一种烟粉虱成虫室内生测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于农业生产中植物保护领域，特别是涉及一种烟粉虱成虫的室内生测方 法。
【背景技术】
[0002] 烟粉虱Bemi sia tabaci (Gennadius )是属于同翅目（Homoptera)粉虱科 (Aleyrodidae)的多食性昆虫，目前广泛分布于100多个国家和地区，危害的寄主植物已 超过600种。烟粉虱除直接刺吸植物汁液、分泌蜜露引发霉污病外，更主要的是可传播110 多种植物病毒并引发多种植物病毒病。当前，烟粉虱的防治仍以化学防治为主，但其抗药性 发展迅速，已对常用化学农药产生了高水平的单一抗性和交互抗性。
[0003] 害虫抗药性监测是害虫抗性有效治理的重要基础。生物测定作为害虫抗药性监测 的重要技术手段，它不仅能反映害虫对哪些杀虫药剂产生了抗性，而且能准确给出抗性程 度，对于及时调整抗性治理策略具有重要的实践意义。
[0004] 关于烟粉虱生物测定技术主要有内吸法、琼脂保湿浸叶法、玻璃瓶药膜法、黄粘胶 卡法等。其中内吸法要求操作人员有较高的技术，因此应用不多。琼脂保湿浸叶法，只能测 定胃毒活性，不能测定触杀活性。黄粘胶卡法溶剂昂贵、体积大、操作复杂。玻璃瓶药膜法， 虽然操作简便，但只能测定触杀毒性，不能测定胃毒抗性。
[0005] 目前关于检测药剂对烟粉虱成虫生物活性的方法，主要是用C02麻醉成虫后，转移 到养虫盒中的叶片上，这种方法不易操作，释放C0 2的浓度和时间不易把握，对操作人员的 经验有较高的要求，稍有不慎则造成烟粉虱成虫的非药剂毒力死亡，这容易造成对所测试 药剂的毒力水平的误判。
【发明内容】
[0006] 为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种烟粉虱成虫室内生物 测定的方法。为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下： 一种烟粉虱成虫室内生物测定的方法，其特征在于，所述方法步骤包括准备塑料养虫 盒、在盒中放入试虫、冷冻、喷施药剂、在人工气候箱内观察。
[0007] 进一步地，所述方法包括如下步骤： ① 按照比例配制不同浓度梯度的药剂； ② 制备1%琼脂，将琼脂平铺在塑料养虫盒底部； ③ 将黄瓜叶片背面朝上置于琼脂上，以保持叶片新鲜； ④ 将烟粉虱成虫轻轻拍入塑料养虫盒，迅速用保鲜膜封口、扎紧，用解剖针扎数孔； ⑤ 将装有烟粉虱成虫的塑料养虫盒置于-18 °C冰箱内，使烟粉虱成虫冻僵2-3 min却 对死亡率没有明显影响； ⑥ 将步骤⑤塑料养虫盒迅速置于potter喷雾塔下喷施药剂，然后用保鲜膜重新封口， 扎紧； ⑦将步骤⑥塑料养虫盒放入人工气候箱内，在光周期16: 8，温度27°C，湿度70 %条件 下，分别饲养48 h后观察、记载塑料养虫盒内烟粉虱的死亡情况，同时每天观察叶片保鲜及 合成培养基的发霉情况。
[0008] 进一步地，所述琼脂的配制需加入硝酸钙Ca(N03)2 4g、磷酸二氢钾KH2P〇4 0.5g、硫 酸镁MgS〇4 0.5g、硫酸链霉素50 mg以为叶片保鲜； 进一步地，所述成虫置于_18°C冰箱内30 s; 进一步地，所述potter喷雾塔的压力和喷施剂量分别为68.9 Kpa和2ml; 本发明的有益效果在于:采用将成虫置于_18°C冰箱内30s的方法，使烟粉虱成虫冻僵 2-3min，操作简便，且能够减少生测过程湿度及人为操作对供试烟粉虱产生的损伤及误差。 然后采用poter喷雾塔作为施药工具施药，施药精确，能够充分模拟田间施药方式。本发明 提供的烟粉虱成虫室内生物测定方法，能够了解烟粉虱田间种群对不同作用机理药剂的抗 性水平及其分布，进而更科学地指导田间用药。
[0009] 本发明提供的技术方案，既保证了烟粉虱的对照存活率，又保证了施药的精确，同 时操作简便，且免除了开放外界环境不确定因素对实验结果的影响，符合生物实验保持单 一变量的原则。
【具体实施方式】
[0010] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0011] 实施例1 啶虫脒对田间烟粉虱的室内毒力水平评估 1、研究对象:设施温室内黄瓜植株上的烟粉虱成虫。
[0012] 2、方法:供试药剂为浓度大于20%的啶虫脒制剂，采用potter喷雾塔法喷施烟粉 虱成虫和叶片，进行室内毒力测定。
[0013] 2.1不同浓度药液的配制及稀释:在预试验的基础上用纯净水将倍内威制剂稀释6 个浓度，溶液中加入0.1% Trixon-100作为乳化剂，用含同等体积的Trixon-100清水为对 照。
[0014] 2.2生物测定叶片的选择及1%琼脂的制备：制备含有硝酸钙〇8(勵3)248、磷酸二氢 钾KH 2P〇4 0.5g、硫酸镁MgS〇4 0.5g、硫酸链霉素50 mg的1%琼脂，将琼脂平铺在塑料养虫盒底 部。将黄瓜叶片背面朝上置于琼脂上。
[0015] 2.3毒力测定供试烟粉虱的选择:选用设施温室内黄瓜叶片上烟粉虱成虫，将烟粉 虱成虫轻轻拍入塑料养虫盒内，每个养虫盒内大约拍入20头成虫。迅速用保鲜膜封口、扎 紧，用解剖针扎数孔以透气。
[0016] 2.4试虫的冷冻处理:将装有烟粉虱成虫的塑料养虫盒置于-18°C冰箱内，使烟粉 虱成虫冻僵2_3min，却对死亡率没有明显影响； 2.5 potter喷雾塔法喷施烟粉虱成虫和叶片:将步骤2.4冷冻处理的塑料养虫盒打开， 迅速置于potter喷雾塔下喷施药剂2ml，所用压力为68.9 Kpa，然后用保鲜膜重新封口，扎 紧； 2.6结果检查及死亡标准判断:48h后检查结果，用毛笔轻触烟粉虱，只有一条腿动或 者完全不动的记为死亡，以对照死亡率小于10%为有效测定。每个浓度4次重复，数据采用 POLO分析软件，计算LC5Q。（结果如表1)。
[0017]表1啶虫脒对田间烟粉虱的室内毒力测定结果
从表1结果可以看出，利用本发明的生物测定方法，对照烟粉虱成虫的死亡率小于10%， 说明-18°c处理烟粉虱成虫2-3min的方法对烟粉虱成虫的死亡率影响甚微。所使用的含有 硝酸钙Ca(N03)2、磷酸二氢钾KH 2P〇4、硫酸镁MgS〇4和硫酸链霉素的1%琼脂，能够长时间有效 地保持黄瓜叶片的新鲜度，没有发霉和腐烂，该方法同样具有操作简便，重复性好，结果准 确等优点。
[0018] 实施例2 采用琼脂保湿浸叶法评估啶虫脒对田间烟粉虱的毒力水平 1、研究对象:设施温室内黄瓜植株上的烟粉虱成虫。
[0019] 2、方法:供试药剂为浓度大于20%的啶虫脒制剂，采用琼脂保湿浸叶法处理叶片 饲喂烟粉虱成虫，进行室内毒力测定。
[0020] 2.1不同浓度药液的配制及稀释:在预试验的基础上用纯净水将倍内威制剂稀释6 个浓度，溶液中加入0.1% Trixon-100作为乳化剂，用含同等体积的Trixon-100清水为对 照。
[0021 ] 2.2生物测定叶片的选择及1%琼脂的制备:制备1%的琼脂，将琼脂平铺在塑料养虫 盒底部。将黄瓜叶片用各浓度的药液浸渍处理10 s，晾干，背面朝上置于琼脂上。
[0022] 2.3毒力测定供试烟粉虱的选择:选用设施温室内黄瓜叶片上烟粉虱成虫，将烟粉 虱雌成虫用C02短暂麻醉后，转移到养虫盒中的小圆叶片上，每养虫盒20-30只雌成虫，迅 速用保鲜膜封口、扎紧，用解剖针扎数孔以透气。当烟粉虱从麻醉状态恢复过来后，将养虫 盒倒置于(25 ± 1) °C、相对湿度65%、光照14:10 (L: D)的培养箱中。
[0023] 2.4结果检查及死亡标准判断：48h后检查结果，用毛笔轻触烟粉虱，只有一条腿 动或者完全不动的记为死亡，以对照死亡率小于10%为有效测定。每个浓度4次重复，数据 采用POLO分析软件，计算LC5Q。（结果如表1)。
[0024]实施例2表明，目前的用C02麻醉成虫后，转移到养虫盒中的叶片上的方法，操作误 差较大，不易掌握释放c〇2的浓度和时间，该方法受操作人员的经验和手法限制较大，存在 对照死亡率高的问题。另外由于使用了叶片浸渍法，只能够评估药剂的胃毒活性，药液没有 喷施到虫体表面，缺少了该药剂触杀效果的评估，无法准确判定实验结果。
[0025]虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在 本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因 此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1. 一种烟粉虱成虫室内生物测定的方法，其特征在于，所述方法步骤包括准备塑料养 虫盒、在盒中放入试虫、冷冻、喷施药剂、在人工气候箱内观察。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤:①将1%的琼脂平 铺在塑料养虫盒底部，将黄瓜叶片背面朝上置于琼脂上，以保持叶片新鲜;②将烟粉虱成虫 轻轻拍入塑料养虫盒，迅速用保鲜膜封口、扎紧，用解剖针扎数孔;③将装有烟粉虱成虫的 塑料养虫盒置于_18°C冰箱内，使烟粉虱成虫冻僵2-3min却对死亡率没有明显影响;④将步 骤③塑料养虫盒迅速置于potter喷雾塔下喷施药剂，然后用保鲜膜重新封口，扎紧;⑤将步 骤④塑料养虫盒放入人工气候箱内，在光周期16:8，温度27°C，湿度70%条件下，饲养48h后 观察、记载塑料养虫盒内烟粉虱的存活率，同时每天观察叶片保鲜及合成培养基的发霉情 况。3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述琼脂的配制需加入硝酸钙Ca(N03)2 4g、磷酸二氢钾KH2P〇4 0.5g、硫酸镁MgS〇4 0.5g、硫酸链霉素50 mg以为叶片保鲜。4. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述成虫置于-18°C冰箱内30 s; 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述potter喷雾塔的压力和喷施剂量分别为 68.9 Kpa和2ml。
【专利摘要】本发明涉及植物保护领域，具体提供了一种烟粉虱成虫的室内生测方法，采用将成虫置于-18℃冰箱内30s的方法，使烟粉虱成虫冻僵2-3min，操作简便，且能够减少生测过程中湿度及人为操作对供试烟粉虱产生的损伤及误差。然后采用potter喷雾塔作为施药工具施药，施药精确，能够充分模拟田间施药方式。本发明提供的烟粉虱成虫室内生物测定方法，能够了解烟粉虱田间种群对不同作用机理药剂的抗性水平及其分布，进而更科学地指导田间用药。
【IPC分类】A01K67/033
【公开号】CN105532582
【申请号】CN201510994541
【发明人】王泽华, 魏书军, 宫亚军, 陈金翠, 金桂华, 康总江, 朱亮
【申请人】北京市农林科学院
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2015年12月28日