养基中加入抗菌剂，降低了植物组织初代培养过程中的污染率，提高生芽率；
(2)本发明进一步在增殖继代培养基中加入抗菌剂，降低了植物组织继代培养过程中的污染率，提高组培苗的生根率。
【具体实施方式】
[0010]为充分公开本发明的一种植物组培抗菌培养基的制备方法，以下结合实施实例加以说明。
[0011]实施例一
初代培养基配制:将20g蔗糖、8g琼脂加入IL蒸馏水中搅拌灭菌，灭菌后待其冷却至55°C左右，在无菌条件下，将2g羧化壳聚糖、20mg抗生素、50mg恶霉灵、200mg乌洛托品、600mg霜霉威盐酸盐加入并充分混匀；在无菌条件下，再将3g MS+6-BA、600mg NAA、500mg IAA,10mg氯化锌、500mg维生素B1、600mg维生素B6加入并充分混匀，即制得初代培养基。
[0012]增殖继代培养基配制:将20g蔗糖、Sg琼脂加入IL蒸馏水中搅拌灭菌，灭菌后待其冷却至55°C左右，在无菌条件下，将2g羧化壳聚糖、20mg抗生素、50mg恶霉灵、200mg乌洛托品、600mg霜霉威盐酸盐加入并充分混匀；在无菌条件下，再将800mg MS+6_BA、500mg NAA,3g CCC、400mg维生素B1、400mg维生素B2、200mg维生素B6、100mg维生素Bg加入并充分混勾；
选择健壮的植物组织外植体，将外植体在无菌条件下接种至初代培养基中，按照常规植物组培的培养条件进行培养，培养30天后，将形成的大量愈伤组织和芽在无菌条件下转移至增殖继代培养基中，按照常规植物组培的培养条件进行培养，培养45天后，即可获得大量的健壮芽苗。
[0013]按照本发明的植物抗菌培养基进行培养与常规培养基相比，本发明的培养基在植物组织初代培养、继代培养中污染率分别为0.0I %、O %，而常规培养基的污染率为5.6 %、4.9%;生芽率与生根率，本发明的植物抗菌培养基进行培养是常规培养基的2.8倍和3.2倍。
[0014]实施例二
初代培养基配制:将25g蔗糖、9g琼脂加入IL蒸馏水中搅拌灭菌，灭菌后待其冷却至55°C左右，在无菌条件下，将3g羧化壳聚糖、30mg抗生素、10mg恶霉灵、300mg乌洛托品、700mg霜霉威盐酸盐加入并充分混匀;在无菌条件下，再将3.5g MS+6-BA、700mg NAA、600mg IAA,150mg氯化锌、750mg维生素B1、700mg维生素B6加入并充分混匀，即制得初代培养基。
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